河南省部分地區(qū)豬弓形蟲分離株基因型研究和弓形蟲RH株的細(xì)胞培養(yǎng).pdf

1、弓形蟲病是由剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)引起的一種人獸共患原蟲病。弓形蟲宿主種類十分廣泛,常見的動(dòng)物和人均可感染發(fā)病,家畜中以豬最為易感且發(fā)病率和死亡率較高。豬弓形蟲病由于感染部位較多,臨床表現(xiàn)復(fù)雜,確診困難,給早期診斷及有效預(yù)防帶來較大困難。
　　 弓形蟲的宿主范圍廣泛,在不同動(dòng)物體內(nèi)的弓形蟲可能具有不同的生物學(xué)特征,因此研究弓形蟲分子遺傳學(xué)及分子流行病學(xué)對(duì)弓形蟲病的診斷和防制具有重要意義。早期對(duì)弓形蟲分離

2、株的分類只是根據(jù)弓形蟲對(duì)鼠的致病力強(qiáng)弱將其分為強(qiáng)毒株和弱毒株。隨著寄生蟲分子遺傳學(xué)的發(fā)展,現(xiàn)已從研究弓形蟲的表型發(fā)展到研究其基因型。從基因水平上研究弓形蟲的分類、分布以及毒力等特征,已初步形成了將弓形蟲蟲株分為多個(gè)基因型的觀點(diǎn),并在一系列的研究中逐漸摸索出弓形蟲基因型在不同地區(qū)以及宿主的分布規(guī)律。從分子水平診斷弓形蟲將為弓形蟲分子遺傳學(xué)進(jìn)一步研究以及弓形蟲病的防制提供資料。
　　 1.為了掌握河南省豬弓形蟲病的感染情況,作者在河

3、南省鄭州、信陽(yáng)、駐馬店、焦作、洛陽(yáng)、南陽(yáng)等地區(qū)各個(gè)門診及豬場(chǎng)收集了疑似弓形蟲病豬的病料1647份,應(yīng)用我實(shí)驗(yàn)室建立的巢氏PCR進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查,該方法主要用于檢測(cè)弓形蟲的B1基因。通過PCR方法確診來尋找陽(yáng)性病例。結(jié)論:尋找到31株陽(yáng)性蟲株,陽(yáng)性率為1.88％,且都是來自于仔豬。
　　 2.為了方便在實(shí)驗(yàn)室條件下開展弓形蟲入侵細(xì)胞及其免疫逃避機(jī)制等方面深入研究,我們開展了用MDCK和BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)弓形蟲的研究。于感染后

4、每隔12h分別取出培養(yǎng)皿中的蓋玻片進(jìn)行吉姆薩染色,二甲苯透明后,顯微鏡下觀察弓形蟲體外增殖情況。結(jié)果顯示,弓形蟲對(duì)宿主細(xì)胞的選擇性不強(qiáng),可以感染MDCK和BHK-21細(xì)胞,且在感染后第7天出現(xiàn)了繁殖高峰。
　　 3.為從分子水平了解河南省豬弓形蟲分離株的基因型,作者選擇5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn):TuB2,W35,TgM-A,B18和B17,對(duì)本試驗(yàn)中分離株和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株RH株進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,并對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,了解微衛(wèi)星的重復(fù)序

5、列數(shù)后與標(biāo)準(zhǔn)基因型比較分析,最后確定河南省豬源弓形蟲分離株基因型。微衛(wèi)星位點(diǎn)分析結(jié)果顯示,RH株為基因型I,與國(guó)外報(bào)道的一致。而NY.5、NY-8、NY-9、NY-11、NY-13和NY-16株TUB2基因重復(fù)序列是(TG)9,TG重復(fù)數(shù)與以往報(bào)道有所不同。W35基因位點(diǎn)的重復(fù)序列是(TC)4CC(TC)2(TG)2,又與非典型型情況類似。綜合分析這六個(gè)蟲株的五個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn),屬于新的基因型。本項(xiàng)研究證明河南省豬源弓形蟲包含了新的基因型。