蓮子草假隔鏈格孢菌(Nimbya alternantherae)生防潛力的研究.pdf

1、從自然發(fā)病的空心蓮子草（Alternanthera philoxeroides）莖葉組織上分離到20個菌株，分別命名為NCH1、NCH2……NCH20。該菌在PSA培養(yǎng)基上初分離時菌落灰褐色，產(chǎn)生赤褐色色素，氣生菌絲無色至淺褐色，菌落反面黃褐色，不產(chǎn)生分生孢子。經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學植物保護學院殺菌劑實驗室鑒定，該菌為蓮子草假隔鏈格孢菌（Nimbya alternantherae）。從中選取一個菌株NCH1，對其生物學性狀進行研究，NCH1在O

2、A、PCA、V8、ZZJZ等培養(yǎng)基上菌落的生長速度較快，培養(yǎng)13d時菌落直徑為7.90±0.00cm，而在Czapek培養(yǎng)基上菌落的生長速度最慢，培養(yǎng)13d時菌落直徑僅為2.66±0.62cm。在培養(yǎng)7d、14d、21d時，用顯微鏡觀察NCH1菌株在十種培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢情況，發(fā)現(xiàn)NCH1菌株在十種培養(yǎng)基上均不能產(chǎn)孢。
　　 對蓮子草假隔鏈格孢菌最佳產(chǎn)毒菌株及其最佳產(chǎn)毒條件進行了研究。結(jié)果表明：NCH4為最佳產(chǎn)毒菌株，光頭稗（Ech

3、inochloa colonum）在NCH4菌株培養(yǎng)濾液中的萌發(fā)率最低，為23.33％；根長和芽長的抑制率最高，分別為96.51％和100.00％。根據(jù)最佳產(chǎn)毒菌株NCH4對其產(chǎn)毒條件進行研究。結(jié)果表明：不同的培養(yǎng)時間、溫度、光照和pH值所得到的含毒濾液的毒力差異顯著，最佳的產(chǎn)毒條件為：25℃、pH7.0、全黑暗（24D）、振蕩（150rmp）培養(yǎng)7d。
　　 將蓮子草假隔鏈格孢菌按最佳產(chǎn)毒條件進行培養(yǎng)得到含毒濾液，將含毒濾液用

4、等體積的乙酸乙酯充分萃取5次，合并乙酸乙酯相，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在35℃條件下減壓濃縮至干，即得粗毒素。利用種子生測法，研究蓮子草假隔鏈格菌粗毒素對農(nóng)田12種雜草的生物活性及6種作物的安全性。結(jié)果表明，該粗毒素對12種田間常見雜草種子萌發(fā)及根長、芽長均有抑制作用，且隨粗毒素溶液濃度的提高抑制作用相應增強。在濃度為50μg·mL-1時，粗毒素對光頭稗、薺菜（Capsella bursa-pastoris）、升馬唐（Digitaria cili

5、aris）的萌發(fā)表現(xiàn)出一定的抑制作用，在粗毒素濃度為400μg·mL-1時，對薺菜、千金子（Leptochloa chinensis）的萌發(fā)具有強烈的抑制作用，萌發(fā)率均為0。在濃度為50μg·mL-1時，粗毒素對鱧腸（Eclipta prostrata）、光頭稗、升馬唐、菵草（Beckmannia syzigachne）、看麥娘（Alopecurus aequalis）等雜草的根長、芽長也表現(xiàn)出一定的抑制作用。在粗毒素濃度為400μg·

6、mL-1時，對薺菜、千金子、早熟禾、反枝莧等雜草的根長和芽長有很強的抑制作用，其根長和芽長抑制率分別為：100％，100％；100％，100％；92.11％，74.49％；90.31％，59.60％。粗毒素對不同作物萌發(fā)的影響也有差異，對花生（Arachis hypogaea）的萌發(fā)無抑制作用，對花生的根長還有一定的促進作用。粗毒素濃度≦400μg·mL-1時，對油菜（Brassia campestris）的萌發(fā)及根長、芽長的生長無抑制

7、作用。粗毒素對小麥（Triticum aestivum）不安全。
　　 通過硅膠柱層析（200-300目）和Sephadex LH-20對蓮子草假隔鏈格孢菌粗毒素進行分離純化。結(jié)果表明，100:2（三氯甲烷：甲醇）（v/v）洗脫部分活性最強。在濃度為400μg·mL-1時，對薺菜（C.bursa-pastoris）根長、芽長的抑制作用最強，抑制率分別達到71.99％和62.83％；100:8（三氯甲烷：甲醇）（v/v）洗脫部分活

8、性也較強，在濃度為400μg·mL-1時，對薺菜根長、芽長的抑制作用分別達到64.86％和47.20％。這表明粗毒素中具有除草活性的物質(zhì)主要集中在100:2和100:8兩個極性組分中。從100:2中分離得到單一化合物，白色針狀晶體。通過13C-NMR、1H-CMR和MS等鑒定該化合物為2-乙?；?3，5-二羥基苯乙酸。在濃度為600μg·mL-1時，2-乙?；?3，5-二羥基苯乙酸對薺菜根長、芽長的抑制作用最強，抑制率分別達到73.54