杜仲法尼基焦磷酸合成酶基因超量表達(dá)對(duì)含膠細(xì)胞的影響研究.pdf

1、杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）系杜仲科Eucommiaceae杜仲屬Eucommia植物，既是中國(guó)特有的藥用植物，更是溫帶最具開發(fā)前景的膠源植物。本研究主要對(duì)杜仲遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化，構(gòu)建了杜仲法尼基焦磷酸合成酶（EuFPS）基因植物表達(dá)載體，并導(dǎo)入杜仲。采用光鏡和透射電鏡觀察了轉(zhuǎn)EuFPS基因杜仲含膠細(xì)胞。獲得結(jié)果如下，
　?。?）EuFPS基因表達(dá)載體的構(gòu)建
　　用限制性內(nèi)切酶（EcoRI和Ba

2、mHI）雙酶切植物表達(dá)載體pSH737和含有目的基因的pUC-FPS，定向連接得到重組質(zhì)粒pSH-FPS。該載體以CaM35S為強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EuFPS基因、報(bào)告基因gus和選擇標(biāo)記基因NPTII。
　?。?）農(nóng)桿菌介導(dǎo)的杜仲遺傳轉(zhuǎn)化
　　對(duì)影響杜仲遺傳轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，以15天苗齡杜仲無(wú)菌苗的下胚軸為外植體，在含50μmol/L乙酰丁香酮的MS重懸液中侵染8min，用無(wú)菌濾紙吸干，接入共培養(yǎng)基上，在28℃暗培養(yǎng)2

3、d后，置于含頭孢霉素300mg/L的MS＋6-BA（0.8mg/L）+NAA（0.1mg/L）培養(yǎng)基中脫菌生長(zhǎng)3d，再接種至篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選條件是卡那霉素50mg/L。對(duì)279株抗性植株進(jìn)行GUS組織活性檢測(cè)和PCR檢測(cè)，獲得17株轉(zhuǎn)基因植株。
　?。?）轉(zhuǎn)基因杜仲含膠細(xì)胞顯微觀察
　　通過光鏡和透射電鏡首次觀察了轉(zhuǎn)FPS基因杜仲含膠細(xì)胞，觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)EuFPS基因杜仲葉片中比野生型有更多的橡膠顆粒，這些橡膠顆粒在野生型