不同溫度對(duì)虎奶菇胞內(nèi)胞外蛋白差異表達(dá)的影響.pdf

1、自溶現(xiàn)象廣泛存在于各種微生物中，但有關(guān)食藥用菌虎奶菇(Pleurotustuberr—regium(Fr．)Sing)菌絲體自溶的研究國內(nèi)外均未見報(bào)道。本文通過篩選獲得引起自溶的較佳條件，用該條件進(jìn)行虎奶菇自溶處理，最終應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組分析方法研究其自溶。 首先利用液體發(fā)酵法培養(yǎng)虎奶菇菌絲體，分別研究了不同溫度、pH值與滲透壓等因素對(duì)其菌絲體自溶的影響。結(jié)果表明，虎奶菇菌絲體較佳的單因素自溶條件分別為溫度40℃、pH9.0、Na

2、Cl濃度3—4％。 然后比較了虎奶菇菌絲體蛋白質(zhì)的三種提取方法以尋找一種適用于蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳的高分辨率的提取方法。結(jié)果表明TCA/丙酮法提取所得到的蛋白質(zhì)樣品的雙向電泳圖譜效果最佳。同時(shí)獲得制備胞外蛋白樣品的方法。 最終以40℃處理為實(shí)驗(yàn)組，10℃處理為對(duì)照組，采用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究虎奶菇的自溶現(xiàn)象，得到22個(gè)明顯上調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)MALDI—TOF/MS檢測及肽指紋圖譜(PMF)分析，其中8個(gè)蛋白質(zhì)得到鑒定，表

3、現(xiàn)為：蛋白酶體參與泛素—蛋白酶體通路，β—1，3—glucanosyltransferase及微管蛋白與細(xì)胞壁的更新、細(xì)胞壁的修補(bǔ)相關(guān)，蛋白酶和內(nèi)切葡聚糖酶促進(jìn)細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)自然降解，14—3—3蛋白參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此推測菌絲體自溶過程如下：當(dāng)營養(yǎng)條件缺乏或高溫下，往往出現(xiàn)細(xì)胞正常代謝失控，細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)解體，這時(shí)蛋白酶體承擔(dān)了降解細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的任務(wù)，蛋白酶和內(nèi)切葡聚糖酶等水解酶的大量釋放促進(jìn)細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)降解，獲得的自溶產(chǎn)物為其后代