嗜水氣單胞菌J-1株不同培養(yǎng)條件下胞外蛋白的比較蛋白組學(xué)研究.pdf

1、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila Ah）廣泛存在于自然環(huán)境中是重要的水生動(dòng)物病原菌，可引起魚類的敗血癥，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)還是重要的人畜共患病病原菌，嚴(yán)重危害了人類的身體健康?，F(xiàn)有的滅活疫苗和減毒活疫苗的免疫效果不夠理想，因此，研發(fā)新型的亞單位疫苗成為當(dāng)務(wù)之急。
　　 對(duì)于致病菌而言，胞外蛋白起著重要的作用，可以分泌到胞外直接與宿主免疫系統(tǒng)發(fā)生作用，誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)力。本試驗(yàn)以嗜

2、水氣單胞菌J-1株為研究對(duì)象，運(yùn)用比較蛋白組學(xué)的技術(shù)和方法，分析不同培養(yǎng)條件下其胞外蛋白的差異表達(dá)譜。
　　 通過二維凝膠電泳技術(shù)，獲得嗜水氣單胞菌J-1株在28℃和37℃兩個(gè)培養(yǎng)溫度下的胞外蛋白表達(dá)譜，通過比較分析找出差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，成功鑒定出8個(gè)差異蛋白，包括：絲氨酸蛋白酶、溶血素、延伸因子 Tu、半乳糖 ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子、主要外膜蛋白、假定蛋白AHA＿06

3、16和氣溶素前體。其中，2個(gè)溫度上調(diào)蛋白，6個(gè)溫度下調(diào)蛋白。
　　 通過比較分析嗜水氣單胞菌J-1株在28℃培養(yǎng)時(shí)，8h和14h的二維電泳圖譜，以及37℃培養(yǎng)時(shí)，8h和14h的二維電泳圖譜，間接分析細(xì)菌在這兩個(gè)溫度條件下，對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定期胞外蛋白的差異。分別鑒定出28℃培養(yǎng)條件下的7個(gè)差異蛋白和37℃培養(yǎng)條件下的5個(gè)差異蛋白，包括：絲氨酸蛋白酶、胞外蛋白酶、核酸酶、D-核糖轉(zhuǎn)運(yùn)子亞基RbsB、精氨酸ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子、腐胺ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子、

4、精氨酸-鳥氨酸綁定蛋白、溶血素和假定蛋白AHA＿0616。利用在線信號(hào)肽預(yù)測(cè)軟件SignalP3.0進(jìn)行分析，結(jié)果顯示所有差異蛋白均含有典型的信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，從生物信息學(xué)的角度說(shuō)明鑒定蛋白均為胞外蛋白。
　　 已有研究證明，本試驗(yàn)鑒定出的差異蛋白，如氣溶素、溶血素、主要外膜蛋白、胞外蛋白酶，都是具有免疫原性的蛋白，可用于基因工程亞單位疫苗的生產(chǎn)制作。試驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)溫度的變化以及不同培養(yǎng)階段生長(zhǎng)環(huán)境的改變都對(duì)嗜水氣單胞菌J-1株的