不同切應力條件下體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈的蛋白組學研究.pdf

1、血管重建是高血壓、動脈粥樣硬化等心血管疾病共同的發(fā)病基礎和基本的病理過程。低切應力在動脈粥樣硬化血管重建發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，然而其分子機制仍未闡明。開展力學因素作用條件下的心血管蛋白質(zhì)組研究，尋找力學因素對心血管作用的藥物靶標或生物標記物，有助于我們從蛋白質(zhì)水平更全面地了解血管重建的分子機制，為臨床防治心血管疾病提供新的力學生物學依據(jù)。 本文應用雙向凝膠電泳(2-DE) 結合質(zhì)譜分析與生物信息學分析的蛋白質(zhì)組學方法，比較了正

2、常切應力(15 dyn/cm2) 與低切應力(5 dyn/cm2) 條件下體外培養(yǎng)的大鼠胸主動脈蛋白表達的差異；同時對蛋白質(zhì)組學分析篩選出的血管差異表達蛋白Rho-GDIα，應用熒光定量PCR技術和蛋白免疫印跡技術進行組織水平的驗證；應用細胞聯(lián)合培養(yǎng)流動腔系統(tǒng)和蛋白免疫印跡技術，檢測了正常切應力與低切應力條件下，大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs) 與內(nèi)皮細胞(ECs)的Rho-GDIα表達變化。結果顯示：①2-DE圖譜中，2倍以上差異表達

3、的蛋白點有78個，質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索確定了其中43個蛋白的身份，大多數(shù)差異蛋白的功能涉及細胞骨架、信號傳遞、能量代謝和細胞外基質(zhì)分子等，其中Rho家族磷酸化的調(diào)節(jié)蛋白Rho-GDIα在低切應力組低表達；②與正常切應力組相比，低切應力條件下體外應力培養(yǎng)血管組織的Rho-GDIα在RNA和蛋白水平的表達均下降，與蛋白質(zhì)組學分析結果一致；③與正常切應力組相比，低切應力條件下聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs與ECs的Rho-GDIα蛋白表達均明顯降低，這一