预览加载失败,请重新加载试试~

副粘病毒Tianjin株主要蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)及其反向遺傳學(xué)的初步研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩77頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、副粘病毒Tianjin株是仙臺病毒的一個(gè)新基因型,仙臺病毒為嚙齒類動物(鼠類)致死性病原體,在鼠群中可引起致死性肺炎,死亡率高。1999年天津醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)的普通棉耳狨猴群體中爆發(fā)急性呼吸道傳染病,多種抗生素治療無效,多數(shù)于發(fā)病后5~10天內(nèi)死亡,尸體解剖顯示肺組織灶性壞死。然而在普通棉耳狨猴呼吸道疾病流行期間,飼養(yǎng)在同一實(shí)驗(yàn)中心的各種實(shí)驗(yàn)用鼠無一例發(fā)病,而該毒株卻導(dǎo)致了普通棉耳狨猴群體的嚴(yán)重下呼吸道感染,表明此病毒在致病性和

2、宿主親嗜性上具有某些新的特點(diǎn),即對嚙齒類動物低致病性,而對普通棉耳狨猴高致病性。進(jìn)一步采用雙抗體夾心ELISA法,檢測嚴(yán)重下呼吸道感染兒童支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的病毒抗原,陽性率為1.92%,表明副粘病毒Tianjin株還可能是人類,特別是兒童下呼吸道感染的重要病原體。 近年來,人類新發(fā)傳染性疾病的病毒病原體(Emerging pathogens)幾乎都是來源于動物,這些病毒跨越種屬感染人類,對人類的健康構(gòu)成了巨大威脅,

3、受到全社會的高度關(guān)注。闡明病毒的高致病性和跨種傳播機(jī)制,對于防控這類傳染病的發(fā)生和流行意義重大。在自然條件下,副粘病毒的宿主特異性限制了種間的傳播。宿主特異性受多因素的影響,病毒表面的糖蛋白起識別和吸附細(xì)胞受體的作用,是決定宿主特異性的主要因素。因此,我們對副粘病毒Tianjin株的糖蛋白--HN蛋白進(jìn)行了真核表達(dá),并對該病毒進(jìn)行了反向遺傳學(xué)的初步研究,為進(jìn)一步研究高致病性和跨種屬傳播機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)分兩部分。在第一部分工

4、作中,構(gòu)建了副粘病毒Tianjin株包膜糖蛋白HN及其分段基因HN1、HN2和HN3的真核表達(dá)載體pEGFP-C2-HN、pEGFP-C2-HN1、pEGFP-C2-HN2和pEGFP-C2-HN3,將其轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。Western blot檢測蛋白的表達(dá),用原位ELISA法和紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn),檢測各表達(dá)蛋白的抗原性和生物活性。結(jié)果在熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染了重組質(zhì)粒pEGFP-C2-HN、pEGFP-C2-HN1、pEGFP-C2-H

5、N2和pEGFP-C2-HN3的細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。Western blot方法可檢測到HN、HN1、HN2和HN3蛋白的表達(dá)。原位ELISA法測得重組HN蛋白、HN1蛋白和HN2蛋白有抗原性,而重組HN3蛋白抗原性較弱。紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn),顯示出HN蛋白和HN3蛋白具有吸附紅細(xì)胞的能力,HN1、HN2蛋白未見明顯的紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。 在第二部分工作中,用9-11日齡的雞胚將副粘病毒Tianjin株進(jìn)行傳代,提取雞胚尿囊液中病毒RNA,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論