豬瘟病毒疫苗株反向遺傳學(xué)改造并拯救及疫苗在病毒進(jìn)化中的影響.pdf

1、豬瘟是由一種對(duì)家豬和野豬均有高致病性、高傳染性,該病的爆發(fā)會(huì)導(dǎo)致重大的經(jīng)濟(jì)損失,并損害國內(nèi)及國際間的豬產(chǎn)品貿(mào)易。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將此病列為 A類傳染病,其病原體豬瘟病毒也被《國際生物武器公約》列為重要?jiǎng)游锷锟植啦≡w或動(dòng)物生物戰(zhàn)劑,因此受到國際社會(huì)的高度重視。
　　豬瘟病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬,它是直徑40~60nm,有包膜的單股正鏈RNA病毒,基因組大小為12.3kb,包括5′、3′非編碼區(qū)和一個(gè)開放閱讀框(ORF)

2、。該ORF編碼3898個(gè)氨基酸的多聚蛋白,然后由宿主細(xì)胞信號(hào)肽酶、豬瘟病毒的絲氨酸蛋白酶、Npro和NS2的自切割等共轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾作用,產(chǎn)生12個(gè)蛋白:4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(C、Erns、E1、E2),8個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B),同時(shí)至少還有兩個(gè)前體蛋白 E2-p7和NS2-3存在(20-27)。其中E2在感染過程中作為主要的中和抗原誘導(dǎo)機(jī)體的免疫反應(yīng)
　　本論文第一部分,

3、總結(jié)豬瘟病毒的分子生物學(xué)最新研究進(jìn)展。
　　第二部分,通過生物信息分析并結(jié)合Van Rijn P的研究找到抗原性較強(qiáng)的E2部分序列,然后構(gòu)建原核表達(dá)載體PET30a-c-E2,表達(dá)并純化E2蛋白,通過免疫小鼠得到E2蛋白抗血清。
　　第三部分,改造質(zhì)粒PMC18C-CSFV,在CSFV cDNA后添加丁肝核酶和T7終止子,改造后的質(zhì)粒命名為PMC18C-CSFV-rz-T7,并用于豬瘟病毒兔化弱毒株的體外拯救。質(zhì)粒的改造使C

4、SFV兔化弱毒株cDNA能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄,該反向遺傳改造,簡化了體外轉(zhuǎn)錄過程和避免體外 RNA易降解的缺點(diǎn)。隨后在PMC18C-CSFV-rz-T7質(zhì)?；A(chǔ)上進(jìn)行分段改造,構(gòu)建兩個(gè)新質(zhì)粒(PMC18C-CSFV-rz-T7(含 NS5B)、PMC18C-CSFV-rz-T7(不含 NS5B)),這是以探究單鏈的豬瘟病毒的基因組能否像流感病毒那樣以分段的形式存在,以區(qū)分野生毒株和疫苗株,為凈化豬瘟病毒奠定基礎(chǔ)。但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, NS5