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文檔簡(jiǎn)介
1、本試驗(yàn)提取禽呼腸孤病毒天津地區(qū)分離株(ARV T-98)和內(nèi)蒙古地區(qū)分離株(ARV C-98)病毒的總RNA。參考GenBank中禽呼腸孤病毒176株(ARV176)的L2基因序列設(shè)計(jì)了5對(duì)特異性引物。應(yīng)用一步法RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增禽呼腸孤病毒的L2基因。將回收純化得到的目的DNA與pEASY-T1載體鏈接,轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞,用藍(lán)白斑法篩選陽性重組質(zhì)粒,再用PCR法鑒定陽性重組質(zhì)粒,然后將PCR鑒定為陽性的重組質(zhì)粒送英濰捷基(上海)貿(mào)易
2、有限公司(invitrogen)進(jìn)行序列測(cè)定。應(yīng)用DNAstar軟件將測(cè)定序列進(jìn)行拼接并與參考序列進(jìn)行比較分析。結(jié)果顯示L2基因節(jié)段長(zhǎng)3830bp,均含有完整的開放性閱讀框(Open Reading Frame,ORF),編碼區(qū)位于15~3794bp。測(cè)定的禽呼腸孤病毒C-98、T-98株的L2基因序列已經(jīng)登錄GenBank,登錄號(hào)分別是JN641888、JN641889。
ARV C-98和ARV T-98的L2基因核苷酸及
3、其推導(dǎo)的氨基酸的同源性均很高,分別為99.7%,99.4%;與ARV176、ARV S1133、ARV138、和ARV AVS-B的L2基因核苷酸同源性在83.9%~99.7%之間,推導(dǎo)的氨基酸同源性在96.4%~99.6%之間;與MRV BYD1、MRV SC-A、MRV T3D和MRV T4N的L1基因核苷酸同源性在53.4%~54.4%之間,推導(dǎo)的氨基酸同源性在53.9%~54.4%之間。系統(tǒng)發(fā)生樹表明,ARV C-98、ARV
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