養(yǎng)殖斑石鯛黑身病的病原病理學(xué)及藥物干預(yù)下腸道菌群結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、近年來，斑石鯛（Oplegnathus punctatus）在養(yǎng)殖過程中發(fā)生一種黑身病，患病魚體色變黑、活力差、攝食減少、身體消瘦，解剖發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)有大量無色或淡黃色積水，腸道透明萎縮，肝臟充血易碎，鰓絲出血黏連，累計(jì)死亡率達(dá)50~90％，給斑石鯛養(yǎng)殖業(yè)帶來重大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重威脅了斑石鯛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本研究針對(duì)斑石鯛黑身病，從病原學(xué)、病理學(xué)和腸道菌群結(jié)構(gòu)變化等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，以明確該病的發(fā)病原因，并為臨床防控提供理論依據(jù)。

2、r>　　利用傳統(tǒng)細(xì)菌分離方法，從自然發(fā)病斑石鯛的腸、肝、鰓、腎等器官中分離得到一株優(yōu)勢(shì)細(xì)菌 OD1，經(jīng)人工感染試驗(yàn)表明該菌為斑石鯛黑身病的致病菌。對(duì)致病菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)該菌是革蘭氏陰性桿菌，電鏡下發(fā)現(xiàn)該菌的具有一條端生鞭毛，大小為1.8~2×0.8~1μm（長×寬）。生理生化特征及16S rDNA基因序列鑒定顯示該病原菌與哈維氏弧菌（Vibrio harv eyi）相似性高達(dá)99%。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌對(duì)四環(huán)素、新生霉素、強(qiáng)力霉素

3、和氟苯尼考等藥物高度敏感，對(duì)頭孢拉定、克拉霉素等藥物中度敏感，對(duì)青霉素、紅霉素等藥物不敏感。
　　對(duì)自然發(fā)病的斑石鯛進(jìn)行病理學(xué)觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患病斑石鯛大部分組織器官都發(fā)生了不同程度的病理變化。其中，消化系統(tǒng)的病變最為嚴(yán)重，腸道黏膜上皮細(xì)胞壞死、脫落，上皮細(xì)胞核游離，幾乎無完整細(xì)胞結(jié)構(gòu)；肝臟內(nèi)血細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞萎縮、破裂，肝細(xì)胞核膨脹，胞內(nèi)細(xì)胞器減少；膽囊外膜溶解消失，平滑肌變性成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。除消化系統(tǒng)外，其他主要器官也發(fā)生了不同程

4、度的病變，鰓絲間細(xì)胞溶解消失，上皮細(xì)胞增生相融，超微病理顯示鰓絲上皮細(xì)胞膜溶解，核膜消失，核質(zhì)濃縮；腎臟腎小管腔閉合、萎縮幾近消失，腎小球充血腫脹；脾臟組織疏松，血細(xì)胞壞死堆積；心肌纖維扭曲，細(xì)胞腫脹斷裂等。
　　同時(shí)為了深入研究斑石鯛黑身病的病原與發(fā)病原因，探究患黑身病及藥物治療后斑石鯛腸道菌群的結(jié)構(gòu)變化，本研究采用Illumina HiSeq PE250高通量測(cè)序的方法對(duì)健康、亞健康、典型黑身病和口服氟苯尼考條件下的斑石鯛腸道

5、以及養(yǎng)殖水體和顆粒餌料中的細(xì)菌多樣性及群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析和相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，不同健康程度及氟苯尼考干預(yù)下斑石鯛腸道中細(xì)菌均以變形菌門、厚壁菌門和軟壁菌門為主，且對(duì)應(yīng)的OTU占樣品全部OTU的比例均達(dá)到85%以上。黑身病的發(fā)生可影響斑石鯛腸道中豐度最高的前20種優(yōu)勢(shì)細(xì)菌種類的排名次序，其中變形菌門中的弧菌屬的相對(duì)豐度顯著增加，且隨著弧菌屬豐度的增加，斑石鯛的黑身病癥狀也逐漸加重。餌料中添加氟苯尼考投喂斑石鯛能使患病魚腸道弧菌屬的豐度從