養(yǎng)殖斑石鯛黑身病的病原病理學及藥物干預下腸道菌群結構分析.pdf

1、近年來，斑石鯛（Oplegnathus punctatus）在養(yǎng)殖過程中發(fā)生一種黑身病，患病魚體色變黑、活力差、攝食減少、身體消瘦，解剖發(fā)現(xiàn)腹腔內有大量無色或淡黃色積水，腸道透明萎縮，肝臟充血易碎，鰓絲出血黏連，累計死亡率達50~90％，給斑石鯛養(yǎng)殖業(yè)帶來重大的經(jīng)濟損失，嚴重威脅了斑石鯛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本研究針對斑石鯛黑身病，從病原學、病理學和腸道菌群結構變化等方面進行了系統(tǒng)研究，以明確該病的發(fā)病原因，并為臨床防控提供理論依據(jù)。

2、r>　　利用傳統(tǒng)細菌分離方法，從自然發(fā)病斑石鯛的腸、肝、鰓、腎等器官中分離得到一株優(yōu)勢細菌 OD1，經(jīng)人工感染試驗表明該菌為斑石鯛黑身病的致病菌。對致病菌進行形態(tài)學分析發(fā)現(xiàn)該菌是革蘭氏陰性桿菌，電鏡下發(fā)現(xiàn)該菌的具有一條端生鞭毛，大小為1.8~2×0.8~1μm（長×寬）。生理生化特征及16S rDNA基因序列鑒定顯示該病原菌與哈維氏弧菌（Vibrio harv eyi）相似性高達99%。藥敏試驗結果表明，該菌對四環(huán)素、新生霉素、強力霉素

3、和氟苯尼考等藥物高度敏感，對頭孢拉定、克拉霉素等藥物中度敏感，對青霉素、紅霉素等藥物不敏感。
　　對自然發(fā)病的斑石鯛進行病理學觀察，結果發(fā)現(xiàn)，患病斑石鯛大部分組織器官都發(fā)生了不同程度的病理變化。其中，消化系統(tǒng)的病變最為嚴重，腸道黏膜上皮細胞壞死、脫落，上皮細胞核游離，幾乎無完整細胞結構；肝臟內血細胞浸潤，肝細胞萎縮、破裂，肝細胞核膨脹，胞內細胞器減少；膽囊外膜溶解消失，平滑肌變性成網(wǎng)狀結構。除消化系統(tǒng)外，其他主要器官也發(fā)生了不同程

4、度的病變，鰓絲間細胞溶解消失，上皮細胞增生相融，超微病理顯示鰓絲上皮細胞膜溶解，核膜消失，核質濃縮；腎臟腎小管腔閉合、萎縮幾近消失，腎小球充血腫脹；脾臟組織疏松，血細胞壞死堆積；心肌纖維扭曲，細胞腫脹斷裂等。
　　同時為了深入研究斑石鯛黑身病的病原與發(fā)病原因，探究患黑身病及藥物治療后斑石鯛腸道菌群的結構變化，本研究采用Illumina HiSeq PE250高通量測序的方法對健康、亞健康、典型黑身病和口服氟苯尼考條件下的斑石鯛腸道

5、以及養(yǎng)殖水體和顆粒餌料中的細菌多樣性及群落結構進行了解析和相關性分析。結果顯示，不同健康程度及氟苯尼考干預下斑石鯛腸道中細菌均以變形菌門、厚壁菌門和軟壁菌門為主，且對應的OTU占樣品全部OTU的比例均達到85%以上。黑身病的發(fā)生可影響斑石鯛腸道中豐度最高的前20種優(yōu)勢細菌種類的排名次序，其中變形菌門中的弧菌屬的相對豐度顯著增加，且隨著弧菌屬豐度的增加，斑石鯛的黑身病癥狀也逐漸加重。餌料中添加氟苯尼考投喂斑石鯛能使患病魚腸道弧菌屬的豐度從