冬凌草組織培養(yǎng)、毛狀根誘導(dǎo)和離子束處理冬凌草種子當(dāng)代效應(yīng)初探.pdf

1、冬凌草Rabdosia Rubescens(Hcnsi)Hara又名冰凌草,屬唇形科香茶菜屬,多年生草本或亞灌木植物,主要分部在我國河南、四川、安徽等中西部地區(qū)。以地上部分入藥,據(jù)分析,其主要內(nèi)含物為冰凌草甲素、乙素、丙素和丁素,其中冰凌草甲素和乙素有明顯的殺菌作用,為其有效抗腫瘤成分,對(duì)多種癌病均有一定療效,被譽(yù)為“中藥里的盤尼西林”。此外,冬凌草還具有水土保持和園林觀賞作用[1-2]。近年來由于亂砍濫伐造成了野生冬凌草資源的匱乏。<

2、br>　　本課題運(yùn)用植物組織培養(yǎng)技術(shù),毛狀根誘導(dǎo)技術(shù)和離子束處理技術(shù),結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)、薄層層析法和高效液相色譜法等,考察了不同激素配比對(duì)冬凌草組培苗生長和愈傷組織誘導(dǎo)的影響;利用發(fā)根農(nóng)桿菌A4感染冬凌草葉片誘導(dǎo)其產(chǎn)生毛狀根;并對(duì)冬凌草種子進(jìn)行離子束輻照,研究不同劑量的離子束照射對(duì)冬凌草組培苗生長和冬凌草甲素含量的影響。通過研究得出如下結(jié)果:
　　1.以MS為基本培養(yǎng)基,運(yùn)用正交設(shè)計(jì)方法,利用植物組織、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),成功地建立了冬凌草

3、的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系。研究出:不定芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS+0.2 mg·L-1 IBA+0.1 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 NAA;生根培養(yǎng)基為1/2 MS+1 mg·L-1 IBA+1 g·L-1活性炭;以冬凌草莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L-16-BA+2 mg·L-12,4-D。
　　2.利用發(fā)根農(nóng)桿菌A4感染冬凌草葉片,采用L9(34)正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化冬凌草的毛狀根誘導(dǎo)條件。結(jié)果表

4、明:葉片最佳預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為4天,發(fā)根農(nóng)桿菌浸染葉片的最佳時(shí)間為20min,最佳共培養(yǎng)時(shí)間1d。
　　3.利用4種不同劑量離子束對(duì)冬凌草種子進(jìn)行輻照,對(duì)其發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)和由其長成的組培苗苗高,葉片數(shù)和葉片面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,得出:經(jīng)過處理的種子發(fā)芽勢(shì)比沒有經(jīng)過處理的種子發(fā)芽勢(shì)低,而處理過的種子發(fā)芽率比未經(jīng)處理的都要高。另外,處理劑量為1×1016 N+/cm2時(shí)種子的發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率都較其他劑量高,其發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率隨注入劑量的增加先降低,

5、隨后又有升高,呈“馬鞍型”;不同劑量N+注入的冬凌草種子在無菌條件下生長成的組培苗,株高、葉片數(shù)和葉面積隨著處理劑量的增加呈現(xiàn)先升后降的變化。同時(shí),運(yùn)用超聲提取法,將冬凌草組培苗中的冬凌草甲素提取后分析,得出,不同劑量離子束處理的冬凌草種子無菌條件下生長成的組培苗,其所含的冬凌草甲素含量也隨劑量的增加而出現(xiàn)升-降-升的特點(diǎn),當(dāng)處理劑量為4×1015 N+/cm2時(shí)冬凌草組培苗中的冬凌草甲素含量達(dá)到最高值。但是總體上看經(jīng)過離子束處理種子長