兔白細胞介素10部分序列克隆、遺傳變異及與免疫性狀關聯(lián)的研究.pdf

1、白細胞介素10(interleukin10，IL-10)是一種獨特的細胞因子，它能抑制單核/巨噬細胞系統(tǒng)活化及單核因子和炎癥因子的合成。其具有重要的免疫調(diào)節(jié)活性，并且與疾病的易感性、嚴重性及疾病的發(fā)展進程密切相關。本實驗以新西蘭白兔為實驗材料，對其IL-10基因啟動子進行克隆分析;并且以新西蘭白兔、福建黃兔以及它們的正反交雜交群體為研究對象，測定相關免疫指標，結合其IL-10基因5個外顯子的多態(tài)性進行關聯(lián)性分析。試驗主要研究結果如下:<

2、br>　　 1.克隆家兔IL-10基因5’側翼區(qū)的部分序列，并且將其與GenBank上公布的人IL-10啟動子區(qū)域進行了比對，結果發(fā)現(xiàn)部分序列存在較高的相似性;并且利用軟件預測所克隆序列的啟動子相關元件，基本可以確定此段序列為兔IL-10基因啟動子的一部分。GenBank中公布的人的啟動子序列為4018bp，位于人IL-10基因啟始密碼子上游的-29～-4047bp，經(jīng)比對，與家兔IL-10基因5’側翼區(qū)一致的區(qū)域為啟始密碼子上游-2

3、9～-348bp，因此推測不同物種的同一基因啟動子序列具有一定的保守性，但部分序列也存在較大的差異性。
　　 2.實驗采用的4個群體分別為:新西蘭白兔、福建黃兔、新黃兔（新西蘭白兔（♂）×福建黃兔（♀）的雜交群體）、黃新兔(福建黃兔(♂)×新西蘭白兔（♀）的雜交群體），用PCR-SSCP方法對4個家兔群體IL-10基因5個外顯子的多態(tài)性進行檢測，發(fā)現(xiàn)外顯子1、2、5沒有遺傳多樣性，在外顯子3中檢測到3個等位基因，AA、BB、CC

4、、AB、AC、BC六種基因型，結果發(fā)現(xiàn)2個突變位點:A1435G、G1519A，兩者均為同義突變，沒有引起氨基酸的改變。在外顯子4中存在2個等位基因，3種基因型分別為:OO、TT、TO，檢測到2532位點與2533位點之間有一個堿基(T)的插入，從而引起從此位點后的氨基酸序列發(fā)生變化。經(jīng)統(tǒng)計，在外顯子3中，A等位基因頻率最高，C等位基因頻率最低，其中，只在新西蘭白兔群體中檢測到一個個體為CC基因型;在外顯子4中，O等位基因頻率遠遠大于T

5、等位基因頻率，在所檢測的樣本中，只有一個個體為TT基因型。在外顯子3和外顯子4不同基因型分布差異x2檢驗中，新西蘭白兔與其余三個群體均存在顯著差異(P＜0.05)或極顯著差異(P＜0.01)。
　　 3.利用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒檢測4個家兔群體部分免疫性狀。結果顯示:福建黃兔血液白細胞介素10和免疫球蛋白G水平顯著高于其他3個群體(P＜0.05);而INF-γ含量為黃新兔和福建黃兔最高，且兩者之間無差異顯著(P＞0.

6、05);對于白細胞計數(shù)而言，新西蘭白兔顯著低于其余3個群體(P＜0.05)。
　　 4.不同基因型與免疫指標相關分析表明:除新黃兔外，其余3群體外顯子3各基因型與對應的免疫指標存在一定的相關性，新西蘭白兔AC基因型個體的白細胞數(shù)計數(shù)值顯著高于BB和BC基因型個體;黃新兔AB基因型個體免疫球蛋白G水平顯著高于AA基因型個體，BB基因型個體的IL-10水平最高;福建黃兔AA基因型個體的免疫球蛋白G水平顯著低于其他各基因型個體，且BB