大黃魚(yú)凝集素galectin-9和Nattectin-like的功能研究.pdf

1、凝集素是可以特異性結(jié)合糖類的模式識(shí)別受體，在先天性免疫中發(fā)揮著重要作用。本研究從已構(gòu)建的大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出兩種凝集素基因， galectin-9和Nattectin-like新型C-型凝集素，分別命名為L(zhǎng)cGal-9和LcNTC，并對(duì)它們的免疫功能進(jìn)行了研究，得到的結(jié)果如下：
　　LcGal-9是一種半乳糖凝集素，其cDNA全長(zhǎng)1496 bp，開(kāi)放閱讀框（ORF）978 bp，編碼

2、325個(gè)氨基酸。LcGal-9不具有信號(hào)肽和跨膜區(qū)，含有兩個(gè)由短肽相連的CRD結(jié)構(gòu)域，每個(gè)CRD均含有兩個(gè)保守的糖結(jié)合位點(diǎn)H-NPR和WG-EE-。系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，LcGal-9與雀鯛（Stegastes partitus）等魚(yú)類的galectin-9聚為一支。qRT-PCR分析表明，LcGal-9 mRNA廣泛分布于大黃魚(yú)的各種組織，其中在肝臟中的表達(dá)量最高。Western blot結(jié)果顯示，肝臟、脾臟、腸道等組織中LcGal-9蛋

3、白的含量豐富，而在肌肉和血漿中沒(méi)有檢測(cè)到LcGal-9蛋白。PolyI:C刺激后，肝臟、脾臟和頭腎中的LcGal-9 mRNA在多個(gè)時(shí)相均顯著上調(diào)；相反， LPS和副溶血弧菌刺激后，LcGal-9在三種組織中的表達(dá)量普遍下調(diào)。刺激隱核蟲(chóng)感染后，鰓、皮膚、脾臟和頭腎中的 LcGal-9在感染初期均明顯升高。體外重組表達(dá)的 LcGal-9（rLcGal-9）具有不依賴 Ca2+的生物學(xué)活性，不僅可以凝集人、家兔和大黃魚(yú)的紅細(xì)胞，對(duì)革蘭氏陰性

4、菌溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌也具有凝集作用。α-乳糖和LPS能抑制rLcGal-9的凝血活性。免疫組化結(jié)果表明，PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，脾臟中LcGal-9蛋白量增加。以上結(jié)果為研究LcGal-9在大黃魚(yú)先天免疫應(yīng)答中作用提供了依據(jù)。
　　LcNTC屬于C-型凝集素家族，其cDNA全長(zhǎng)859 bp，開(kāi)放閱讀框（ORF）465 bp，編碼154個(gè)氨基酸。LcNTC的N端有一個(gè)信號(hào)肽和一個(gè)跨膜區(qū)，C端含有一個(gè)CRD結(jié)構(gòu)域，其中含

5、有甘露糖結(jié)合位點(diǎn) EPN和四個(gè)可形成二硫鍵的保守半胱氨酸。系統(tǒng)分析表明， LcNTC與魚(yú)類C-型凝集素和多種Nattectin-like蛋白具有較近的親緣關(guān)系。LcNTC mRNA在大黃魚(yú)各組織中均有表達(dá)，其中鰓中的表達(dá)量最高。LPS、PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，肝臟、脾臟和頭腎中 LcNTC的表達(dá)量在不同時(shí)相顯著升高。刺激隱核蟲(chóng)感染后，鰓、皮膚、脾臟和頭腎中LcNTC也呈現(xiàn)出不同程度的上調(diào)。體外重組表達(dá)的LcNTC（rLcNTC