草魚SQUINT與激活素ActivinA-B的重組表達及其功能研究.pdf

1、Nodal和Activin均是TGF-β超家族的重要成員，在脊椎動物胚胎發(fā)育、肝臟增殖、骨髓形成、生殖、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。
　　Nodal主要發(fā)現(xiàn)在脊椎動物（包括硬骨魚）的胚胎發(fā)育中發(fā)揮作用，而在魚類非胚胎細胞中的功能尚不清楚。在硬骨魚中，已知有三個 Nodal相關(guān)基因(nodal related gene，ndr)：squint(ndr1)、cyclops(ndr2)和southpaw(ndr3)。本課題獲悉了草魚

2、squint的全長cDNA序列，組織分布研究顯示它在所有檢測的組織（包括垂體、腦、心臟、頭腎、腎、脾和性腺）中均有表達。進一步地，我們使用原核表達系統(tǒng)，獲得了草魚 squint的二聚化活性蛋白 rgcmSQT。以靜態(tài)培養(yǎng)的草魚垂體細胞為模型，進一步發(fā)現(xiàn)rgcmSQT能以時間和劑量依賴方式顯著上調(diào)activinβA,βB以及相應(yīng)I型和II型受體(ActR IB和IIB)的mRNA表達。本研究不僅首次在硬骨魚中發(fā)現(xiàn)nodal介導(dǎo)胚胎發(fā)育以外

3、的功能，并且提示nodal可能調(diào)節(jié)了activin信號通路。
　　激活素 activin因其垂體功能而著名，但最近有報道稱其參與了炎癥過程。在硬骨魚中，還沒有activin介導(dǎo)免疫反應(yīng)的報道。和哺乳動物一樣，魚activinA和B分別是βA和βB亞基的同源二聚體。在嗜水氣單胞菌注射的草魚和LPS處理的PBLs中，βA亞基均有上調(diào)反應(yīng)。為了解釋這種炎癥條件下activin的產(chǎn)生，我們重組表達草魚activin A和B（rgcACVA

4、/B），用于后續(xù)研究。雖然本實驗中獲得的rgcACVA/B可引起草魚HKLs中SMAD2的磷酸化，但作用效果不及商品化的重組人激活素rhActivinA/B。隨后，本實驗嘗試在巴斯得畢赤酵母中表達草魚激活素A，未能獲得目的蛋白。因此本課題采用rgcACVA，處理草魚HKLs6小時，發(fā)現(xiàn)activin A可下調(diào)inos和il1β的基因表達但不影響il6的mRNA水平，同時也可減弱LPS對這三個基因的刺激作用。在PBLs中，activin