草魚MH-DAB基因的多態(tài)、表達及其與抗病力的研究.pdf

1、主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)基因是一種編碼細胞表面糖蛋白的異二聚體，是高度多態(tài)的基因，且某些基因型與生物體抗病力存在一定的相關(guān)關(guān)系。本研究以草魚為對象，分別用柱狀黃桿菌和嗜水氣單胞菌進行攻毒實驗，運用PCR-SSCP分型技術(shù)與測序法分析了抗病魚群和易感魚群的MH-DAB基因外顯子2的多態(tài)性及多態(tài)性與魚體抗病力之間的關(guān)系，并運用實時熒光定量PCR檢測草魚在攻毒后不同時間點

2、MH-DAB基因mRNA的組織表達變化情況，結(jié)果如下：
　　 1.首次克隆得到了草魚MH-DAB等位基因的完整外顯子2，大小為276bp，共發(fā)現(xiàn)8個新等位基因，分別命名為Ctid-DAB*0101、Ctid-DAB*0102、Ctid-DAB*0201、Ctid-DAB*0202、Ctid-DAB*0301、Ctid-DAB卑0302、Ctid-DAB*0401和Ctid-DAB*0402.
　　 2.對草魚MH-DAB

3、基因與其它物種MHCⅡB基因的進化樹進行分析，結(jié)果表明草魚MH-DAB基因與費吉馬鲅、高體鰟鮍等鯉科魚類親緣關(guān)系最近.與鯉科魚外的硬骨魚如鮭科和鱸形目魚類等的關(guān)系較遠，與軟骨魚護士鯊和哺乳動物的關(guān)系最遠。
　　 3.分別用柱狀黃桿菌和嗜水氣單胞菌對草魚進行攻毒實驗，攻毒柱狀黃桿菌的草魚共發(fā)現(xiàn)MH-DAB基因的8種基因型和6個等位基因，其中基因型AA(Ctid-DAB*0101/*0101)、DD(Ctid-DAB*0102/*0

4、102)、EE(Ctid-DAB*0401/*0401)、DE(Ctid-DAB*0102/*0401)和等位基因A(Ctid-DAB*0101)、D(Ctid-DAB*0102、E(Ctid-DAB*0401)為抗病魚和易感魚群共享；基因型BB(Ctid-DAB*0201/*0201)、AB(Ctid-DAB*0101/*0201)、CC(Ctid-DAB*0301/*0301)、DF(Ctid-DAB*0102/*0202)和等位基

5、因B(Ctid-DAB*0201)、C(Ctid-DAB*0301)、F(Ctid-DAB*0202)只出現(xiàn)在抗病魚群中；基因型AA(Ctid-DAB*0101/*0101)、BB(Ctid-DAB*0201/*0201)、EE(Ctid-DAB*0401/*0401)、DE(Ctid-DAB*0102/*0401)和等位基因A(Ctid-DAB*0101)、B(Ctid-DAB*0201)、E(Ctid-DAB*0401)在抗病魚群的

6、分布顯著高于在易感魚群的分布(P＜0.01)。攻毒嗜水氣單胞菌的草魚群共發(fā)現(xiàn)5種基因型和4個等位基因，其中基因型AA(Ctid-DAB*0101/*0101)、HH(Ctid-DAB*0402/*0402)、GG(Ctid-DAB*0302/*0302)、EE(Ctid-DAB*0401/*0401)和所有等位基因是抗病魚和易感魚群共有的，而基因型AH(Ctid-DAB*0101/*0402)只出現(xiàn)在易感魚中；基因型AA(Ctid-DA

7、B*0101/*0101)和等位基因A(Ctid-DAB*0101)在易感魚群的分布極顯著高于在抗病魚群的分布(P＜0.01)。
　　 4.對正常草魚組織表達研究表明，MH-DAB基因較強表達于腦、肌肉、脾、皮膚和腮，中等表達于頭腎和小腸，較低表達于心臟和肝臟。以正常草魚MH-DAB基因表達為對照組，草魚在感染柱狀黃桿菌2d后，DAB基因在肝臟、心臟、頭腎、胃、小腸和肌肉的表達量下降，其中肝的表達量僅為對照組的1/2左右，而小腸

8、的表達顯著低于對照組(P＜0.05)，僅為其1/3;在脾、腮和皮膚的表達量略有上升。感染15d后，DAB基因在胃和小腸的表達略低于對照組，其余組織的表達量均高于對照組，其中皮膚的表達量均為對照的2倍(P＜0.05)。
　　 5.嗜水氣單胞菌攻毒后，草魚MH-DAB基因的表達量變化很大。以O(shè)h的表達量為對照，在攻毒6h后，MH-DAB基因在所有的組織中的表達均增加，且均顯著高于對照(P＜0.05)，其中肝臟的表達量達到最大值；攻毒

9、12h后，DAB基因在脾和腮的表達量上升，其中腮的表達量達到最大值，為對照的4.3倍(P＜0.05)，其余組織的表達量均下降；攻毒24h后，DAB基因在脾和小腸的的表達量上升且達到最大值，分別為對照的12.4和5.2倍(P＜0.05)，在其余組織的表達均為下降；攻毒48h后，DAB基因在頭腎和肝臟的表達量上升，頭腎的表達量達到最大值，為對照的4.26倍(P＜0.05)，在脾、小腸和腮中表達量下降；在攻毒72-96h內(nèi)，DAB基因在所有組