抗水稻紋枯病菌放線菌的篩選、鑒定和生物防治作用的初步研究.pdf

1、水稻紋枯病是水稻的主要病害之一，由立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起的。能夠產(chǎn)生菌核結(jié)構(gòu)，其具有抗逆性與耐極端環(huán)境的能力，因而菌核在病害的發(fā)生和傳播過程中起著重要作用。由于菌核的特性，水稻紋枯病也成為生產(chǎn)上最難防治的病害之一。
　　本研究首先從浙江省金華市郊區(qū)土壤中篩選獲得一株抗水稻紋枯病菌的放線菌Sh-43菌株。經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化實驗、16S rDNA序列比對與分析，鑒定為吸水鏈霉菌（Streptomyces

2、 hygroscopicus）。生理生化實驗結(jié)果表明，Sh-43菌株對環(huán)境有較強的適應(yīng)能力。
　　其次，選取多種植物病原菌，測定Sh-43菌株的抗菌譜。實驗結(jié)果表明:放線菌Sh-43菌株對真菌類的植物病原菌，有較好的拮抗效果;而對細菌類的病原菌總體拮抗效果較差。以水稻紋枯病菌（Rhizoctonia solani）菌株為指示菌，測定了Sh-43菌株發(fā)酵液的抑菌穩(wěn)定性，試驗結(jié)果表明:對于不同溫度、普通光照和紫外光照的處理，Sh-43

3、菌株發(fā)酵液均保持了穩(wěn)定的抑菌能力;對不同的酸堿度，發(fā)酵液中的抑菌成分比較敏感，隨著酸堿度的增加，抑菌能力下降顯著。
　　再次，通過單因素實驗得到可溶性淀粉為最優(yōu)碳源，酵母膏為最優(yōu)氮源，并在單因素的基礎(chǔ)上對發(fā)酵培養(yǎng)基進行了正交實驗優(yōu)化，通過計算得到該菌株在可溶性淀粉30g、酵母粉1.5g、氯化鈉0.5g、磷酸氫二鉀0.25g、MgSO40.5g、FeSO40.01 g，蒸餾水1000mL，初始pH7.5，溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速200

4、r/min，接種量3％，培養(yǎng)96 h時活性最高，菌液的抑菌直徑提高到30.76 mm。
　　第四，研究測定了吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）Sh-43菌株發(fā)酵液對水稻紋枯病的生防效果。采用牙簽嵌入法侵染4個水稻品種，并以方法1（保護措施）、方法2（治療措施）、方法3（對照措施）分別處理水稻。結(jié)果表明:植株的相對病斑高率最大下降了30.17％，病情指數(shù)最大下降了29.58％，防效作用最高可達47.3

5、2％。對該試驗研究中所采取的三種不同的處理方法比較發(fā)現(xiàn)，方法1較另兩種處理方法防效更優(yōu)，其防效作用主要體現(xiàn)為對植物病害的預(yù)防效果。這表明在防治水稻紋枯病過程中，預(yù)防比治療更重要。
　　最后，通過積累Sh-43菌株發(fā)酵液，按照萃取劑極性大小，選取四種有機溶劑依次萃取，檢測各萃取劑中物質(zhì)的抑菌能力，得到了溶解于乙酸乙酯萃取劑中的粗提物;將該活性物質(zhì)進行硅膠柱層析，檢測各餾分的抑菌效果，得到了溶解于二氯甲烷中的相對較純的有效物質(zhì);再通過