黃芪衛(wèi)矛合劑對糖尿病腎病大鼠腎臟內(nèi)皮細胞損傷的干預(yù)研究.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)重要的微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致慢性腎功能不全的主要原因。目前DN的發(fā)病機制尚不清楚，亦缺乏有效的治療手段。因此，積極地尋找有效方法治療DN對于延長患者壽命，提高生活質(zhì)量具有重大意義。本論文從文獻綜述、理論和實驗研究三方面加以探討，實驗研究方面選用了體現(xiàn)益氣行血、消癥化積治法的黃芪衛(wèi)矛合劑，重點觀察其對單側(cè)腎切除合并注射鏈脲佐

2、菌素DN大鼠模型腎臟內(nèi)皮細胞損傷的干預(yù)作用。 1 文獻研究：就近年來現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對于DN的發(fā)病機理、治療用藥、研究方法；中醫(yī)藥防治DN作用機制進展；內(nèi)皮細胞和DN關(guān)系；實驗性DN動物模型的建立及研究方法等方面研究動態(tài)進行了較為系統(tǒng)的總結(jié)和綜述。 2 理論研究：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代研究成果，對消渴病腎病的病名、病機理論進行了闡述，認為消渴病腎病是以腎元虧虛、氣陰兩傷為本，氣血瘀滯、痰濕內(nèi)停為標，久病入絡(luò)、腎生癥瘕為發(fā)病關(guān)

3、鍵；初步闡明了微型癥瘕假說與腎臟內(nèi)皮細胞損傷機制的相關(guān)性，確立了“益氣行血、消癥散結(jié)”為DN基本治法，為消渴病腎病的研究思路及治法提供了理論依據(jù)。 3 實驗研究： 目的：觀察黃芪衛(wèi)矛合劑對實驗性糖尿病腎病大鼠腎臟內(nèi)皮細胞損傷的干預(yù)作用及機制。 方法：采用單側(cè)腎切除加鏈脲佐菌素(STZ)尾靜脈注射建立糖尿病腎病動物模型，隨機分為模型組(M)、黃芪衛(wèi)矛合劑治療組(H)、科素亞治療組(K)，另設(shè)假手術(shù)組為空白對照組(F

4、)。0、4、8、12周動態(tài)觀察大鼠一般狀態(tài)、體重、尿量、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、血脂、24小時尿蛋白定量、腎功能的變化，光鏡觀察腎小球及腎小管間質(zhì)形態(tài)學(xué)和腎小管周圍血管(PCT)網(wǎng)改變；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清層粘連蛋白(LN)和Ⅳ型膠原(typeⅣcollagen)含量，硝酸還原酶法檢測腎組織一氧化氮(NO)含量；放射免疫法檢測內(nèi)皮素-1(ET-1)的含量；采用Western-blot

5、的方法測定腎組織中肝細胞生長因子(HGF)和轉(zhuǎn)化生長因子β<,1>(FGF—β<,1>)的蛋白表達。 結(jié)果：①黃芪衛(wèi)矛合劑能顯著降低DN大鼠空腹血糖和糖化血紅蛋白，并具有降低血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)而調(diào)節(jié)脂代謝的作用，與模型組比較有顯著差異(P<0.05，P<0.01)；能夠降低DN大鼠升高的血清BUN和Scr，與模型組比較有顯著差異(P<0.05)；降低實驗性DN大鼠24小時尿蛋白排泄量

6、，與模型組比較有極顯著差異(P<0.01)。提示黃芪衛(wèi)矛合劑對實驗性DN大鼠具有良好的調(diào)節(jié)糖、脂代謝作用，并具有減少尿蛋白排出、保護腎功能的作用。尤其在降糖、調(diào)脂、改善腎功能方面療效優(yōu)于科素亞組。其降低24小時尿蛋白的作用不如科素亞，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病理形態(tài)觀察顯示：模型組光鏡下可見。腎小球基底膜增厚，系膜區(qū)彌漫性增寬，細胞外基質(zhì)(ECM)增多，腎小管纖維化。經(jīng)黃芪衛(wèi)矛合劑治療后，上述病理改變有顯著減輕，提示其對DN

7、大鼠腎臟具有保護作用。科素亞對腎小球也有一定保護作用。 ②ELISA結(jié)果表明：糖尿病腎病大鼠血清LN和Ⅳ型膠原的合成和分泌明顯增多，揭示了DN大鼠腎臟受到一定程度損害。在抑制腎小球合成和分泌LN和Ⅳ型膠原方面，黃芪衛(wèi)矛合劑和科素亞皆能明顯降低造模后LN和IV型膠原(與模型組相比P<0.05)，在降低Ⅳ型膠原方面黃芪衛(wèi)矛合劑優(yōu)于科素亞組，但在降低LN方面兩組之間差異不顯著(P>0.05)。表明黃芪衛(wèi)矛合劑能減少。腎小球合成和分泌L

8、N和Ⅳ型膠原，是其防治DN的作用機制之一。 ③硝酸還原酶法檢測表明糖尿病。腎病模型組NO含量顯著降低，放射免疫法檢測顯示其ET-1水平比假手術(shù)組顯著升高，提示DN大鼠NO與ET-1的平衡失調(diào)，內(nèi)皮功能紊亂，揭示了DN大鼠腎臟損害進一步發(fā)展。中藥黃芪衛(wèi)矛合劑和科素亞能明顯提高NO含量，降低ET-1水平，與模型組比較差異均有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，兩組之間比較差異不顯著。提示黃芪衛(wèi)矛合劑能顯著改善糖尿病腎病模

9、型所造成的NO表達減少和ET-1釋放增多，從而發(fā)揮對腎臟內(nèi)皮細胞的保護作用。表明黃芪衛(wèi)矛合劑能顯著改善糖尿病腎病大鼠模型所致NO的降低和ET-1增高，一定程度恢復(fù)二者的平衡紊亂、改善腎臟內(nèi)皮功能，在此方面與科素亞比較作用相接近。 ④采用Westernblot蛋白印跡方法檢測各組大鼠腎組織HGF和TGF-β<,1>蛋白表達，研究結(jié)果顯示：模型組大鼠腎組織中 TGF-β<,1>蛋白表達較假手術(shù)組明顯升高(P<0.05)，而HGF蛋白

10、表達較假手術(shù)組明顯降低(P<0.05)，黃芪衛(wèi)矛合劑和科素亞治療后可明顯下調(diào)TGF-β<,1>蛋白表達，上調(diào)HGF蛋白表達，以調(diào)節(jié)HGF和TGF-β<,1>的動態(tài)平衡，進一步抑制腎臟內(nèi)皮細胞損傷，促進腎組織修復(fù)。 結(jié)論：本課題中黃芪衛(wèi)矛合劑采用“益氣行血、消癥散結(jié)”之法，針對DN“微型癥瘕”病機設(shè)立，可有效防治糖尿病腎病，其作用機理可能是通過降糖、調(diào)脂、降低DN模型大鼠尿蛋白，減輕。腎組織病理損傷，抑制細胞外基質(zhì)主要成分LN和Ⅳ