多酚氧化酶活性測(cè)定及控制[畢業(yè)設(shè)計(jì)]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　?。ǘ?屆）</b></p><p>　　多酚氧化酶活性測(cè)定及控制 　　</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專(zhuān)業(yè)班級(jí) 生物工程 &l

2、t;/p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱(chēng) </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要：研究抑制多酚氧化酶(PPO)活性的方法，為蓮藕保鮮過(guò)程中控制褐變提供理

3、論依據(jù)。試驗(yàn)研究了溫度、pH值、底物濃度以及抑制劑對(duì)蓮藕多酚氧化酶(PPO)的影響。結(jié)果表明：蓮藕PPO最適pH值為7.5，最適溫度為35℃。亞硫酸鈉、抗壞血酸(Vc)對(duì)蓮藕PPO活性具有較好抑制作用，檸檬酸、半胱氨酸也對(duì)蓮藕PPO活性具有一定抑制作用?？梢酝ㄟ^(guò)浸泡亞硫酸鈉和抗壞血酸(Vc)、調(diào)節(jié)pH值、低溫貯藏等方法來(lái)抑制蓮藕PPO活性，控制蓮藕褐變。</p><p>　　關(guān)鍵詞：多酚氧化酶；活性測(cè)定；抑制劑

4、 </p><p>　　Activity Determining and Inhibiting Polyphenol Oxidase</p><p>　　Abstract：[Objective] The research ami ed to study the enzymatic characteristics ofPPO in lotus sprou.t [Method] The

5、 effects of temperature, pH value and inhibitorsonPPO activity of lotus sproutwere studied using spectrophotometrymethod, catecholas substrate, and the reaction kinetic equationwas established. [Result] The results showe

6、d that the optmi um temperature and pH were 30℃and 6. 0 respectively. PPOwas inactivitywhen keeping heat in 70℃by 60min. Ascorbic acid, citric acid,L-cysteine and st</p><p>　　Key words： PPO；Inhibitor；Activit

7、y detection</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 緒論1</b></p><p>　　1.1選題背景及意義1</p><p>　　1.2 最新研究成果及動(dòng)態(tài)1</p><p>　　1.2.1 鮮切蓮藕組織中多酚

8、氧化酶的分離純化1</p><p>　　1.2.2 不同小麥多酚氧化酶活性檢測(cè)方法的比較1</p><p>　　1.2.3 PPO活性與小麥粉主要理化指標(biāo)的關(guān)系2</p><p>　　1.2.4 核桃組織培養(yǎng)中外植體褐變多酚氧化酶活性的控制2</p><p>　　1.2.5 石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性測(cè)定的最佳試驗(yàn)條

9、件2</p><p>　　1.2.6 純化的蓮藕多酚氧化酶(PPO)與底物和抑制劑相互作用時(shí)的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化2</p><p>　　1.2.7 磁場(chǎng)和抑制劑對(duì)蓮藕多酚氧化酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響2</p><p>　　1.2.8 南湖菱果中多酚氧化酶抑制劑對(duì)其活性的影響3</p><p>　　1.2.9 二氧化氯(ClO2)對(duì)鮮切蓮藕

10、在低溫貯藏期間多酚氧化酶(PPO)的影響3</p><p>　　1.2.10 底物濃度、pH、溫度對(duì)鮮切蓮藕中PPO酶的影響3</p><p>　　1.2.11 抑制劑對(duì)多酚氧化酶活性的影響3</p><p>　　1.2.12 護(hù)色處理對(duì)多酚氧化酶活性的影響3</p><p>　　1.2.13 氣調(diào)包裝對(duì)鮮切蓮藕的保鮮效果4

11、</p><p>　　2.1 主要試劑及設(shè)備5</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料5</p><p>　　2.1.2 主要試劑與儀器5</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)流程6</p><p>　　2.3 分析方法6</p><p>　　2.3.1 粗酶液的制備6&l

12、t;/p><p>　　2.3.2 PPO活性的測(cè)定7</p><p>　　2.3.3 溫度對(duì)多酚氧化酶活性的影響7</p><p>　　2.3.4 pH對(duì)多酚氧化酶活性的影響7</p><p>　　2.3.5底物濃度對(duì)PPO活性的影響7</p><p>　　2.3.6 抑制劑對(duì)多酚氧化酶活性的影響7&l

13、t;/p><p>　　2.3.7 用抑制劑對(duì)自制的粗酶液進(jìn)行活性測(cè)定分析8</p><p>　　3 結(jié)果與分析9</p><p>　　3.1 溫度對(duì)PPO活性的影響9</p><p>　　3.2 pH對(duì)PPO活性的影響10</p><p>　　3.3 底物濃度對(duì)PPO活性的影響10</p>

14、<p>　　3.4 抑制劑對(duì)PPO活性的影響12</p><p>　　3.4.1 L-半胱氨酸對(duì)25KU多酚氧化酶活性的影響12</p><p>　　3.4.2 單抑制劑對(duì)PPO活性的影響13</p><p><b>　　4 結(jié)論15</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)16<

15、/b></p><p>　　致 謝錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　1 緒論</b></p><p>　　1.1選題背景及意義</p><p>　　多酚氧化酶(Polyphenol oxidase，PPO)是植物體內(nèi)普遍存在的一種非線粒體內(nèi)的含銅末端氧化酶(Mayer 1987；Mayer&a

16、mp;Harel，1991)。它包括單酚氧化酶、雙酚氧化酶和漆酶。它廣泛存在于自然界，在果實(shí)和蔬菜收獲后，PPO所引起的反應(yīng)常常會(huì)使果肉發(fā)生褐變、產(chǎn)生異味和損失營(yíng)養(yǎng)。多酚氧化酶（PPO）作為一種植物酶類(lèi)，是引起果蔬褐變的主要因素。鮮切果蔬因組織被切分使PPO與酚類(lèi)底物的接觸機(jī)會(huì)增加，酚類(lèi)物質(zhì)被氧化成棕褐色的醌，導(dǎo)致產(chǎn)品褐變。抑制PPO活性取決于抑制劑的性質(zhì)和濃度、底物的可利用性、pH值和溫度。一些還原劑、酶類(lèi)、螯合劑和蜂蜜等均已被用于防

17、止果蔬酶褐變。本文總結(jié)了多酚氧化酶的活性測(cè)定方法以及對(duì)其活性的控制，主要研究了抑制劑對(duì)其活性的影響，為果蔬貯藏和加工中酶促褐變的防治提供思路。 </p><p>　　1.2 最新研究成果及動(dòng)態(tài) </p><p>　　1.2.1 鮮切蓮藕組織中多酚氧化酶的分離純化</p><p>　　從鮮切藕中粗提多酚氧化酶，并通過(guò)硫酸銨鹽析沉淀，DEAE-SepH-Arose離

18、子交換柱層析以及PHenyl SepHArose 6FAsT Flow疏水柱層析進(jìn)行純化后，經(jīng)SDS-PAGE電泳確定為單一條帶，表明該酶已被純化到電泳均一。在整個(gè)過(guò)程中，該酶純化了95.66倍，產(chǎn)率為2.4％。同時(shí)研究表明，鮮切蓮藕組織中PPO相對(duì)分子質(zhì)量在65 900～66 100之間。</p><p>　　1.2.2 不同小麥多酚氧化酶活性檢測(cè)方法的比較</p><p>　　以鄰苯

19、二酚和酪氨酸為底物所測(cè)PPO活性極顯著相關(guān)，鄰苯二酚所測(cè)活性強(qiáng)，但酪氨酸所測(cè)活性的變異系數(shù)大。面粉PPO活性和面粉及面制品色澤的變化相關(guān)性最強(qiáng),但籽粒和全麥粉中的PPO活性高，變異系數(shù)大。</p><p>　　1.2.3 PPO活性與小麥粉主要理化指標(biāo)的關(guān)系</p><p>　　PPO活性與小麥粉白度成極顯著負(fù)相關(guān)性，與灰分含量成極顯著正相關(guān)性；前路粉流PPO活性比后路粉流低；物料含皮較

20、多的在線粉流PPO活性高；物料來(lái)源于小麥胚乳外層的粉流PPO活性高。</p><p>　　1.2.4 核桃組織培養(yǎng)中外植體褐變多酚氧化酶活性的控制 </p><p>　　在抑制PPO活性方面,PVPP作用最明顯,其次是Na2S2O3、AgNO3。</p><p>　　1.2.5 石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性測(cè)定的最佳試驗(yàn)條件</p>&l

21、t;p>　　以鄰苯二酚為底物時(shí)，底物濃度宜大于20mmol/L，其最適波長(zhǎng)為420nm，最適pH值為6.8，最適溫度為50℃，反應(yīng)時(shí)間不宜超過(guò)20min，反應(yīng)完成后在20min后測(cè)定PPO的活性最為穩(wěn)定。抑制劑NaHSO4的有效抑制濃度為0.8mmol/L。</p><p>　　1.2.6 純化的蓮藕多酚氧化酶(PPO)與底物和抑制劑相互作用時(shí)的二級(jí)結(jié)構(gòu)變化</p><p>　　園

22、二色譜分析表明蓮藕PPO主要含有α一螺旋和β一折疊結(jié)構(gòu)。與抑制劑作用后，蓮藕PPO活性顯著降低，同時(shí)伴隨其二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋結(jié)構(gòu)明顯減少，表明蓮藕PPO的活性中心可能位于α-螺旋結(jié)構(gòu)中。熒光分析表明，蓮藕PPO與鄰苯三酚(pyroGAllic Acid，PA)作用后，酪氨酸殘基熒光強(qiáng)度略有降低，入max位移不明顯，色氨酸殘基熒光強(qiáng)度略有降低，入max紅移2 nm；而與蓮藕多酚(LoTus rooT polypHenol，LRP)作用后，

23、蓮藕PPO分子中酪氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)殘基熒光強(qiáng)度顯著提高，且其最大發(fā)射波長(zhǎng)分別藍(lán)移6nm和紅移5nm。當(dāng)加入異Vc鈉后，Tyr和Trp殘基最大發(fā)射峰顯著紅移，說(shuō)明Trp和防殘基位于一定的疏水環(huán)境對(duì)維持PPO催化活性的優(yōu)勢(shì)構(gòu)象至關(guān)重要。</p><p>　　1.2.7 磁場(chǎng)和抑制劑對(duì)蓮藕多酚氧化酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響</p><p>　　以鄰苯二酚為底物，蓮藕PPO褐變反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

24、符合米氏方程所描述的單底物酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，Km為0.775mol/L，Vmax為11.150U/min。Vc對(duì)PPO有較強(qiáng)的抑制作用，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km為0.081mol/L，Vmax為3.243U/min，呈現(xiàn)反競(jìng)爭(zhēng)性抑制，表現(xiàn)為褐變出現(xiàn)滯后，隨Vc濃度的增大滯后時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，且呈現(xiàn)S型趨勢(shì)，并建立了相應(yīng)的反應(yīng)方程。不同磁場(chǎng)強(qiáng)度下，隨著處理時(shí)間的變化，PPO活性呈現(xiàn)波動(dòng)性。3.17A/m磁場(chǎng)強(qiáng)度下處理4h的酶液其反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線表現(xiàn)為S

25、型，并建立了相應(yīng)的反應(yīng)方程。</p><p>　　1.2.8 南湖菱果中多酚氧化酶抑制劑對(duì)其活性的影響</p><p>　　南湖菱PPO催化反應(yīng)的最適溫度為30 0C ，最適pH 6.5，最佳吸收波長(zhǎng)420 nm ，最大反應(yīng)速度Vmax=33.67 uniT/min，米氏常數(shù)Km= 0.286 mol/L。在3種抑制劑抗壞血酸、EDTA和檸檬酸中，抗壞血酸的抑制效果最好，最佳濃度為0.3

26、 mmol/L。</p><p>　　1.2.9 二氧化氯(ClO2)對(duì)鮮切蓮藕在低溫貯藏期間多酚氧化酶(PPO)的影響</p><p>　　100mg／L濃度的ClO2處理鮮切藕片5min、10 min、15 min后，在貯藏期間能抑制PPO的活性，而10 mg／L濃度對(duì)PPO的活性不起抑制作用反而促進(jìn)了PPO的活性．100 mg／L ClO2處理鮮切藕片10 min抑制PPO的活性效

27、果最好。</p><p>　　1.2.10 底物濃度、pH、溫度對(duì)鮮切蓮藕中PPO酶的影響</p><p>　　鮮切蓮藕的PPO活性最適反應(yīng)底物濃度為0.02 mol/L，并且底物濃度與PPO活性的關(guān)系完全遵循MicHeAlis-MenTen的酶促動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。PPO最適pH值為7.0，pH對(duì)PPO的影響顯著，當(dāng)pH<4.0時(shí)，PPO活性顯著下降，可見(jiàn)，調(diào)節(jié)pH值可有效地抑制PPO活

28、力。PPO活性的最適溫度為35℃，在0℃-5℃之間，蓮藕的PPO活性受到明顯的抑制。</p><p>　　1.2.11 抑制劑對(duì)多酚氧化酶活性的影響</p><p>　　添加抑制劑可使蓮藕PPO反應(yīng)速率發(fā)生變化。苯甲酸可與酶E結(jié)合生成無(wú)活性的二元復(fù)合物EI，減小可供鄰苯二酚進(jìn)攻的游離酶E的濃度，也就降低了酶一底物ES的濃度，而且再增加底物濃度，反應(yīng)速率都不可能達(dá)到無(wú)抑制劑時(shí)的最大速率ym

29、ax，從而破壞了蓮藕PPO的正常催化氧化反應(yīng)系統(tǒng)。</p><p>　　1.2.12 護(hù)色處理對(duì)多酚氧化酶活性的影響</p><p>　　對(duì)鮮切蓮藕褐變抑制的最佳囚子組合為EDTA濃度為0.25% , Vc濃度為0.1%、草酸濃度為0.25%半胱氨酸濃度為0.7%、處理時(shí)間為8min。</p><p>　　1.2.13 氣調(diào)包裝對(duì)鮮切蓮藕的保鮮效果</p&

30、gt;<p>　　采用8種不同濃度配比的O2、N2和CO2氣體對(duì)鮮切蓮藕進(jìn)行包裝，置于4℃下貯藏，定期測(cè)定鮮切蓮藕Vc的含量、多酚氧化酶活性、褐變度以及pH值變化，結(jié)果顯示100％O2組處理的鮮切蓮藕，其外觀最好，多酚氧化酶活性受到抑制。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分</b></p><p>　　2.1 主要試劑及設(shè)備</p>

31、<p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料</p><p>　　多酚氧化酶凍干粉、新鮮蓮藕</p><p>　　2.1.2 主要試劑與儀器</p><p><b>　　表2-1 實(shí)驗(yàn)試劑</b></p><p>　　表2-2 實(shí)驗(yàn)儀器</p><p>　　所有實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水。<

32、;/p><p>　　表2-3磷酸緩沖液配制方法</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)流程 </p><p><b>　　2.3 分析方法</b></p><p>　　2.3.1 粗酶液的制備</p><p>　　勻漿浸提法（勻漿浸提法提取所得粗酶液活性最高，操作簡(jiǎn)便，提取所得粗酶液活性高，且可以直接

33、用于研究）</p><p>　　配制pH7.0的NaH2PO4-NaH2PO4緩沖液，加入PVPP2.5g，加入蓮藕50g，用高速組織搗碎機(jī)搗碎，4℃下浸提2.5h。用4層脫脂紗布過(guò)濾，抽濾，所得濾液即為粗酶液；或在3,000r/min下離心15min，棄沉淀，上清液即為粗酶液。</p><p>　　2.3.2 PPO活性的測(cè)定</p><p>　　取濃度0.0

34、5 mol／L，pH值7.0的磷酸鹽緩沖溶液1.5 mL于1 cm比色皿中，加入0.1 mol／L的鄰苯二酚溶液1.0 mL，PPO粗酶液0.5 mL．混勻后在420 nm處比色，酶液加入后開(kāi)始計(jì)時(shí)，每30 s記錄1次OD。</p><p>　　單位時(shí)間內(nèi)OD值的變化率越大，表明PPO的相對(duì)活力越高。</p><p>　　2.3.3 溫度對(duì)多酚氧化酶活性的影響</p>&l

35、t;p>　　在l cm比色皿中，加入濃度為0.05 mol／L，pH值為7.0的磷酸鹽緩沖溶液1.5 mL，0.1 mol／L的鄰苯二酚溶液1.0 mL。在20℃-50℃(間隔5℃一個(gè)處理)下保溫10 min，加入相同溫度下保溫10 min的PPO粗酶液0.5 mL。在420nm下每隔30 s測(cè)定OD值。</p><p>　　2.3.4 pH對(duì)多酚氧化酶活性的影響 </p><p&g

36、t;　　分別配制pH3.0,4.0,5.0,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0的磷酸緩沖液，在1.2ml 0.2 mol/L的底物中分別加入上述緩沖液1.6ml,30 ℃水浴，再加入0.5 ml酶液，于420 nm處測(cè)OD值，計(jì)算酶活力。</p><p>　　底物濃度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　分別配制濃度為0.01%，0.04%，0.06%，0.08%，0.09%，0.1

37、% 的鄰苯二酚溶液，用PPO凍干粉配成0.01g/ml的溶液，反應(yīng)底物溶液和酶液測(cè)定前在25℃恒溫水浴中保溫l0min；分別在不同底物濃度下測(cè)定420nm處的OD值，記錄吸光度的變化。</p><p>　　2.3.6 抑制劑對(duì)多酚氧化酶活性的影響 </p><p>　　用PPO凍干粉配成0.01g/ml的溶液，反應(yīng)底物溶液和酶液測(cè)定前在25℃恒溫水浴中保溫l0min;波長(zhǎng)掃描和酶活測(cè)定均

38、在25℃溫度下進(jìn)行。將100ul酶液加入3m1含10mmo11L鄰苯二酚、pH6.0的磷酸緩沖液中，迅速搖勻后在295nm下測(cè)定2min內(nèi)吸光度的變化，反應(yīng)2min后立即加入100μl60mmol/L（1.9%）的L-半胱氨酸溶液，繼續(xù)記錄吸光度的變化。</p><p>　　隔天后用同樣方法測(cè)第二次。</p><p>　　2.3.7 用抑制劑對(duì)自制的粗酶液進(jìn)行活性測(cè)定分析</p&g

39、t;<p>　　分別配制0.1％抗壞血酸、檸檬酸、亞硫酸鈉、硫脲、半胱氨酸5種抑制劑溶液，將100ul酶液加入3m1含10mmo11L鄰苯二酚、pH6.0的磷酸緩沖液中，迅速搖勻后在420nm下測(cè)定2min內(nèi)吸光度的變化，反應(yīng)2min后立即加入上述抑制劑，繼續(xù)測(cè)定。3 結(jié)果與分析</p><p>　　3.1 溫度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　表3-1 溫度對(duì)

40、PPO活性的影響</p><p>　　圖3-1 溫度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　由圖可知：PPO活性在35℃時(shí)最大，30℃時(shí)其次。</p><p>　　3.2 pH對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　表3-2 不同pH下不同時(shí)間內(nèi)的OD（420nm）值（35℃）</p><p>　　圖3-2

41、pH對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　由上圖可知：在pH為7.5-8之間，PPO的活性最大</p><p>　　3.3 底物濃度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　表3-3 底物濃度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　圖3-3 底物濃度對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　根據(jù)此圖所得到的趨勢(shì)線數(shù)據(jù)

42、如下表：</p><p><b>　　表3-4</b></p><p>　　由圖可知：隨著底物濃度增加，酶促反應(yīng)速度呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，當(dāng)?shù)孜餄舛仍黾拥揭欢ǔ潭葧r(shí)，反應(yīng)速度達(dá)到最大值并趨于不變。當(dāng)?shù)孜餄舛?gt;0.08 mol／L時(shí)，隨著底物濃度的增大，反應(yīng)速度不再上升。由此得出PPO活性最適反應(yīng)底物濃度為0.08 mol／L。</p><p>　

43、　3.4 抑制劑對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　3.4.1 L-半胱氨酸對(duì)25KU多酚氧化酶活性的影響</p><p>　　表3-5 295nm下L-半胱氨酸對(duì)PPO活性的抑制</p><p>　　圖3-4 295nm下L-半胱氨酸對(duì)PPO活性的抑制</p><p>　　可以看出：酶活性在第一天比在第二天要強(qiáng)，此外，295nm處測(cè)

44、得的吸光度在加入L一半胱氨酸后，吸光度迅速上升，這說(shuō)明加入L一半胱氨酸之后并沒(méi)有抑制PPO的活性，酶促反應(yīng)仍在進(jìn)行，可能是L-半胱氨酸加入后生產(chǎn)的產(chǎn)物在295nm處的吸收效率很好。</p><p>　　3.4.2 單抑制劑對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　表3-6 抑制劑對(duì)PPO活性的影響</p><p>　　圖5-5 抑制劑對(duì)PPO活性的影響</p&

45、gt;<p>　　由圖可知：Vc和NaHSO3對(duì)PPO的活性有強(qiáng)烈的抑制作用，NaHSO3對(duì)PPO活性的抑制作用更強(qiáng)，其次是半胱氨酸，而硫脲對(duì)PPO活性的抑制作用不明顯。</p><p>　　由圖4和圖5 可知：:當(dāng)加入L一半胱氨酸后，反應(yīng)液顏色立即褪去，420nm處的吸光度迅速降低，而在295nm處以同樣方法測(cè)定時(shí)，吸光度則迅速升高，而且在加入L一半胱氨酸后的反應(yīng)中，295nm處的吸收速率比420

46、nm處的要大，這說(shuō)明加入L-半胱氨酸后，生產(chǎn)的物質(zhì)酶在420nm處的吸收效率低，而在295nm下吸收率高。</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　1）PO催化的酶促反應(yīng)是引起蓮藕褐變的主要原因。蓮藕PPO的最適溫度是35℃，最適pH值為7.5。因此，可以通過(guò)改變pH，低溫貯藏來(lái)抑制PPO活性。</p><p>　　

47、2)亞硫酸鈉和Vc均能在低濃度下對(duì)蓮藕PPO起到較好的抑制作用。此外，乙酸、檸檬酸適合輔助抑制PPO。而半胱氨酸、硫脲抑制PPO效果不好。</p><p>　　3）這些處理對(duì)蓮藕PPO活性及蓮藕褐變均有很好的抑制作用，作用時(shí)間也長(zhǎng)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]潘永貴,陳維信.鮮切蓮藕組織中多酚氧化酶

48、的分離純化. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2008,27(2):55-29</p><p>　　[2]姚顯偉，郭禎祥，馬洪娟，張杏麗.在線粉流中小麥多酚氧化酶活性分析.糧食與飼料工業(yè)，2010,（5）：4-6</p><p>　　[3]張曉,田紀(jì)春. 不同小麥多酚氧化酶活性檢測(cè)方法的比較.山東農(nóng)業(yè)人學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2008，39( 1): 15- 18</p><p&g

49、t;　　[4]張燕,何暉,吳國(guó)良.核桃組織培養(yǎng)中外植體褐變多酚氧化酶活性的控制.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(20): 10553-10556</p><p>　　[5]胡青霞,陳延惠,李洪濤,張艷,王林忠.石榴果皮中多酚氧化酶測(cè)定最佳試驗(yàn)條件的確定.河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,(2):81-84</p><p>　　[6]李春美，胡婉峰，楊立，楊杰. 蓮藕多酚氧化酶與底物或抑制劑相互作用的光

50、譜學(xué)研究.分析試驗(yàn)室,2010,29(8):14-16</p><p>　　[7]高夢(mèng)祥,胡翠翠,嚴(yán)奉偉,張長(zhǎng)峰.磁場(chǎng)和抑制劑對(duì)蓮藕多酚氧化酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響.農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào),2008,39(1):78-81</p><p>　　[8] 詹麗娟,賴(lài)齊賢,朱祝軍,葛志平.南湖菱果中多酚氧化酶一般特性研究.中國(guó)食品學(xué)報(bào),2006,6(5):59-62</p><p>　　

51、[9] 黃永鋒,宋俊梅.二氧化氯對(duì)鮮切蓮藕多酚氧化酶的影響研究.現(xiàn)代食品科技, 2008,24(10):995-998</p><p>　　[10] 高愿軍,郝亞勤,南海娟，吳廣輝,高雪麗.蓮藕多酚氧化酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.食品研究與并發(fā), 2006,27(7):17-18</p><p>　　[11] 高晗,孫俊良,高愿軍,南海娟,劉倩.氣調(diào)包裝對(duì)鮮切蓮藕保鮮效果研究.食品科學(xué), 2008,

52、29(10):612-614</p><p>　　[12] 許金蓉,周明全,何建軍,胡中立,王清章.蓮藕不同部位的酶活性研究.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2005,(3):89-90</p><p>　　[13] 黃建韶,田宏現(xiàn). 蓮藕中多酚氧化酶的性質(zhì).吉苜大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2002，23(2):82-84</p><p>　　[14] 吳光旭，張長(zhǎng)峰. 復(fù)合護(hù)色液對(duì)