o-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農(nóng)藥多殘留免疫分析技術(shù)研究.pdf

1、本研究根據(jù)O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類有機(jī)磷農(nóng)藥的公共結(jié)構(gòu)，以O(shè)-甲基硫代磷酰二氯、水楊酸異丙酯和γ-氨基丁酸為原料，合成了相應(yīng)的通用半抗原。通過(guò)活潑酯法將半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)，合成了相應(yīng)的免疫原和包被原。用免疫原免疫小鼠，通過(guò)常規(guī)方法融合、篩選，最終獲得了一株雜交瘤細(xì)胞6B5/E3。此細(xì)胞株分泌的抗體亞型為IgG1，輕鏈為κ型，親和常數(shù)為4.64×107L/mol。此單克隆抗體對(duì)水胺硫磷

2、、甲基異柳磷和乙基異柳磷有明顯的識(shí)別作用，對(duì)其它農(nóng)藥則不識(shí)別。以雜交瘤細(xì)胞株6B5/E3所分泌的單克隆抗體為基礎(chǔ)，通過(guò)對(duì)檢測(cè)體系中封閉物、離子強(qiáng)度、pH值等影響因子進(jìn)行研究，建立了O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農(nóng)藥多殘留的ELISA檢測(cè)體系。在此優(yōu)化的檢測(cè)體系下，分別建立了三種農(nóng)藥（水胺硫磷、甲基異柳磷和乙基異柳磷）的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線。以Logit(B/Bo)為縱坐標(biāo)，農(nóng)藥濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，進(jìn)行轉(zhuǎn)化，分別得到了三個(gè)線性方

3、程。水胺硫磷的線性方程為y=-2.1313x+2.9175，相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9908，I50為23.39ng/ml，最低檢測(cè)限為12.19ng/ml，在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為112.86％、103.54％和104.81％。甲基異柳磷的線性方程為y=-1.9333x+3.5754，相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9938，I50為70.79ng/ml，最低檢測(cè)限為34.51ng/ml，在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為105

4、.63％、107.84％和101.85％。乙基異柳磷的線性方程為y=-1.2001x+2.1553，相關(guān)系數(shù)R2達(dá)0.9796，I50為62.52ng/ml，最低檢測(cè)限為19.68ng/ml，在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為100.54％、91.63％和102.27％。
　　本研究獲得了O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農(nóng)藥的單克隆抗體，為檢測(cè)這類農(nóng)藥提供了理論依據(jù)，也為這類農(nóng)藥的快速檢測(cè)提供了很好的方法，為農(nóng)藥檢