間接夾心ELISA檢測(cè)鴨腫頭敗血癥病毒的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、由于“鴨腫頭敗血癥”與鴨瘟等疫病在臨床癥狀、病理變化等方面有許多相似之處,給臨床診斷帶來(lái)困難。為了更好的防制“鴨腫頭敗血癥”,減少其帶來(lái)的巨大損失,本試驗(yàn)建立了一種快速診斷和檢測(cè)“鴨腫頭敗血癥”的間接夾心ELISA方法?! ∫员緦?shí)驗(yàn)室分離并鑒定的鴨腫頭敗血癥病毒株XD株為抗原,提純后免疫鴨、兔,制備的高免血清用“正辛酸—硫酸銨提純法(CA-AS)”,獲得純化的鴨抗XD病毒IgG和兔抗XD病毒IgG,建立了檢測(cè)鴨腫頭敗血癥病毒抗原的間接

2、央心ELISA法。經(jīng)反復(fù)篩選,確定其最佳工作條件為:包被用鴨抗XD病毒IgG濃度為8ug/ml,包被溫度和時(shí)間分別為37℃1.5h,封閉液為0.5%明膠,封閉條件為37℃1.5h,抗原孵育條件為37℃1.5h,兔抗XD病毒IgG濃度為5ug/ml,孵育條件為37℃2h,酶標(biāo)羊抗兔抗體濃度為1:2000,孵育條件為37℃2h,底物作用時(shí)間為30min,洗滌液(保溫液)為0.02mol/LPH7.2PBS(含0.15mol/LNaCl,0.

3、05%土溫-20),保溫液為洗液加5%牛血清。陰陽(yáng)性結(jié)果判定的臨界OD值為0.412。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果:3份陽(yáng)性樣品變異系數(shù)為2.0~3.5%,3份陰性樣品變異系數(shù)為4.6~9.0%,小于規(guī)定的板內(nèi)變異系數(shù)10%的范圍?! 〗⒌拈g接央心ELISA法具有高度特異性,不與鴨腫頭敗血癥陰性抗原、鴨大腸桿菌抗原、鴨瘟、鴨肝炎病毒抗原呈現(xiàn)交叉反應(yīng)?! 〗⒌拈g接央心ELISA法,具有高度敏感性,其敏感性比瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)高1280倍,包被后的酶標(biāo)

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