鴨腫頭敗血癥病毒XD株的鴨胚原代細(xì)胞培養(yǎng)特性及免疫電鏡觀察研究.pdf

1、鴨腫頭敗血癥病毒(I)uck Swollen Head Septicemia Virus，DSHSV)，隸屬于呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬，鴨腫頭敗血癥病毒呈球形，大小約65～80nm，無囊膜，該病毒核酸類型為雙鏈RNA，基因組大于19Kbp。該病2002年首次報(bào)道，主要以病鴨頭部腫大，全身彌漫性出血為特征。 本試驗(yàn)通過對鴨胚日齡，胰酶濃度和營養(yǎng)液小牛血清濃度的選擇，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，采用14日齡鴨胚，經(jīng)0.125％胰酶消化15～20

2、min，使用含15％小牛血清的營養(yǎng)液成功培養(yǎng)鴨胚肝細(xì)胞，采用20日齡鴨胚，經(jīng)0.25％胰酶消化5～10min，使用含20％小牛血清的營養(yǎng)液成功培養(yǎng)鴨胚腎細(xì)胞。 通過鴨腫頭敗血癥病毒(DSttSV)在鴨胚成纖維細(xì)胞，鴨胚肝細(xì)胞，鴨胚腎細(xì)胞上的培養(yǎng)特性觀察，發(fā)現(xiàn)鴨腫頭敗血癥病毒在鴨胚成纖維細(xì)胞和鴨胚腎細(xì)胞上不生長，病毒首次接種于鴨胚肝細(xì)胞上，24h開始出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，48h細(xì)胞病變達(dá)一半以上，隨著在鴨胚肝細(xì)胞上繼續(xù)傳代，

3、能穩(wěn)定的出現(xiàn)一致的細(xì)胞病變，同時(shí)病變時(shí)間開始提前，細(xì)胞在接毒后8h開始出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)，幾乎所有的細(xì)胞都可見明顯的細(xì)胞病變，主要表現(xiàn)為細(xì)胞界限變清晰，胞核腫脹，胞內(nèi)顆粒增多，16h原腫脹且顆粒增多的細(xì)胞出現(xiàn)明顯的脫落，并且漂浮在細(xì)胞培養(yǎng)液中，脫落細(xì)胞約占50％。由于周邊細(xì)胞脫落，未脫落細(xì)胞占據(jù)原飄落細(xì)胞的位置，使得單個(gè)細(xì)胞體積變大，細(xì)胞間隙增寬，接種24h后原致密的單層肝細(xì)胞因?yàn)椴∽兗?xì)胞脫落而產(chǎn)生大量的空斑，細(xì)胞脫落約75％。病毒液中懸