孕婦外周血胎兒有核紅細(xì)胞數(shù)與胎兒及胎盤異常關(guān)系

1、<p>　　孕婦外周血胎兒有核紅細(xì)胞數(shù)與胎兒及胎盤異常關(guān)系</p><p>　　作者：楊曉菊 徐金娥 趙金霞 楊宗利 劉晶 </p><p>　　【摘要】 目的 探討在胎盤和胎兒發(fā)生病理性變化時(shí),母血中胎兒有核紅細(xì)胞(FNRBC)數(shù)量的變化,為母血中FNRBC計(jì)數(shù)在無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 對(duì)110例8～40孕周的婦女(60例正常妊娠,30例病理妊娠,

2、20例胎兒異常)外周血進(jìn)行單密度梯度離心,瑞氏染色和細(xì)胞計(jì)數(shù),分析母血中FNRBC數(shù)量在病理妊娠和胎兒異常時(shí)的變化及其與孕周的關(guān)系。對(duì)有胎兒異?？赡艿牟±?，孕早期(8～12周)自然流產(chǎn)者行絨毛細(xì)胞核型分析，孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產(chǎn)兒和新生兒血進(jìn)行染色體分析。結(jié)果 正常妊娠時(shí)，母血中FNRBC平均數(shù)量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時(shí)母血中FNRBC平均數(shù)量為(23.0

3、9±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組和胎兒異常組與正常妊娠組相比差異有顯著性(F=25.927，q=4.236、10.674，P&lt;0.01)。正常妊娠組和病理妊娠組母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關(guān)(r=0.491、 0.500,P&lt;0.05)。而異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無(wú)相</p><p>

4、;　　【關(guān)鍵詞】 孕婦;胎兒有核紅細(xì)胞;產(chǎn)前診斷 </p><p>　　[ABSTRACT] Objective To investigate the changes of the counting of fetal nucleated red blood cells (FNRBC) and their relationship with pathology of fetus and placenta, and

5、 provide rationale and experiment evidence for the application of FNRBC in noninvasive prenatal diagnosis. Methods This study consisted of 110 women with 8-40 weeks of pregnancy (60 with normal pregnancy, 30 with pathop

6、regnancy, and 20 with fetal disorder). Counting of FNRBC in the maternal blood and its relationship with gest</p><p>　　[KEY WORDS] Pregnant women; Fetus nucleated red cell; Prenatal diagnosis </p><

7、;p>　　利用母血中胎兒有核紅細(xì)胞(FNRBC)進(jìn)行胎兒遺傳疾病的產(chǎn)前篩查是近年來(lái)新發(fā)展的一項(xiàng)非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷技術(shù)，母血中FNRBC是目前最適合產(chǎn)前診斷的胎兒細(xì)胞，當(dāng)胎盤解剖結(jié)構(gòu)和功能的完整性破壞或母兒免疫異常時(shí)，其數(shù)量會(huì)發(fā)生異常。本文檢測(cè)了不同孕周母血中FNRBC數(shù)量的變化，探討病理妊娠時(shí)和胎兒畸形或(和)染色體異常時(shí)母血中FNRBC的變化情況，為母血中FNRBC計(jì)數(shù)輔助應(yīng)用于產(chǎn)前預(yù)測(cè)病理妊娠和產(chǎn)前篩查胎兒畸形提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)

8、依據(jù)。 </p><p><b>　　1 對(duì)象和方法 </b></p><p><b>　　1.1 研究對(duì)象 </b></p><p>　　本院產(chǎn)科門診及住院孕婦110例，孕周8～40周，年齡28～40歲。包括正常妊娠60例;病理妊娠30例，其中子癇前期19例，胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩3例，妊娠期糖尿病5例，妊娠心臟病1例，習(xí)慣性

9、流產(chǎn)2例;胎兒異常20例，其中死胎5例，神經(jīng)管畸形6例，胃腸道畸形4例，肢體畸形3例，18/21三體2例。病理妊娠診斷按《婦產(chǎn)科學(xué)》(第6版)教材標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，胎兒異常診斷參照產(chǎn)前B超診斷及染色體檢查結(jié)果。排除貧血(HGb&gt;100 g/L)及其他血液病。3組孕婦年齡和產(chǎn)次差異無(wú)顯著性(P&gt;0.05)。見表1?！”? 各組孕婦年齡、孕周、產(chǎn)次比較 </p><p>　　1.2 FNRBC檢

10、測(cè)方法 </p><p>　　所有病人均在創(chuàng)傷性檢查前采集外周靜脈血10 mL，置于EDTA抗凝管，室溫保存， 6 h內(nèi)室溫下檢測(cè)。用密度為1.085、1.075 kg/L的Percoll細(xì)胞分離液在離心管中制成密度梯度，然后將外周血10 mL用生理鹽水等倍稀釋后，緩慢加入。室溫下以3 000 r/min離心30 min，分別收集上、中層分離界面細(xì)胞，以生理鹽水洗滌后，制成涂片，瑞氏染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察FNR

11、BC并計(jì)數(shù)。 </p><p>　　1.3 胎盤絨毛細(xì)胞核型及胎血染色體分析 </p><p>　　對(duì)有胎兒異常可能的病例，孕早期(8～12周)自然流產(chǎn)者行絨毛細(xì)胞核型分析，于孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產(chǎn)兒和新生兒血進(jìn)行染色體分析。另取臍血1份、正常未育未孕婦女外周血標(biāo)本2份分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。 </p><p><b>　　1.4

12、 統(tǒng)計(jì)方法 </b></p><p>　　應(yīng)用SAS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理[1]，結(jié)果以±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用方差分析，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson相關(guān)分析。 </p><p><b>　　2 結(jié) 果 </b></p><p>　　2.1 正常妊娠、病理妊娠和胎兒異常時(shí)母血中的FNRBC計(jì)數(shù)比較 </p&

13、gt;<p>　　正常妊娠時(shí)，母血中FNRBC平均數(shù)量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時(shí)母血中FNRBC平均數(shù)量分別為(23.09±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組、胎兒異常組與正常妊娠組相比較，差異均有顯著意義(F=25.927，q=4.236、10.674，P&lt;0.01)。 &

14、lt;/p><p>　　2.2 各組孕婦不同孕期母血中FNRBC計(jì)數(shù)比較 </p><p>　　在正常妊娠組，隨著妊娠時(shí)間的延長(zhǎng)，母血中FNRBC檢出數(shù)逐漸增多，但各期之間比較差異均無(wú)顯著性(P&gt;0.05)。病理妊娠組孕中期和孕早期相比FNRBC數(shù)量差異無(wú)顯著意義(F=17.325，q=2.112，P&gt;0.05)，但與孕晚期比較差異有顯著性(q=9.827，P&am

15、p;lt;0.05);而異常胎兒組孕中期和孕晚期FNRBC數(shù)量差異有極顯著意義(F=15.607，q=11.645，P&lt;0.01)。見表2。此外，正常妊娠組有3例母血中未發(fā)現(xiàn)FNRBC(分別為孕8、11、36周)，占4.41%。而正常未孕未育組有2例外周血中未發(fā)現(xiàn)FNRBC?！”? 各組不同孕期母血中FNRBC檢測(cè)結(jié)果及比較 </p><p>　　2.3 母體外周血中FNRBC數(shù)量與孕周的關(guān)系 &l

16、t;/p><p>　　正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關(guān)(r=0.491、 0.500,P&lt;0.05)。而異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無(wú)顯著相關(guān)性(r=0.283，P&gt;0.05)。 </p><p>　　2.4 胎兒異常組胎盤絨毛細(xì)胞核型及胎血染色體異常與母體外周血中FNRBC數(shù)量的關(guān)系 </p><p>　　

17、子癇前期病人的胎盤絨毛切片中可見明顯的滋養(yǎng)細(xì)胞脫落現(xiàn)象，而此類病人母血中FNRBC數(shù)量則較正常妊娠時(shí)明顯升高。此外，光學(xué)顯微鏡下可見胎兒生長(zhǎng)受限(FGR)病人胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量減少，且細(xì)胞外基質(zhì)沉積增多，說(shuō)明其增殖活性明顯降低。正常核型胎兒母血中FNRBC的數(shù)量相對(duì)較少，大約每毫升有1～3個(gè)。在核型異常胎兒母血中FNRBC數(shù)量則明顯增多。胎兒異常時(shí)，母血中平均FNRBC的數(shù)量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達(dá)正

18、常妊娠的6～9倍。 </p><p><b>　　3 討 論 </b></p><p>　　3.1 母血中FNRBC的進(jìn)入方式及數(shù)量 </p><p>　　正常成人外周血中不存在FNRBC,妊娠后由于母體與胎兒之間有母胎輸血，F(xiàn)NRBC有可能通過(guò)胎盤進(jìn)入母體循環(huán)。胎盤在母體胎兒間作為機(jī)械屏障和免疫屏障起著重要作用。由于FNRBC需通過(guò)胎盤屏

19、障進(jìn)入母體循環(huán)，所以它在母體循環(huán)中的數(shù)量與胎盤解剖結(jié)構(gòu)和功能的完整性密切相關(guān)。此外，胎兒本身產(chǎn)生紅細(xì)胞的多寡，以及母體全身免疫和對(duì)胎兒的局部免疫狀態(tài)，都是影響母體循環(huán)中FNRBC數(shù)量的重要因素。胎盤解剖結(jié)構(gòu)遭破壞，通透性增高，胎兒細(xì)胞濾過(guò)增多;胎兒由于低氧等因素造成紅細(xì)胞生成增加，母體血循環(huán)中FNRBC的數(shù)量也可能升高;胎兒細(xì)胞表面抗原與母體差異大，不能被母體耐受，導(dǎo)致母體對(duì)胎兒細(xì)胞的破壞和清除增加，母血中FNRBC的數(shù)量則可能減少。本

20、文結(jié)果也反映和驗(yàn)證了這些理論。 </p><p>　　胎兒細(xì)胞在母體循環(huán)中出現(xiàn)的時(shí)間有個(gè)體差異，文獻(xiàn)報(bào)道母體外周血中檢出FNRBC的時(shí)間不一，但大多在7～12周[2]。從理論上講，胎兒細(xì)胞進(jìn)入母血的最早時(shí)間是妊娠5周末，此時(shí)胎兒胎盤循環(huán)建立。此后大量絨毛生長(zhǎng)，使母兒循環(huán)間的物質(zhì)交換面積大大增加，進(jìn)入母血的胎兒細(xì)胞數(shù)量明顯增加。在本研究中，我們最早在孕8周母血中發(fā)現(xiàn)FNRBC，較上述文獻(xiàn)報(bào)道的時(shí)間略微提前，可能與本

21、實(shí)驗(yàn)僅用了單密度梯度離心法及瑞氏染色，操作步驟少，減少了細(xì)胞丟失，更多地保持了細(xì)胞形態(tài)的完整性有關(guān)。但我們?cè)谡Ｈ焉锝M仍有3例未發(fā)現(xiàn)FNRBC，占4.41%，分析可能與樣本個(gè)體差異以及實(shí)驗(yàn)中的各種影響因素有關(guān)。 </p><p>　　3.2 母血中FNRBC數(shù)量與胎兒、胎盤生理性變化的關(guān)系 </p><p>　　有學(xué)者認(rèn)為，母血中FNRBC數(shù)量在孕12～14周左右最多[3]，其后隨孕周增長(zhǎng)

22、而逐漸減少。也有報(bào)道提出，母血中FNRBC數(shù)量與孕周無(wú)關(guān)[4]。本實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)正常妊娠組、病理妊娠組和異常胎兒組孕婦孕早期、孕中期、孕晚期母體外周血進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數(shù)量與孕周呈正相關(guān)，母體循環(huán)中胎兒細(xì)胞的比例隨孕齡而增加。我們推測(cè)，雖然隨著胎兒發(fā)育成熟，胎兒血液中FNRBC在全血細(xì)胞中所占比例逐漸降低，但同時(shí)胎兒的血容量逐漸增加，與母體交換加快;而且隨著胎盤體積增大，使母兒間循環(huán)物質(zhì)交換面積

23、大大增加;此外，胎盤血流量隨妊娠進(jìn)展而逐漸增加，這些可能是母血中FNRBC數(shù)量隨孕周顯著增加的原因。異常胎兒組母血中FNRBC數(shù)量與孕周無(wú)明顯相關(guān)性，可能與胎兒、胎盤發(fā)育異常，或樣本數(shù)量較少有關(guān)。 </p><p>　　3.3 母血中FNRBC數(shù)量與胎兒、胎盤病理性變化的關(guān)系 </p><p>　　KADA等[5]研究顯示，在子癇前期時(shí)，母血中FNRBC數(shù)量較正常妊娠時(shí)增加。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

24、與其一致。子癇前期病人妊娠生理免疫抑制反應(yīng)減弱，胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞有脫落現(xiàn)象，從而增加了胎盤屏障的通透性，使胎兒細(xì)胞進(jìn)入母體增多。同時(shí)，子癇前期時(shí)，由于胎母間免疫平衡失調(diào)所導(dǎo)致的一系列胎盤絨毛和胎盤床血管的病理改變，導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)缺血低氧。因而， FNRBC也可以認(rèn)為是一個(gè)慢性低氧的指標(biāo)。低氧時(shí)，胎兒對(duì)氧和血紅蛋白的需要增加，促紅細(xì)胞生成素增加，產(chǎn)生并釋放不成熟紅細(xì)胞，胎兒血液循環(huán)中的FNRBC增多。所以，子癇前期時(shí)，胎兒由于宮內(nèi)缺血低氧

25、產(chǎn)生FNRBC增多;胎盤通透性增高，F(xiàn)NRBC由胎盤漏出增加，導(dǎo)致母血中FNRBC數(shù)量上升。 </p><p>　　此外，本文的研究結(jié)果也顯示，在FGR時(shí)母血中FNRBC數(shù)量明顯增加，在孕中期平均(45.04±16.02)×103/L，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于同期各組水平。這可能與胎兒生長(zhǎng)受限時(shí)，伴隨的慢性低氧和血紅蛋白增高，引起胎兒紅細(xì)胞生成和分化增強(qiáng)有關(guān)。另外，本文研究顯示，F(xiàn)GR時(shí)胎盤存在嚴(yán)重的滋養(yǎng)細(xì)胞

26、數(shù)量降低，細(xì)胞外基質(zhì)沉積增多。這種異常胎盤也可在子癇前期時(shí)發(fā)現(xiàn)，可以導(dǎo)致母胎運(yùn)輸增加和更多的FNRBC進(jìn)入母血。 </p><p>　　本文結(jié)果還顯示，F(xiàn)NRBC在正常核型胎兒母血中數(shù)量相對(duì)較少，大約每毫升有1～3個(gè)。在核型異常胎兒母血中FNRBC數(shù)量則明顯增多。胎兒異常時(shí)，母血中平均FNRBC的數(shù)量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達(dá)正常妊娠的6～9倍。這可能與異常胎兒時(shí)，胎兒胎盤免疫損傷

27、重，導(dǎo)致胎母血液交換明顯增加有關(guān)。此外，也與畸形或三體胎兒本身可產(chǎn)生更多FNRBC且壽命更長(zhǎng)有關(guān)。PCR定量分析結(jié)果表明，非整倍體胎兒母血中胎兒DNA含量明顯增加。也有報(bào)道顯示孕13三體胎兒的母血中FNRBC增加[6]，與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。提示母血中FNRBC計(jì)數(shù)可以作為預(yù)測(cè)胎兒染色體異常的一個(gè)輔助指標(biāo)。 </p><p>　　綜上所述，病理妊娠和胎兒異常時(shí)孕婦母血中FNRBC數(shù)量會(huì)發(fā)生明顯改變，母血中FNR

28、BC計(jì)數(shù)可輔助應(yīng)用于胎兒異常的產(chǎn)前篩查。建議有條件的地方可在孕8周開始對(duì)孕婦外周血FNRBC進(jìn)行檢測(cè)，如每毫升大于20個(gè)時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)病理妊娠和胎兒發(fā)育異常的相關(guān)檢查, 做到及早預(yù)防。 </p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】 </b></p><p>　　[1]周曉彬,紀(jì)新強(qiáng),徐莉.醫(yī)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件PPMS 1.5的組成和應(yīng)用特點(diǎn)[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2009,24

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