富集純化母血中胎兒有核紅細胞并利用胎兒有核紅細胞進行胎兒非整倍體的無創(chuàng)性產前診斷.pdf

1、第一部分從母親外周血中富集胎兒有核紅細胞 目的:利用顯微操作術和流式細胞術分離富集母血中的胎兒有核紅細胞(FNRBCs)，通過對富集方法的比較，探討分選胎兒細胞的最適方法。 方法:收集120例孕周為10-32周的孕婦外周血，密度梯度離心分離出單個核細胞層，分為2等分，分別用顯微操作和三種抗體流式分選富集胎兒有核紅細胞(FNRBCs)，后者每例標本分為5組，分別加入不同抗體：第1組.抗轉鐵蛋白受體抗體(CD71McAb)單

2、用；第2組.單克隆抗血型糖蛋白A抗體(GPAMcAb)單用；第3組.抗血紅蛋白—ξ抗體(ξ—Hb)單用；第4組.CD71+GPA聯用；第5組.CD71+GPA+ξ—Hb聯用。最后應用PCR技術檢測分選后的FNRBCs的SRY基因，計算鑒定細胞的符合率。 結論：流式細胞術結合顯微操作法可得到到高純度的FNRBCs，為后續(xù)的產前診斷打下良好的基礎。 第二部分鑒定胎兒細胞及母血中游離胎兒DNA 目的:通過用不同方法鑒定

3、胎兒細胞及胎兒游離DNA，比較各種方法的優(yōu)缺點，探討這幾種方法的適用性。 方法:收集175例孕齡為10-33周孕婦外周血8ml，其中7.5ml血用流氏細胞術結合顯微操作術提取單個胎兒細胞，另外0.5ml全血提取游離DNA。將每例標本分為3組：1組利用巢式PCR擴增單個FNRBC的SRY基因；2組利用PRINS技術檢測單個FNRBC中的Y染色體；3組利用熒光定量PCR擴增母血中游離胎兒DNA中的SRY基因。 結論:PRIN

4、S和QF-PCR是準確性高，特意性強的方法，可用于胎兒細胞及胎兒游離DNA的鑒定。 第三部分利用孕婦外周血進行無創(chuàng)性產前診斷胎兒非整倍體實驗一通過檢測孕婦外周血清中的AFP，β-HCG和μE3含量進行胎兒先天愚型的篩查 目的:探討采用甲胎蛋白(AFP)，絨毛膜促性腺激素β亞單位(Freeβ-HCG)，游離雌三醇(μE3)血清三聯法在染色體異常為主的先天性缺陷的產前篩查作用。 方法:對2003年8月至2005年8月

5、來我院婦產科門診進行產前檢查的孕婦278例，在知情情況下，自愿選擇唐氏血清標記篩查。采用酶聯免疫法測定上述3項指標，并結合孕婦臨床資料，用唐氏篩查風險軟件進行分析。最后隨訪追蹤每例篩選的孕婦至胎兒出生。 結論:對胎兒先天性缺陷，特別是染色體異常的胎兒產前篩查是重要的手段之一。產前篩查可降低圍產兒死亡率，降低出生缺陷率。它具有重要的社會效應和實用性，可普遍推廣使用。 實驗二利用孕婦血中的胎兒有核紅細胞診斷胎兒非整倍體

6、 目的:探索用孕婦外周血中的胎兒細胞進行無創(chuàng)性診斷胎兒非整倍體的新方法。 方法:取實驗一中唐氏篩查高危孕婦和到本實驗室自愿要求檢查的孕12-32周孕婦的肘前靜脈血，共112例。密度梯度離心后取單個核細胞層，采用流式細胞術從112例孕婦外周血中分離出FNRBCs，應用多重引物原位合成技術(PRINS)分別檢測FNRBCs內的X、Y及21號染色體。 結論:應用PRINS技術對孕婦外周血中的胎兒細胞進行無創(chuàng)性產前診斷胎兒非整