富集純化母血中胎兒有核紅細(xì)胞并利用胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行胎兒非整倍體的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷.pdf

1、第一部分從母親外周血中富集胎兒有核紅細(xì)胞 目的:利用顯微操作術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)分離富集母血中的胎兒有核紅細(xì)胞(FNRBCs)，通過對富集方法的比較，探討分選胎兒細(xì)胞的最適方法。 方法:收集120例孕周為10-32周的孕婦外周血，密度梯度離心分離出單個核細(xì)胞層，分為2等分，分別用顯微操作和三種抗體流式分選富集胎兒有核紅細(xì)胞(FNRBCs)，后者每例標(biāo)本分為5組，分別加入不同抗體：第1組.抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體(CD71McAb)單

2、用；第2組.單克隆抗血型糖蛋白A抗體(GPAMcAb)單用；第3組.抗血紅蛋白—ξ抗體(ξ—Hb)單用；第4組.CD71+GPA聯(lián)用；第5組.CD71+GPA+ξ—Hb聯(lián)用。最后應(yīng)用PCR技術(shù)檢測分選后的FNRBCs的SRY基因，計算鑒定細(xì)胞的符合率。 結(jié)論：流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合顯微操作法可得到到高純度的FNRBCs，為后續(xù)的產(chǎn)前診斷打下良好的基礎(chǔ)。 第二部分鑒定胎兒細(xì)胞及母血中游離胎兒DNA 目的:通過用不同方法鑒定

3、胎兒細(xì)胞及胎兒游離DNA，比較各種方法的優(yōu)缺點，探討這幾種方法的適用性。 方法:收集175例孕齡為10-33周孕婦外周血8ml，其中7.5ml血用流氏細(xì)胞術(shù)結(jié)合顯微操作術(shù)提取單個胎兒細(xì)胞，另外0.5ml全血提取游離DNA。將每例標(biāo)本分為3組：1組利用巢式PCR擴(kuò)增單個FNRBC的SRY基因；2組利用PRINS技術(shù)檢測單個FNRBC中的Y染色體；3組利用熒光定量PCR擴(kuò)增母血中游離胎兒DNA中的SRY基因。 結(jié)論:PRIN

4、S和QF-PCR是準(zhǔn)確性高，特意性強(qiáng)的方法，可用于胎兒細(xì)胞及胎兒游離DNA的鑒定。 第三部分利用孕婦外周血進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷胎兒非整倍體實驗一通過檢測孕婦外周血清中的AFP，β-HCG和μE3含量進(jìn)行胎兒先天愚型的篩查 目的:探討采用甲胎蛋白(AFP)，絨毛膜促性腺激素β亞單位(Freeβ-HCG)，游離雌三醇(μE3)血清三聯(lián)法在染色體異常為主的先天性缺陷的產(chǎn)前篩查作用。 方法:對2003年8月至2005年8月

5、來我院婦產(chǎn)科門診進(jìn)行產(chǎn)前檢查的孕婦278例，在知情情況下，自愿選擇唐氏血清標(biāo)記篩查。采用酶聯(lián)免疫法測定上述3項指標(biāo)，并結(jié)合孕婦臨床資料，用唐氏篩查風(fēng)險軟件進(jìn)行分析。最后隨訪追蹤每例篩選的孕婦至胎兒出生。 結(jié)論:對胎兒先天性缺陷，特別是染色體異常的胎兒產(chǎn)前篩查是重要的手段之一。產(chǎn)前篩查可降低圍產(chǎn)兒死亡率，降低出生缺陷率。它具有重要的社會效應(yīng)和實用性，可普遍推廣使用。 實驗二利用孕婦血中的胎兒有核紅細(xì)胞診斷胎兒非整倍體

6、 目的:探索用孕婦外周血中的胎兒細(xì)胞進(jìn)行無創(chuàng)性診斷胎兒非整倍體的新方法。 方法:取實驗一中唐氏篩查高危孕婦和到本實驗室自愿要求檢查的孕12-32周孕婦的肘前靜脈血，共112例。密度梯度離心后取單個核細(xì)胞層，采用流式細(xì)胞術(shù)從112例孕婦外周血中分離出FNRBCs，應(yīng)用多重引物原位合成技術(shù)(PRINS)分別檢測FNRBCs內(nèi)的X、Y及21號染色體。 結(jié)論:應(yīng)用PRINS技術(shù)對孕婦外周血中的胎兒細(xì)胞進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷胎兒非整