大豆苷元對(duì)斷奶和食物過(guò)敏動(dòng)物消化道的影響及TLRs在感染進(jìn)程中的表達(dá).pdf

1、本論文試驗(yàn)部分介紹了3個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)，涉及機(jī)體生命過(guò)程中3個(gè)重要時(shí)期（發(fā)育、過(guò)敏、感染）胃腸道的健康.前兩個(gè)實(shí)驗(yàn)主要研究了大豆苷元對(duì)胃腸道發(fā)育和免疫應(yīng)答以及微生物區(qū)系的影響。在第一個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)中，以斷奶仔豬為觀察對(duì)象，研究了大豆苷元對(duì)斷奶前后胃腸道組織的發(fā)育，并發(fā)現(xiàn)大豆苷元對(duì)斷奶仔豬胃壁組織的肥大細(xì)胞有顯著抑制作用；此后，文章的第二個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)以O(shè)VA致敏小鼠，建立過(guò)敏模型，進(jìn)一步研究其對(duì)肥大細(xì)胞的影響，兩個(gè)試驗(yàn)雖然將大豆苷元的功能與肥大細(xì)胞聯(lián)

2、系在了一起，但其作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究.文章的第三個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)側(cè)重于腸道免疫學(xué)基礎(chǔ)研究，涉及了目前免疫學(xué)研究熱點(diǎn)TLRs.該動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)一株有毒力的產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后，各種TLR及其相關(guān)分子的表達(dá)進(jìn)行了研究，并發(fā)現(xiàn)腸道TLR的作用方式可能與脾臟不同，為以后促進(jìn)腸道健康研究提供理論基礎(chǔ)。
　　 1.大豆苷元對(duì)斷奶仔豬胃腸道消化道發(fā)育的影響
　　 本試驗(yàn)研究了哺乳期飼喂大豆苷元對(duì)仔豬胃腸道組織發(fā)育的影響。3窩新生仔豬，在窩內(nèi)隨

3、機(jī)分為兩組：大豆苷元組和對(duì)照組，于7、9、11日齡每頭仔豬分別飼喂1、2、3mg大豆苷元-脫脂乳溶液或脫脂乳安慰劑；所有仔豬于21日齡斷奶；14、21、24和35日齡，每窩隨機(jī)抽取飼喂大豆苷元和對(duì)照組仔豬各一頭屠宰，取胃底部、十二指腸前端、空腸前端進(jìn)行組織學(xué)觀察.結(jié)果顯示，大豆苷元處理組胃底腺鹽酸細(xì)胞顯著多于對(duì)照組（P<0.05）；斷奶造成仔豬十二指腸和空腸腸絨毛高度變短，胃底腺增厚速度變快，但大豆苷元對(duì)腸絨毛高度和胃底腺厚度都無(wú)顯著影

4、響，結(jié)果說(shuō)明，哺乳期飼喂大豆苷元可能對(duì)斷奶仔豬胃底鹽酸細(xì)胞發(fā)育有促進(jìn)作用.
　　 2.大豆苷元對(duì)斷奶仔豬胃腸道免疫應(yīng)答的影響
　　 本試驗(yàn)研究了哺乳期飼喂大豆苷元對(duì)斷奶仔豬胃腸道免疫器官重量以及免疫應(yīng)答的影響.3窩新生仔豬，在窩內(nèi)隨機(jī)分為兩組：大豆苷元組和對(duì)照組，于7、9、11日齡每頭仔豬分別飼喂1mg,2mg、3mg大豆苷元.脫脂乳溶液或脫脂乳安慰劑；所有仔豬于21日齡斷奶；14、21、24和35日齡，每窩隨機(jī)抽取飼喂

5、大豆苷元和脫脂乳仔豬各一頭稱重、屠宰、稱量脾臟和胸腺重；取胃底部制成組織切片顯微觀察并統(tǒng)計(jì)胃底腺肥大細(xì)胞數(shù)量；測(cè)定空腸和回腸組織組胺以及血清皮質(zhì)醇.結(jié)果顯示，對(duì)照組仔豬脾臟和胸腺重量在斷奶第2周重顯著下降（P<0.05），大豆苷元組胸腺重在斷奶后第2周顯著大于對(duì)照組(P<0.05)，脾臟和胸腺重在斷奶前后無(wú)顯著變化（P>0.05）；斷奶可短暫引起仔豬胃組織中肥大細(xì)胞大量增加，大豆苷元組肥大細(xì)胞在斷奶前和斷奶后第3天都顯著少于對(duì)照組(P<

6、0.05）；可能由于錯(cuò)過(guò)了最佳觀察時(shí)間，仔豬斷奶后第3天和第2周都未見(jiàn)空腸和回腸組胺顯著升高，但斷奶后大豆苷元組回腸組胺含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05）.結(jié)果說(shuō)明，哺乳期飼喂大豆苷元可以抑制斷奶造成的胸腺萎縮和肥大細(xì)胞大量增殖，減少斷奶仔豬回腸組胺合成。
　　 3.大豆苷元對(duì)食物過(guò)敏小鼠免疫應(yīng)答的影響
　　 本試驗(yàn)利用OVA誘導(dǎo)小鼠食物過(guò)敏，研究大豆苷元和染料木素對(duì)其血清OVA特異性抗體水平和肥大細(xì)胞數(shù)量的影響。結(jié)果顯

7、示，致敏組小鼠血清OVA-IgG1滴度劇烈增加，肥大細(xì)胞雖沒(méi)有顯著變化（P>0.05），但mMCP-7陽(yáng)性肥大細(xì)胞數(shù)量顯著（P<0.05）?？诜蠖管赵腿玖夏舅仫@著降低OVA-IgG1水平，減少了肥大細(xì)胞數(shù)量，尤其是mMCP-7陽(yáng)性肥大細(xì)胞的數(shù)量顯著降低（P<0.05）；染料木素對(duì)染料木素的抑制作用顯著強(qiáng)于大豆苷元(P<0.05)，結(jié)果說(shuō)明大豆苷元和染料木素可緩解食物過(guò)敏的發(fā)生進(jìn)程。
　　 4.大豆苷元對(duì)食物過(guò)敏小鼠盲腸微生物

8、區(qū)系的影響
　　 本試驗(yàn)利用PCR/DGGE技術(shù)研究了OVA誘導(dǎo)過(guò)敏對(duì)小鼠盲腸食糜微生物區(qū)系的影響，以及大豆苷元和染料木素對(duì)致敏小鼠盲腸食糜微生物區(qū)系的影響。結(jié)果表明，OVA誘導(dǎo)過(guò)敏和大豆苷元或染料木素對(duì)小鼠盲腸食糜的DGGE條帶數(shù)和多樣性指數(shù)皆沒(méi)有顯著影響.DGGE圖譜顯示，OVA誘導(dǎo)導(dǎo)致一特導(dǎo)條帶消失，但口服大豆苷元或染料木素的致敏小鼠仍可觀察到該特征條帶存在；切膠測(cè)序后，基因序列比對(duì)結(jié)果顯示，該特征條帶所對(duì)應(yīng)的微生物與At

9、opostipes suicloacalis的相似性為96％.口服大豆苷元或染料木素小鼠導(dǎo)致某一特異條帶出現(xiàn)，切膠測(cè)序后，基因序列比對(duì)結(jié)果顯示，該特征條帶所對(duì)應(yīng)的微生物與Clostridium metallolevans strain ASI1相似性為99％.結(jié)果說(shuō)明，OVA過(guò)敏誘導(dǎo)沒(méi)有導(dǎo)致Balb/c小鼠盲腸微生物區(qū)系優(yōu)勢(shì)條帶數(shù)減少或多樣性降低，但使個(gè)別細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)種群地位消失，口服大豆苷元或染料木素可穩(wěn)定這些優(yōu)勢(shì)菌群，大豆苷元和染料木

10、素可使某些菌群得以富集.
　　 5.TLRs在產(chǎn)氣莢膜梭菌感染進(jìn)程中的表達(dá)
　　 本試驗(yàn)利用分子生物學(xué)方法研究肉雞在產(chǎn)氣英膜梭菌感染后TLR及其相關(guān)配體和細(xì)胞因子的表達(dá).結(jié)果表明，產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒后，脾臟和回腸中TLR及其相關(guān)配體和細(xì)胞因子變化規(guī)律明顯不同：在脾臟中，TLRl.2、TLR2.1和TLR15顯著上調(diào)，且彼此高度相關(guān)（P<0.05），但其部分相關(guān)配體和細(xì)胞因子出現(xiàn)下調(diào)或有下調(diào)趨勢(shì)；在回腸中，TLRI.1、TL

11、R2.2和TLR21在攻毒后上調(diào)，且彼此高度相關(guān)（P<0.05），其相關(guān)分子MyD88、TRAF6、TRIF、IRF3、RIP-1和IL-8的表達(dá)都在攻毒后顯著上調(diào)（P<0.05）；回腸類TNF-α的表達(dá)也顯著上調(diào)（P<0.05），但與各TLRs無(wú)顯著相關(guān)性.此外，TLR4和TLR7在脾臟中的表達(dá)也有所上調(diào)，但在回腸中無(wú)顯著變化。結(jié)果說(shuō)明，TLR2亞群在產(chǎn)氣莢膜梭菌感染中起重要作用，但其表達(dá)模式在回腸和脾臟中存在很大差異，脾臟的免疫應(yīng)答