結(jié)核菌培養(yǎng)方法、

1、,,歡迎光臨,結(jié)核菌培養(yǎng)方法、耐藥性及存活時間的研究,,,抗結(jié)核藥物的使用，在結(jié)核病防治上起了劃時代的作用。50年代采用INH+PAS聯(lián)合治療，取得了較好療效。但PAS服用量大，消化道反應(yīng)多，病人不能耐受，90%不能完成治療程。瑞士Geistlich藥廠研制的Dipasic（簡稱DPC）（德國又名GEWO399），是以特殊方法，將INH與PAS合成的化合物。它能代替INH+PAS聯(lián)合用藥，增加療效，副作用明顯比PAS為少，德國Freud

2、enthal等50余位專家均有Dipasic臨床應(yīng)用的報告，認(rèn)為有效。但無Dipasic耐藥性的報道。,當(dāng)前，我國耐藥性病人不斷增加，尋求合理用藥，是當(dāng)務(wù)之急，為此我們對Dipasic作耐性研究，目的在于，（1）了解Dipasic對耐藥菌株是否有效？（2）Dipasic的藥物抑菌濃度如何？以便研究用量與用法，提高臨床療效。,1、研究方法：從安徽醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的門診及病房肺結(jié)核病人的痰進行結(jié)核菌培養(yǎng)，無論病人是初治抑復(fù)治，亦不分男女

3、老少，凡痰菌培養(yǎng)陽性者，即作為研究對象。結(jié)核菌的檢驗，按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)操作進行。藥敏培養(yǎng)基的制備：液體雞蛋培養(yǎng)基內(nèi)，按比例加入抗結(jié)核藥物，其濃度按我國藥敏標(biāo)準(zhǔn)，如INH、PAS、TB1，每毫升分別為1μg及10μg，SM、KM、CPM分別為10μg，RFP及RFD分別為50μg及250μg，EMB為5μg及50μg。,Dipasic則暫定為每毫升含藥0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg四種。加入藥物后，充分搖勻混合后，分裝在中試管內(nèi)，

4、每管5毫升，擺成斜面，進行85℃—90℃一小時凝固滅菌，24小時后再滅菌一次，制成的含藥培養(yǎng)基，保存在冰箱，一個月內(nèi)有效。菌液制備：取培養(yǎng)基上生長一個月內(nèi)的菌落，于磨菌器內(nèi)滅菌生理鹽水研磨呈均勻的菌液，再加滅菌鹽水稀釋，與標(biāo)準(zhǔn)管比較（制成每毫升含1毫升的菌液），最后100倍稀釋成每毫升含10-2毫克菌液備用。,菌液接種：將含不同濃度的含藥培養(yǎng)基順序排列，并有不含藥物的培養(yǎng)基作為對照。取每毫升含10-2毫克的菌液，每管接種0.1毫升，接種

5、菌量為10-3毫克的菌液。放在37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)，每周觀察一次，四周報告結(jié)果。報告的標(biāo)準(zhǔn)是，如培養(yǎng)基上無菌生長者為（一），培養(yǎng)基上有菌落數(shù)在50個以下者為（+），培養(yǎng)基上菌落數(shù)50個以上，但無融合者為（++），培養(yǎng)基上菌落大部分融合者為（+++）。,2、研究結(jié)果：我們研究的10種抗結(jié)核藥物耐藥性試驗，這10種抗結(jié)核藥物是：INH、PAS、DPC、TB1、EMB、RFP、RFD、SM、KM及CPM，圍繞本文目的，我們僅取30例病人的其中IN

6、H、PAS及DPC三種藥物的耐藥性進行分析，其他另行報道。INH、PAS的濃度，按國家耐藥性標(biāo)準(zhǔn)，分為1μg及10μg，以每毫升1μg為耐藥上界，1μg藥濃下不能生長者為陰性，為敏感菌。1μg生長者為陽性，為耐藥菌。,DPC的濃度，由于我們尚需尋求合適的抑菌濃度，故分為每毫升含藥0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg四種不同的濃度。為便于統(tǒng)計比較，暫以1μg作為耐藥標(biāo)準(zhǔn)，1μg以下者為敏感，1μg以上者為耐藥。,表1 30例

7、耐藥情況分析,,從表1可見耐INH菌珠已達(dá)90%,耐DPC菌株為33.4%,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,X2=27.44,P＜0.001,有高度顯著性。PAS與DPC比較，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，校正卡方為0.062，P＞0.05,無顯著性。,表2 敏感與耐藥程度的分析,表1和表2可以說明INH、PAS、DPC為三種不同的抗結(jié)核藥物，他們對不同的結(jié)核菌，有不同的敏感與耐藥情況。從8例耐PAS菌株中，我們發(fā)現(xiàn)，此8例同時有三種以抗結(jié)核藥物之耐藥，耐DPC菌

8、株10例中，也有此一現(xiàn)象，是多種耐藥性菌株。,表3 30例DPC抑菌濃度的分析,從表3可見,DPC抑菌濃度,1μg尚有9例培養(yǎng)仍可生長,10μg時有6.6培養(yǎng)陽性。,討論：過去，有人認(rèn)為DPC是一種INH+PAS的混合物，我們的研究證明從耐藥性及耐藥程度分析，DPC是獨立的一種抗結(jié)核藥物，是INH與PAS的一種化合物，當(dāng)前，我國耐INH菌株已達(dá)90%，這樣的耐藥性，仍在廣泛應(yīng)用，是否降低療效，值得重視。INH耐藥后，是否

9、致病力全均下降，從我們的結(jié)核菌培養(yǎng)后生長時間看，并未發(fā)現(xiàn)耐藥菌的生長延緩。,比統(tǒng)計學(xué)看來，耐INH菌株，應(yīng)用DPC仍有效，差異有高度顯著性。因此，DPC可否作為另一種抗結(jié)核藥物，與RFP、RFD等聯(lián)合應(yīng)用，關(guān)鍵在于DPC是否和PAS那樣，對RFP、RFD吸收有障礙，會降低RFP的血濃度，降低療效。如果DPC并沒有PAS這一代謝現(xiàn)象，則DPC作為另一抗結(jié)核藥物，其應(yīng)用前景就較為廣闊了。,Kowilsky氏測定DPC服用后血濃度的記載，氏用

10、DPC與INH同量時，血濃度1小時5.8mg/L,3小時6mg/1,7小時4.56mg/L,12小時2.6mg/L,14小時2mg/L，氏認(rèn)為DPC明顯優(yōu)于INH，其優(yōu)點是：（1）DPC排泄慢，INH12小時血濃度僅有0.003mg/L，而KPC仍有2.6mg/L，14小時時INH濃度已為”0”，KPC仍高達(dá)2mg/L。（2）血濃度KPC比INH高，在二者給同樣的藥量時，INH血濃度為5.2mg/L，DPC則為5.8mg/L。,從Wil

11、brandt氏[1]LD50的研究中，DPC對小白鼠及兔的LD50一倍于INH，每公斤體重達(dá)0.4mg，因此DPC的毒性是很小的，應(yīng)用大于INH一倍的用量是完全可以耐受的。從我們的研究中，也可以看出，DPC和INH同樣的1μg耐藥性分界線是不夠的，1μg有30%陽性，要提高療效，加大用量，似屬必要。也就是說，INH每日常規(guī)用量6mg/kg，DPC用量應(yīng)為12mg/kg，或更高些。,結(jié)論：作者用結(jié)核菌培養(yǎng)及耐藥性測定的方法研究結(jié)果，認(rèn)為D

12、PC是一種獨立的抗結(jié)核藥物，在各種抗結(jié)核藥物耐藥性增加的情況下，為了便于聯(lián)合治療，DPC有一定的實用價值。鑒于DPC1μg仍有30%生長，認(rèn)為用量應(yīng)加倍，提高血濃度，以求提高療效，建議推廣應(yīng)用。,目的：了解Dipasic對耐藥菌株是否有效及其藥物抑菌濃度。方法：藥敏培養(yǎng)基內(nèi)加入10種不同濃度抗結(jié)核藥物，加入結(jié)核菌菌液10-3毫克。結(jié)果：四周后觀察三種抗結(jié)核藥物耐藥情況。結(jié)論：DPC是一種獨立的抗結(jié)核藥物對耐藥結(jié)核菌都有效，但在1μ

13、g濃度時仍有30%生長，認(rèn)為用藥量量應(yīng)加倍。 【關(guān)鍵詞】：結(jié)核菌培養(yǎng)方法結(jié)核菌耐藥性　結(jié)核菌存活時間　結(jié)核菌試驗,科研三要素,處理因素：抗結(jié)核藥物的濃度研究對象：肺結(jié)核病人 效益指標(biāo)：DPC是一種獨立的抗結(jié)核的藥物，DPC有一定的實用價值,研究對象,診斷標(biāo)準(zhǔn)：痰菌培養(yǎng)呈陽性納入標(biāo)準(zhǔn)：痰菌培養(yǎng)呈陽性且未患有并發(fā)癥，并對本次試驗無影響排除標(biāo)準(zhǔn)：不能有并發(fā)癥；未接受相關(guān)治療；不能有其它生理或病理狀況（月經(jīng)周