結(jié)核菌素純蛋白衍生物刺激人γδT細胞效應(yīng)分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   探討結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)對人外周血的γδT細胞的刺激效應(yīng)。
   方法:
   1.用Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞(PBMC)后,經(jīng)尼龍毛柱法分離獲取T細胞。
   2.將T細胞分別用卡介苗與PPD刺激擴增γδT細胞后,用流式細胞儀分選純化γδT細胞,并檢測其抗原提呈細胞表型。
   3.PBMC用貼壁法制備單核細胞后,誘導(dǎo)培養(yǎng)分化為成熟DC細胞,用流式

2、細胞儀檢測其成熟程度。
   4.T細胞用CFSE標記后按培養(yǎng)基成分分為以下四組:
   ①空白組:單純結(jié)核分枝桿菌分泌性抗原(Mtb-Sag);
   ②BCG組:卡介苗刺激γδT細胞后再與Mtb-Sag孵育2小時;
   ③PPD組:PPD刺激的γδT細胞后再與Mtb-Sag孵育2小時;
   ④DC組:成熟DC細胞與Mtb-Sag孵育2小時。
   培養(yǎng)9天后檢測T細胞及CD4+T細

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