新型竹紅菌素衍生物的光譜特性及光動(dòng)力學(xué)效應(yīng)的初步研究.pdf

1、目的： 研究五種新型竹紅菌素衍生物的光譜特性和對(duì)體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞的光動(dòng)力(PhotodynamicTherapy，PDT)殺傷效應(yīng)，篩選較為優(yōu)秀的竹紅菌素衍生物，并進(jìn)一步探討其在體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)運(yùn)方式；研究該竹紅菌素和與血清蛋白的結(jié)合，為竹紅菌素類光敏藥物的開發(fā)提供研究依據(jù)。 材料與方法： 1．竹紅菌素衍生物光譜特性的研究紫外-可見分光光度計(jì)測定THB、3HB、4HB、3SB、4SB、HB在8uM/mL的PBS

2、及35mM/mL的DMSO中的吸收光譜。 使用紫外分光光度計(jì)和熒光光譜儀測定4SB和HpD在PBS及20μM/ml的HSA的吸收和發(fā)射光譜。吸收和發(fā)射的樣品濃度分別為6.25μg/mL和3.3μg/mL。 2．竹紅菌素衍生物對(duì)體外培養(yǎng)A549細(xì)胞光動(dòng)力殺傷效應(yīng)的研究所有PDT處理組的處理均為：藥物與細(xì)胞孵育4h后照光，功率密度20mW/cm2，照射時(shí)間1000s，能量密度20J/cm2，照完繼續(xù)孵育24h后測定。

3、 (1)630nm和532nm激光照射0.94nM/ml五衍生物和HB，MTT法測定存活率。 (2)3SB、4SB和HpD與A549細(xì)胞孵育24h，MTT法測定存活率，并比較三者的暗毒性IC50。 (3)532nm激光照射不同濃度的3SB、4SB和HpD，MTT法測定存活率，并比較三者IC50。 (4)630nm激光照射4SB和HpD，MTT法測定存活率，并對(duì)比IC50的差異。 (5)以安全系數(shù)(暗毒性I

4、C50/光毒性IC50)，對(duì)比532nm和630nm光照下竹紅菌素衍生物和HpD的安全性。 3.4SB與HSA的相互作用(1)將4SB加入過量的HSA中，測定293nm處吸收強(qiáng)度隨時(shí)間的變化并以490nm激發(fā)，測660nm熒光發(fā)射強(qiáng)度隨時(shí)間的變化。(2)HSA按0、1.25、2.5、5.0、10、20μM/m順序分別加到5μM/ml的4SB中，分別測定其吸收光譜并以493nm激發(fā)，測定其熒光發(fā)射光譜。(3)將10μM/mlHSA

5、分別加入0、2.5、5.0、7.5、10、20、30、40μM/ml的4SB中，以493nm光激發(fā)測定4SB的熒光發(fā)射光譜。(4)10μM/ml的HSA分別加到0、2.5、5.0、7.5、10、20、30、40μM/ml的4SB中，以295nm激發(fā)HSA的色氨酸其在340nm的熒光發(fā)射光譜。并采用公式：Fcor=Fobsdantilog[(Aexc+Aem)/2][34]校正。 結(jié)果： 1．竹紅菌素衍生物的光譜特性與母體

6、HB相比，各個(gè)衍生物在腫瘤光療窗口(600nm～900nm)光吸收都有很大提高。相對(duì)于PBS環(huán)境，HB及其衍生物在DMSO環(huán)境，吸收光譜紅移(1～15nm)、吸收強(qiáng)度增加；相對(duì)PBS在HSA環(huán)境中的變化趨勢與其在DMSO環(huán)境中相近，光譜紅移，吸收發(fā)射都增強(qiáng)，其中HB變化幅度最大。4SB吸收增強(qiáng)了78％，4SB熒光峰藍(lán)移20nm，強(qiáng)度增加了8.83倍。2位取代的THB、3HB、4HB和17住取代的3SB、4SB衍生物光譜性質(zhì)接近；HpD在

7、兩體系中的光譜基本無變化。 2．竹紅菌素衍生物對(duì)A549細(xì)胞光動(dòng)力殺傷效應(yīng)的研究3SB、4SB在630nm及532nm激光照射下對(duì)A549的光動(dòng)力殺傷作用比其它衍生物強(qiáng)，接近HB；暗毒性為HpD＞3SB＞4SB分別為7.84、11.22、21.93ug/ml，HpD暗毒性為4SB的2.79倍；532nm激光照射，3SB，4SB的光毒性分別為103.86、84.16ng/ml是HpD960.14ng/ml的10.53和11.4倍，

8、但前兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；630nm激光照射下，4SB的光毒性50.7ng/ml是HpD1069.88的21.2倍(p＜0.05)；532nm下安全系數(shù)4SB(260.6)＞3SB(108)＞HpD(8.2)，630nm下安全系數(shù)4SB(432.5)＞HpD(7.3)。HpD在532和630nm兩波長下的光毒性IC50無統(tǒng)計(jì)差異(P＞0.05)，而4SB有統(tǒng)計(jì)差異(p＜0.05)。 3.4SB與HSA的相互作用與

9、HSA結(jié)合4SB吸收和熒光都增強(qiáng)，在30min達(dá)到飽和值，且吸收光譜紅移；在HSA色氨酸特征峰淬滅實(shí)驗(yàn)中，4SB與HSA分子比和熒光淬滅的線性關(guān)系在1：1時(shí)發(fā)生變化，校正后更明顯。 結(jié)論： 1．從光毒性、暗毒性和安全系數(shù)綜合考慮，4SB是五種新型竹紅菌素衍生物中最優(yōu)秀的光敏劑。2。4SB在HSA中的兩個(gè)強(qiáng)吸收峰(493nm，630nm)分別位于良性血管疾病和腫瘤的治療窗口，且其在紅光區(qū)的吸收系數(shù)和光動(dòng)力學(xué)效應(yīng)均明顯強(qiáng)于H