新型二氫卟吩e-,4-衍生物光敏特性和藥代動力學的初步研究.pdf

1、目的：通過對新型二氫卟吩e4的六種不同衍生物的光譜特性及體外培養(yǎng)人肺癌A549細胞的光動力殺傷效應(yīng)進行研究，擇優(yōu)選擇一種新型二氫卟吩e4衍生物，進一步研究其在荷瘤小鼠體內(nèi)的分布及兔藥代動力學特點，探討其在腫瘤治療中的應(yīng)用前景。 方法與結(jié)果：(1)分別用PBS和含10％人血清生理鹽水溶解新型二氫卟吩e4不同衍生物原液(代號分別為1401、1402、1403、1404、1405、1601)，配制成濃度為1μg的樣品溶液，分別用紫外分

2、光光度計和熒光分光光度計測量每份樣品溶液的吸收光譜和熒光發(fā)射光譜，分析其光譜特性。并與血卟啉單甲醚(Hematoporphyrinmonomethylether，HMME)進行比較。二氫卟吩e4不同衍生物在PBS中的吸收光譜表明，它們在300～700nm之間都有三個吸收峰，最大吸收峰位于402nm左右處，次吸收峰位于654nm左右處，最小吸收峰位于500nm處。而HMME的最大吸收峰位于394nm處，在500～650nm范圍內(nèi)還有4個小

3、吸收峰，分別位于500、530、560、613nm，隨波長增加其強度逐漸降低。二氫卟吩e4不同衍生物在654nm的吸收強度(吸光度值)由大到小順序排列依次為1404(0.0511)＞1402(0.048)＞1401(0.033)＞1403(0.031)＞1601(0.025)＞1405(0.013)，為HMME在613nm處吸收強度(0.002)的6～25倍。與10％人血清生理鹽水中吸收光譜相比，上述光敏劑的吸收波長均有5～9nm的紅移

4、。二氫卟吩e4不同衍生物的熒光發(fā)射光譜表明在650～670nm內(nèi)，均只有一個發(fā)射峰，其中以1402熒光發(fā)射強度最高，1405熒光發(fā)射強度最低。而HMME的熒光發(fā)射譜表明在紅光區(qū)有兩個發(fā)射峰，分別位于613和671nm處。二氫卟吩e4不同衍生物中除1405外，其余衍生物的最大熒光強度均強于HMME。在10％血清溶液中，二氫卟吩e4不同衍生物發(fā)射峰分別紅移4nm，HMME紅移10nm。 (2)以不同濃度的不同二氫卟吩e4衍生物及HM

5、ME分別孵育人肺癌A549細胞4h，用MTT法分別測定不同濃度下的細胞存活率；同樣條件下分別用波長為630nm半導體激光，以20mW/cm功率密度照射1000s。照光后置于37℃、5％CO2的孵箱中繼續(xù)孵育24h后，用MTT法分別測定不同濃度下的細胞存活率，繪制細胞殺傷效應(yīng)曲線并擬合曲線方程，根據(jù)方程求出不同光敏劑對細胞的半數(shù)殺傷濃度(IC50)。結(jié)果表明，對A549細胞的暗毒性作用由高到低依次為1403＞1401＞1402＞1404＞

6、1601＞HMME＞1405；光動力殺傷效應(yīng)由大到小依次為1403＞1404＞1401＞1402＞1601＞HMME＞1405。本實驗采用暗毒性IC50與光毒性IC50之比，表示藥物的安全系數(shù)，此比值越大，表示光敏劑暗毒性越小、光毒性越大，安全系數(shù)也越大。結(jié)果表明安全系數(shù)由大到小依次為HMME＞1405＞1601＞1404＞1401＞1403＞1402?；趯饷魟┑脑u選標準為既安全又高效的綜合考慮，擇優(yōu)選擇了光動力殺傷效應(yīng)約是HMME

7、7倍、安全系數(shù)為1301.40相對安全的1404，進行更加深入的研究。 (3)建立S180肉瘤小鼠模型后，尾靜脈注射10mg/kg二氫卟吩e4衍生物1404，用熒光分光光度法測定其在小鼠體內(nèi)的分布，并比較腫瘤與不同組織間的分布比。將5只家兔分別靜脈注射15mg/kg的1404后，以熒光分光光度法測定血藥濃度，并根據(jù)血藥濃度-時間數(shù)據(jù)計算藥代動力學參數(shù)。結(jié)果表明荷瘤小鼠靜脈注射二氫卟吩e4衍生物1404后，迅速分布于除腦與心臟外的

8、其它各組織，靜注1～3h后各組織藥物濃度均達峰值，其中以肝臟含量最高。于注射后24～48h，除肝臟、皮膚和腫瘤尚存少量藥物外，其余各組織均已消除，以腫瘤與皮膚的清除速度最慢。給藥后3h，光敏劑1404在腫瘤與皮膚間的分布比差距最大9(腫瘤/皮膚為3.63)，在腫瘤與骨骼肌間的分布比差距也很大(腫瘤/骨骼肌為20)，此藥未能透過血-腦屏障而進入腦組織。在兔體內(nèi)的藥物動力學表明此藥在動物體內(nèi)吸收量較大，但消除速度較慢。 結(jié)論：二氫卟

9、吩e4衍生物在紅光區(qū)的吸收系數(shù)較HMME高，更適用于腫瘤光動力治療；除1405外，其余二氫卟吩e4衍生物熒光強度均強于HMME，提示可能在熒光診斷方面有一定發(fā)展前景。二氫卟吩e4衍生物中1404對人肺癌A549細胞的暗毒性小、光動力效應(yīng)強，在治療腫瘤方面有一定的應(yīng)用前景。1404在S180肉瘤小鼠體內(nèi)正常組織分布與消除速度較快，但皮膚的清除速度慢，避光時間可能會因此延長；給藥后3h，藥物在腫瘤與皮膚及骨骼肌間的分布比差距大，此時做光動力