四艾滋病梅毒丙肝檢測(cè)及結(jié)果意義教程

1、艾滋病梅毒丙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及影響結(jié)果因素分析,內(nèi)容提要：,1.艾滋病檢測(cè)程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。2.梅毒檢測(cè)程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。3.丙肝檢測(cè)程序、方法應(yīng)用和注意事項(xiàng)。4.影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的因素分析,艾滋病檢測(cè)方法,常用HIV病原學(xué)檢測(cè)方法: 1. 核酸檢測(cè)（ PCR、病毒載量） 2. 病毒培養(yǎng)分離 3. P24抗原檢測(cè)常用HIV抗體檢測(cè)方法: 初篩：1.酶聯(lián)免疫吸附法 ELI

2、SA：第三代、第四代 2.快速檢測(cè) RT：金標(biāo)、硒標(biāo) 3.簡(jiǎn)單法 PA: 明膠顆粒凝集 確證：免疫印跡法 WB:（Western Blot）、RIBA其他相關(guān)檢測(cè)方法: 免疫功能測(cè)定：CD4/CD8檢測(cè),HIV抗體檢測(cè)目的,1 HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。2 以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根據(jù)特殊需

3、要進(jìn)行的體檢等。3 以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。4 以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。,1 根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。2 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP。3 篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，須作確證試驗(yàn)。4 篩查試驗(yàn)陰性， 不應(yīng)做確證試驗(yàn)。5 篩查及確證試驗(yàn)陽(yáng)性均應(yīng)做好咨詢工作。,HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn),HIV抗體篩查檢測(cè)

4、流程,初篩試驗(yàn),1、HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確證試驗(yàn)。 2、根據(jù)檢測(cè)目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩檢測(cè)，對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報(bào)告；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。,復(fù)檢試驗(yàn),對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。 如果初篩檢測(cè)使用抗原抗體聯(lián)合試劑

5、，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。 如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。 如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，而抗體試劑檢測(cè)為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1 p24抗原或核酸檢測(cè)，必要時(shí)進(jìn)行隨訪。,確證試驗(yàn),1 確證試劑必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。2 確證樣品可采用血清、血漿

6、、濾紙干血斑樣品。3 確證方法包括免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等。,HIV抗體不確定（±）,結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測(cè)，如帶型沒(méi)有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則報(bào)告陽(yáng)性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒(méi)有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽(yáng)性，不滿足陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情

7、況決定是否繼續(xù)隨訪。 隨訪期間可根據(jù)需要，檢測(cè)病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實(shí)際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)或HIV-2核酸檢測(cè)，以進(jìn)一步明確HIV-2感染狀態(tài)，疑難樣品送國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步分析。,HIV-2抗體陽(yáng)性,出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時(shí)呈HIV-1抗體陽(yáng)性反應(yīng)，報(bào)告HIV-1抗體陽(yáng)性，不推薦進(jìn)一步做HIV-

8、2抗體確證試驗(yàn)；如果同時(shí)呈HIV-1抗體不確定或陰性反應(yīng)，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)。同時(shí)符合以下二條標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條env帶（gp36和gp140/ gp105），和試劑盒提供的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判為HIV-2抗體陽(yáng)性。,孕產(chǎn)婦新生兒檢測(cè),艾滋病快速檢測(cè)試驗(yàn)（RT）,是在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種檢測(cè)技術(shù)，它用膠體金或硒標(biāo)記抗原、抗體后以層析方法進(jìn)行檢測(cè)。突出優(yōu)點(diǎn)為快速、試劑便于保存、檢測(cè)不需要特殊

9、設(shè)備并可以單份檢測(cè) ，比較適用于基層醫(yī)療單位和標(biāo)本初篩。挑戰(zhàn)：進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度和特異性，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)多元化，進(jìn)行定量和半定量檢測(cè)膠體金紙條將會(huì)更加廣泛地應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。,,,,快速試劑使用中存在的問(wèn)題,快速檢測(cè)只是初篩檢測(cè)，存在較高的假陽(yáng)性率和假陰性率；技術(shù)上屬于主觀判讀，不具備標(biāo)準(zhǔn)化條件；快速檢測(cè)的質(zhì)量控制問(wèn)題目前沒(méi)有有效方法；價(jià)格是常規(guī)技術(shù)的5倍。行政經(jīng)費(fèi)政策不支持，個(gè)人支付價(jià)位高；存在較大的批間誤差，加上不屬于政策規(guī)定項(xiàng)

10、目，風(fēng)險(xiǎn)較大，基層醫(yī)療衛(wèi)生單位不愿意承擔(dān)責(zé)任。擔(dān)心敏感性不夠高，不敢出陰性報(bào)告；,HIV-1抗原檢測(cè)的用途：,1 HIV-1感染窗口期、HIV抗體不確定或HIV-1陽(yáng)性母親所生嬰兒的鑒別診斷。2 第四代HIV檢測(cè)試劑的陽(yáng)性結(jié)果的輔助診斷。3 監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展或抗病毒治療效果。4 HIV分離培養(yǎng)，病毒復(fù)制狀況的監(jiān)測(cè)。,HIV-1抗原檢測(cè)方法和結(jié)果報(bào)告,方法：ELISA，有定量檢測(cè)。結(jié)果報(bào)告和解釋： HIV-1 P

11、24抗原篩選試驗(yàn)有反應(yīng)的標(biāo)本必須經(jīng)過(guò)中和試驗(yàn)確證以后才能判斷陽(yáng)性或陰性。 HIV-1 P24抗原陽(yáng)性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。 HIV-1 P24抗原陰性結(jié)果不能排除HIV感染。 監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展或抗病毒治療效果應(yīng)進(jìn)行HIV-1 P24抗原的定量檢測(cè)。,HIV核酸檢測(cè)的意義,1 早期診斷：嬰幼兒或成人有急性HIV感染綜合癥或流行病學(xué)史，且不同時(shí)間的兩次HIV核酸檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，即可

12、診斷。使用多樣品集合的方法，HIV抗體陰性的高危人群樣品進(jìn)行集合核酸檢測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染。2 疑難樣本的輔助診斷：幫助提供HIV感染早期或終末期的證據(jù)。3 遺傳變異監(jiān)測(cè)：用于HIV-1和HIV-2感染的鑒別診斷、HIV感染傳播鏈的分析、HIV基因亞型和重組病毒的鑒定和分析以及人群HIV遺傳變異趨勢(shì)的監(jiān)測(cè)。4 耐藥性監(jiān)測(cè)：了解耐藥性病毒株流行的態(tài)勢(shì)和指導(dǎo)臨床醫(yī)生判斷抗病毒治療效果和修改抗病毒治療方案。5 病程監(jiān)控及預(yù)測(cè)

13、：有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。6 指導(dǎo)抗病毒治療及療效判定,艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童HIV感染早期診斷檢測(cè)流程,HIV-1耐藥檢測(cè),1 耐藥監(jiān)測(cè)用于HIV-1感染人群和抗病毒治療人群。用于新近感染人群的耐藥性監(jiān)測(cè)，了解耐藥毒株流行的情況；用于治療前人群的監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)制定一線抗病毒治療方案；用于抗病毒治療人群的耐藥性監(jiān)測(cè)，進(jìn)行HIV-1耐藥發(fā)生、發(fā)展趨勢(shì)以及影響因素的分析，指導(dǎo)和完善大規(guī)模公共衛(wèi)生模式抗病毒治療的程

14、序，以及制定二線治療方案。.2 耐藥檢測(cè)用于個(gè)體患者的耐藥檢測(cè)。在抗病毒治療前進(jìn)行耐藥檢測(cè)，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生制定抗病毒治療方案，保證抗病毒治療的效果；在抗病毒治療過(guò)程中進(jìn)行耐藥檢測(cè)，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生分析治療失敗的原因，并制定補(bǔ)救治療方案。,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),病原體檢測(cè) 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色 熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體法血清學(xué)檢測(cè) 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（非特異性試驗(yàn)） 梅毒螺旋體

15、抗原血清試驗(yàn)（特異性試驗(yàn)）,病原體檢測(cè)——暗視野顯微鏡檢查,螺旋狀，纖細(xì)、白色、有折光的。長(zhǎng)約為兩個(gè)紅細(xì)胞，有6-12個(gè)螺旋。具有旋轉(zhuǎn)、蛇行及伸縮等3種特征性的運(yùn)動(dòng)方式。,病原體檢測(cè)——鍍銀染色檢查,方法: 涂片干燥 →固定 →洗滌 →媒染 →銀染 →鏡檢 可見到染成棕褐色的梅毒螺旋體。,病原體檢測(cè)——直接熒光法,FITC熒光素標(biāo)記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體與樣本中的梅毒螺旋體結(jié)合，在熒光顯微鏡下，可見到發(fā)黃綠色熒光的梅毒螺

16、旋體。,病原體檢測(cè),具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法。未見到梅毒螺旋體，不能排除罹患梅毒，可讓患者復(fù)查及進(jìn)行血清學(xué)檢查。,血清學(xué)檢測(cè),非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL） 不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR） 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR、TRUST）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA） 梅毒

17、螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn),以心磷脂、卵磷脂、膽固醇為抗原,檢測(cè)抗類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素），主要是IgM和IgG混合體。方法簡(jiǎn)單、快速、價(jià)格低廉、敏感性和特異性較好，適用于大量人群的篩查。治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)為陰性，可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染指征。梅毒治療后部份病人存在血清固定現(xiàn)象。用于鑒別先天

18、梅毒與被動(dòng)反應(yīng)素血癥。VDRL試驗(yàn)主要用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查。艾滋病人合并感染梅毒，血清試驗(yàn)呈陰性。存在一定的假陽(yáng)性。不同試驗(yàn)的結(jié)果沒(méi)有可比性。,前帶現(xiàn)象,指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒。將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)陽(yáng)性的結(jié)果。有前帶現(xiàn)象的病人在臨床治療中應(yīng)注意“賈赫氏反應(yīng)”。,血清固定（耐血清性）,指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

19、在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)，而保持低滴度陽(yáng)性（1：4以內(nèi)）的反應(yīng)。早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。晚期血清固定與梅毒的類型及開始治療的時(shí)間早晚有關(guān)。對(duì)于這種病人，在經(jīng)過(guò)詳細(xì)的檢查，特別是在除外神經(jīng)、心臟與其他內(nèi)臟梅毒后，應(yīng)停止治療，作定期隨訪。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的假陽(yáng)性反應(yīng),梅毒血清學(xué)試驗(yàn)假陽(yáng)性反應(yīng)的對(duì)策,技術(shù)性假陽(yáng)性反應(yīng) 由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)菌污染或溶血）

20、、試劑質(zhì)量差或過(guò)期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成，可通過(guò)重復(fù)試驗(yàn)來(lái)排除。生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng) 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽(yáng)性。非梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗(yàn)可做FTA-ABS、TPHA（TPPA）等確證試驗(yàn)進(jìn)行排除。梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗(yàn)時(shí)應(yīng)對(duì)病人進(jìn)行全面檢查、密切隨訪。,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) (確證是否為現(xiàn)癥病人)

21、 ↓↑互為確證 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) (確證是否為感染者),胎傳梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷方法,早期先天梅毒 暗視野檢查：胎盤、臍帶、鼻分泌物、皮膚黏膜。 血清學(xué)檢查晚期先天梅毒 血清學(xué)檢查,胎傳梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷,暗視野檢查梅毒螺旋體陽(yáng)性。患兒非梅毒螺旋體血清抗體滴度持續(xù)上升。患兒非梅毒螺旋體血清學(xué)定量試驗(yàn)結(jié)果比母親高4倍。患兒檢出19S-IgM抗體。,神經(jīng)梅毒

22、的實(shí)驗(yàn)室診斷,梅毒血清學(xué)檢查陽(yáng)性。腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果異常。腦脊液VDRL試驗(yàn)陽(yáng)性。腦脊液檢測(cè)到IgM抗體。,丙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),抗-HCV檢測(cè)􀂙HCV 抗原檢測(cè)􀂙定量HCV RNA檢測(cè)􀂙HCV基因型和亞型檢測(cè),HCV-RNA檢測(cè),1.HCV RNA測(cè)定定性套式PCR.2.HCV RNA定量方法包括DNA探針技術(shù)、競(jìng)爭(zhēng)PCR法、熒光定量法等， 3.定量測(cè)定有

23、助于了解病毒復(fù)制程度、抗病毒治療的選擇及療效評(píng)估等。4.對(duì)HCV RNA尚可進(jìn)行基因分型，方法包括序列測(cè)定、PCR、酶切、探針雜交等。,4影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的因素分析,每一個(gè)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有可能得出假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性用以下三種參數(shù)來(lái)描述:? 敏感性? 特異性? （陰、陽(yáng)性）預(yù)示值? 應(yīng)考慮人群感染率,4.1檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的計(jì)算,A= 感染，檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果(真陽(yáng)性)B= 未感染，檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果(假

24、陽(yáng)性)C= 感染，檢測(cè)陰性結(jié)果(假陰性)D= 未感染，檢測(cè)陰性結(jié)果(真陰性)A+C = 真正感染HIV的總?cè)藬?shù)B+D = 真正未感染HIV的總?cè)藬?shù),4.2敏感性與陽(yáng)性預(yù)示值,實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驕?zhǔn)確發(fā)現(xiàn)真實(shí)病例的能力。高敏感性的實(shí)驗(yàn)很少給出假陰性的結(jié)果。高敏感性的實(shí)驗(yàn)通常用于絕對(duì)需要極少的假陰性結(jié)果的情況，例如獻(xiàn)血檢測(cè)。 敏感性Sen = A/（A+C）×100% 陽(yáng)性預(yù)示值PPV = A/(A+B) ×

25、;100%,4.3特異性與陰性預(yù)示值,實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驕?zhǔn)確定義“真實(shí)的非病例”的能力。高特異性實(shí)驗(yàn)很少給出假陽(yáng)性的結(jié)果，高特異性的實(shí)驗(yàn)通常用于絕對(duì)需要極少的假陽(yáng)性結(jié)果的情況，例如臨床診斷個(gè)體HIV感染。 特異性Spe = D/(B+D) ×100% 陰性預(yù)示值NPV = D/(C+D) ×100%,4.4影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果舉例說(shuō)明,HBV,HCV,HIV,梅毒,4.5實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中應(yīng)注意的問(wèn)題,1.針對(duì)感染不同時(shí)