dgh呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型2016

1、中南大學(xué)湘雅基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系鄧恭華,第六章呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型,一、慢性支氣管炎概述,慢性支氣管炎(chronic bronchitis)：指由感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周?chē)M織的慢性非特異性炎性反應(yīng)。,第一節(jié) 慢性支氣管炎動(dòng)物模型,1. 慢性支氣管炎的定義：,2. 慢性支氣管炎的特點(diǎn)：,2) 咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次持續(xù)3個(gè)月以上，連續(xù)2年以上的慢性病理過(guò)程。,3) 嚴(yán)重時(shí)可并發(fā)肺氣腫或肺心病。,4)

2、 初期癥狀較輕，常在冬季發(fā)病，春季轉(zhuǎn)暖后癥狀緩解。 晚期病性加重，季節(jié)性表現(xiàn)不明顯，可常年存在。,1) 發(fā)病以老年人居多。,3. 慢性支氣管炎的病因： 1)吸煙：長(zhǎng)期煙民 2)感染：各種病原菌 3)理化因素：刺激性煙霧、毒氣、粉塵、二氧化硫氣體等。 4)氣候因素：寒冷 5)過(guò)敏反應(yīng) 6)呼吸道局部防御及免疫功能降低 7)自主神經(jīng)功能失

3、調(diào),二、慢性支氣管炎造模方法,1. 吸入毒氣方法,（一） 吸入單一有毒氣體法,2. 吸入SO2法的特點(diǎn),1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少數(shù)死亡。2)支氣管病理改變：早期為急性炎癥，12天后出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，繼而支氣管周?chē)Y(jié)締組織增生，27天后顯示為重度慢性支氣管炎。3)支氣管腔內(nèi)粘液阻塞，氣管上皮壞死，杯狀細(xì)胞和氣管平滑肌增生，肺泡腔擴(kuò)大，部分肺泡融合成肺大泡。,此法還可觀(guān)察到：氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改

4、變。,3. 吸入SO2法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)此法穩(wěn)定可靠，成功率高，為最常用的慢性支氣管炎模型； 2)需要觀(guān)察氣道和肺組織毒蕈堿型受體(M受體)及功能改變的，吸入SO2法最好。,缺點(diǎn)： 1)此法需要每天檢測(cè)SO2濃度，所需設(shè)備和操作復(fù)雜，耗時(shí)費(fèi)力。 2) SO2為有害氣體，吸入后動(dòng)物發(fā)生嚴(yán)重氣道內(nèi)病變，常導(dǎo)致動(dòng)物死亡。,應(yīng)用：最常用的慢性支氣管炎動(dòng)物模型,1. 吸入煙霧方

5、法,,,（二） 吸入煙霧法,2. 吸入煙霧法的特點(diǎn),1)隨著吸入煙霧時(shí)間延長(zhǎng)，氣管炎病變逐漸加重，至第7周形成慢性支氣管炎典型改變。2)氣管炎癥細(xì)胞特點(diǎn)：初期以巨噬細(xì)胞為主，隨后以淋巴細(xì)胞為主，中性粒細(xì)胞僅在接觸煙霧的早期短時(shí)間內(nèi)升高。,3. 吸入煙霧法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)此法簡(jiǎn)單易行，合并出現(xiàn)其它疾病情況少。 2)此法起病較緩，可以反映慢性支氣管炎早期炎癥形成的系列過(guò)程。,缺點(diǎn)：

6、煙霧吸入(煙熏)法需要較長(zhǎng)時(shí)間，考驗(yàn)?zāi)托摹?應(yīng)用： 特別適用于研究慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中需要探討不同階段的病理變化及相應(yīng)的炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、炎性標(biāo)志物的變化。,1. 病菌滴鼻的方法,,,（三） 病菌滴鼻法,2. 病菌滴鼻法的特點(diǎn),1)更接近于臨床實(shí)際情況2)感染2天后小鼠出現(xiàn)毛松、咳嗽、食欲缺乏等3)感染3-6天后出現(xiàn)氣管上皮輕度壞死，杯狀細(xì)胞數(shù)目初期下降， 約10天后逐漸升高4)感染35天后出現(xiàn)典型的慢性支氣管炎

7、癥狀5)感染50天后逐漸恢復(fù)正常,3. 病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1) 由于采用病原菌摸擬臨床感染狀況，故更接近臨床實(shí)際情況 2)由于呼吸道感染病源菌眾多，故采用最合適的病菌滴鼻，對(duì)探討不同病源菌導(dǎo)致慢性支氣管炎的發(fā)病機(jī)制有很的應(yīng)用價(jià)值。,缺點(diǎn)： 1) 致病菌混合的制備有一定難度 2) 不同致病菌引起的慢性支氣管炎有較大差異 2) 可能導(dǎo)致研究人員的感染,

8、應(yīng)用：主要適用于探討慢性支氣管炎病因（不同致病菌）、誘因，以及要求模擬臨床實(shí)際情況的實(shí)驗(yàn)研究,1. 氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法,1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉；2）仰臥位固定，拉出舌體，暴露聲門(mén)，快速將套管穿過(guò)聲門(mén)，插入氣管；3）將內(nèi)毒素（濃度200μg/ 200μl）注入氣管；4）大鼠飼養(yǎng)3－4周后，逐漸出現(xiàn)慢性支氣管炎表現(xiàn)。,此法由于要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大。,（四） 氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法,2. 氣管

9、內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點(diǎn),1)用毒素代替致病菌，克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題2)氣管滴注脂多糖(LPS)約21天后，小鼠出現(xiàn)倦怠、毛發(fā)失澤、進(jìn)食和飲水均減少3)支氣管病理改變：氣管、支氣管上皮脫落，杯狀細(xì)胞及粘液腺細(xì)胞增生，慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，平滑肌細(xì)胞增生肥大，管壁增厚4)支氣管腔內(nèi)充滿(mǎn)粘液及大量中性粒細(xì)胞,3.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1) 克服了致病菌混合液難制備的問(wèn)題 2) 避免了

10、導(dǎo)致研究人員感染病菌的風(fēng)險(xiǎn) 3) 不需要象SO2吸入法那樣，天天測(cè)SO2濃度,缺點(diǎn)： 1) 當(dāng)?shù)巫PS過(guò)量時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，引起急性肺損傷。這與復(fù)制慢性支氣管炎疾病模型思路相沖突 2)不象致病菌滴鼻法那樣貼近臨床，已經(jīng)與臨床實(shí)際情況有較大差異 3) 需要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對(duì)大鼠損傷也大,應(yīng)用：適用于嫌病致菌制備難，天天測(cè)SO2麻煩，專(zhuān)注于慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展

11、機(jī)制研究,例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型,,結(jié) 論,一、支氣管哮喘概述,支氣管哮喘(bronchial asthma)：指由于某些過(guò)敏因素引起的以支氣管阻塞為特點(diǎn)的疾病。,1. 支氣管哮喘的定義：,2. 哮喘的特征：陣發(fā)性帶有哮鳴音的呼吸困難、咳嗽、咳痰，且反復(fù)發(fā)作。一般春、秋二季發(fā)病率較高，20%患者有家族史。,第二節(jié) 支氣管哮喘動(dòng)物模型,3. 支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素：,1) 吸入性過(guò)敏原：花粉、真菌；塵螨、動(dòng)物毛發(fā)及排泄物等

12、 2) 食入性過(guò)敏原：魚(yú)蝦等水產(chǎn)、海產(chǎn)品；牛奶、雞蛋、花生等 3) 呼吸道感染 4) 藥物 5) 工業(yè)粉塵、化學(xué)氣體或蒸氣 6) 冷空氣、過(guò)度通氣、運(yùn)動(dòng) 7) 強(qiáng)烈情緒變化,4.支氣管哮喘發(fā)作的時(shí)相：,患者在接觸過(guò)敏原后幾分鐘內(nèi)，出現(xiàn)哮喘發(fā)作的癥狀，最大呼氣流速顯著降低，一般持續(xù)2～3小時(shí)后即可恢復(fù)，稱(chēng)為哮喘的速發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。

13、 有一部分病人在速發(fā)相之后緊接著出現(xiàn)第二次哮喘發(fā)作，癥狀更重，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，可達(dá)10小時(shí)甚至幾天，重癥者持續(xù)幾十天，稱(chēng)為遲發(fā)相反應(yīng)。其機(jī)制與氣道過(guò)敏性炎癥有關(guān)。,過(guò)敏性哮喘的臨床過(guò)程可分為速發(fā)相反應(yīng)和遲發(fā)相反應(yīng)兩個(gè)階段。,病人可發(fā)生雙相反應(yīng)，也可只發(fā)生速發(fā)相或遲發(fā)相反應(yīng)。兒童哮喘的遲發(fā)相反應(yīng)要比成人多。,二、支氣管哮喘造模方法,（一） 致敏源誘發(fā)的哮喘模型,1. 方法,,,2.致敏源誘發(fā)的哮喘特點(diǎn),小鼠： 1)常用小

14、鼠品系有：BALB/c品系較易產(chǎn)生氣道高反應(yīng)，并產(chǎn)生高滴度IgE；而C57BL/6品系不易出現(xiàn)氣道高反應(yīng)，且只產(chǎn)生低滴度IgE。,大鼠： 1)常用大鼠品系有：Brown Norway(國(guó)外)；Sprague Dawley，Wistar(國(guó)內(nèi))。 2) 哮喘激發(fā)后3-5分鐘發(fā)生速發(fā)相反應(yīng)，2-4小時(shí)發(fā)生遲發(fā)相反應(yīng)，隨后出現(xiàn)肺部炎癥細(xì)胞(24小時(shí)內(nèi)主要是嗜酸性細(xì)胞)浸潤(rùn)。 3)哮喘發(fā)作24小時(shí)內(nèi)氣道

15、反應(yīng)性升高，增幅為7-10倍，持續(xù)4-5天。多次激發(fā)能延長(zhǎng)氣道高反應(yīng)性持續(xù)時(shí)間。 4)能出現(xiàn)與人類(lèi)哮喘類(lèi)似的遲發(fā)相反應(yīng)，并有嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道反應(yīng)性增加。,豚鼠： 1)很容易致敏，并激發(fā)產(chǎn)生Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。 2)激發(fā)后的急性氣道過(guò)敏反應(yīng)，包括速發(fā)相和遲發(fā)相哮喘反應(yīng)。,3.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)卵清蛋白來(lái)源容易，且價(jià)格低廉。 2)卵清蛋白免疫原

16、性強(qiáng)，容易致敏和激發(fā)哮喘。 3)是國(guó)內(nèi)外最常用的哮喘疾病模型。,以下分別列舉： 小鼠、大鼠和豚鼠支氣管哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 小鼠便宜，價(jià)格低，有利于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)。,小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,缺點(diǎn)： 1)幾乎所有暴露于變應(yīng)原(過(guò)敏原)的小鼠都可產(chǎn)生哮喘，故小鼠哮喘模型不宜應(yīng)用于基因多態(tài)性研究。 2)小鼠與人類(lèi)存在呼吸系統(tǒng)的解剖、生理學(xué)上的差異。呼吸頻率快，

17、但潮氣量低。 3)小鼠與人類(lèi)還存在免疫學(xué)機(jī)制上的差異。大多數(shù)小鼠哮喘模型會(huì)出現(xiàn)過(guò)敏性肺泡炎和超敏性肺炎，而掩蓋了氣道病變。,應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的情況，如:評(píng)價(jià)預(yù)防效果或哮喘療效。,大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)大鼠品系純且全，易于繁殖，獲得容易。 2)價(jià)格較便宜，能減輕研究經(jīng)費(fèi)壓力。 3)與小鼠相比，可獲取的標(biāo)本量大很多。 4)大鼠生物學(xué)特性與人有較

18、多的相似性。,缺點(diǎn)： 1)國(guó)際上哮喘研究論文主要采用Brown Norway品系大鼠，但其價(jià)格較貴。BN大鼠哮喘模型的主要優(yōu)勢(shì)在于能產(chǎn)生針對(duì)吸入性變應(yīng)原的特異性IgE抗體，且更易誘發(fā)哮喘癥狀、明顯的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。,應(yīng)用： 1)是最常用的哮喘動(dòng)物模型之一。 2)適用于皮質(zhì)激素治療哮喘作用機(jī)理研究，以用非皮質(zhì)激素類(lèi)抗哮喘免疫抑制劑的療效觀(guān)察和評(píng)價(jià)。,豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)：

19、 1)豚鼠價(jià)格較便宜；體型較大，方便實(shí)驗(yàn)操作；獲取標(biāo)本量大。 2)變應(yīng)原誘發(fā)的支氣管哮喘與人類(lèi)支氣管哮喘中的氣管收縮特點(diǎn)相同。包括：接觸抗原后的支氣管收縮反應(yīng)；氣道對(duì)介質(zhì)的高反應(yīng)性；以及嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的特征。,缺點(diǎn)： 1)由于近交系豚鼠罕見(jiàn)，不利于用來(lái)研究遺傳因素的影響。 2)皮質(zhì)激素對(duì)豚鼠哮喘模型的支氣管痙攣影響不顯著。 3)可能出現(xiàn)種群依賴(lài)性的夸大反應(yīng)，如：過(guò)敏性休克，

20、導(dǎo)致豚鼠死亡。,應(yīng)用： 1)是使用最廣泛的變應(yīng)原性支氣管哮喘模型。 2)致敏性豚鼠的過(guò)敏性支氣管收縮(包括速發(fā)相和遲發(fā)相)在研究抗過(guò)敏藥、支氣管擴(kuò)張藥藥物療效方面就用非常廣泛。,（二） 甲苯二異氰酸甲酯(TDI)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型,1. TDI誘發(fā)哮喘方法,,2. TDI誘發(fā)哮喘特點(diǎn),1)經(jīng)TDI/BSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸頻率加快、幅度增大，哮喘時(shí)伴有咳嗽、躁動(dòng)不安，甚至出現(xiàn)痙攣性呼吸。2)85%動(dòng)物可同時(shí)

21、出現(xiàn)不同滴度的抗原特異性IgE、IgG抗體。3)TDI是重要的職業(yè)性致哮喘化學(xué)品之一。,3. TDI誘發(fā)哮喘優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 是TDI致職業(yè)性哮喘的重要?jiǎng)游锬Ｐ汀氖耇DI作業(yè)者中約有5%-10%的人可發(fā)生職業(yè)性哮喘。缺點(diǎn)： 1)TDI/BSA抗原制備難度大，步驟繁鎖。 2)屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于TDI職業(yè)性哮喘方面研究。,（三） 鄰苯二甲酸酐(PA)誘發(fā)的哮喘模型

22、,1. PA誘發(fā)哮喘模型方法,,2. PA誘發(fā)哮喘模型的特點(diǎn),1) 苯酐(PA)為固體化學(xué)品，也可引起哮喘。為什么？2)霧化吸入激發(fā)后1-10分鐘，動(dòng)物呼吸頻率加快(由100-120次/分，上升至140-160次/分)，幅度增大，伴咳嗽、噴嚏，重癥者呼吸費(fèi)力，掙扎，可有暫窒息或死亡。,苯酐,3. PA誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： PA是重要白色固體化工原料，也是一種常見(jiàn)的職業(yè)性致哮喘物質(zhì)。,缺點(diǎn)：

23、 與TDI至哮喘一樣，屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。,應(yīng)用：適用于PA所致職業(yè)性哮喘方面研究,例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型,結(jié) 論,一、肺心病概述,1. 肺心病的定義：,肺心病是指由慢性支氣管炎、肺氣腫和肺纖維化，以及肺血管病變而引起的心臟病。,2. 肺心病的病理特點(diǎn)：,1)肺動(dòng)脈高壓；2)右心室肥大和右心衰竭。,第三節(jié) 肺心病動(dòng)物模型,二、肺心病造模方法,（一） 肺循環(huán)高壓模型,肺循環(huán)高壓：指包括肺動(dòng)脈高壓、肺靜脈高壓和混

24、合性肺動(dòng)脈高壓的總稱(chēng)。,肺動(dòng)脈高壓：指肺動(dòng)脈壓增高，而肺靜脈壓正常。也稱(chēng)為動(dòng)脈型肺動(dòng)脈高壓。,特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓：指沒(méi)有任何原因(包括遺傳、病毒、藥物)而發(fā)生的肺動(dòng)脈高壓。,肺循環(huán)高壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：在海平面靜息狀態(tài)下經(jīng)右心導(dǎo)管檢查 1)肺動(dòng)脈收縮壓>30mmHg 2)肺動(dòng)脈平均壓>25mmHg 3)運(yùn)動(dòng)時(shí)，肺動(dòng)脈平均壓>30mmHg 以上三項(xiàng)

25、，居其一即可,(1) 方法,1、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型,,動(dòng)物艙室(250-300升) ： 1)頂部有三通，便于氣體樣本，檢測(cè)O2和N2濃度。使O2濃度保持在10%左右，CO2濃度保持在3%以下。 2)底部有一小裂隙，便于艙內(nèi)、外氣體交換，氣壓相等。 3)艙內(nèi)CO2用鈉石灰吸收，水蒸氣用無(wú)水氯化鈣吸收。 4)艙內(nèi)有小風(fēng)扇將通入氣體混均。,(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點(diǎn),1)動(dòng)物

26、艙室設(shè)計(jì)和制作有點(diǎn)難度。2)需要O2分析儀和CO2分析儀，且檢測(cè)麻煩。3)艙內(nèi)溫度難保持恒定，也難以消除CO2和水蒸氣的影響。,(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 艙室設(shè)計(jì)，操作簡(jiǎn)單，能保持艙內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間低氧狀態(tài)。如能通過(guò)自動(dòng)化設(shè)計(jì)，時(shí)實(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)O2和CO2濃度，控制好艙內(nèi)溫度、濕度和氣壓，將是一個(gè)好的造模方法。,缺點(diǎn)： 1)每天檢測(cè)O2和CO2濃度很煩。 2)通過(guò)調(diào)節(jié)艙室通氣

27、量保持O2濃度和氣壓有難度。,應(yīng)用：適用于因長(zhǎng)期缺氧導(dǎo)致肺循環(huán)高壓，繼發(fā)右心肥大，右心衰的肺心病模型。,(1) 方法,2、缺氧型肺循環(huán)高壓動(dòng)物模型,(2) 特點(diǎn),1)肺動(dòng)脈壓升高顯著，可達(dá)正常值3倍。2)伴右心室肥厚和體重減輕。3)光鏡下可見(jiàn)肺血管重塑明顯，表現(xiàn)為：血管內(nèi)膜增生，中層增厚。4)野百合堿可重復(fù)誘導(dǎo)產(chǎn)生嚴(yán)重的進(jìn)展性肺動(dòng)脈高壓。,(2) 優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)方法簡(jiǎn)便易行 2)本模型為

28、常壓缺氧肺循環(huán)高壓模型，更類(lèi)似于平原地區(qū)的肺心病發(fā)病情況。,缺點(diǎn)： 與缺氧、酸中毒、內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺血管損傷相比，野百合堿屬于化學(xué)品或藥物導(dǎo)致的肺血管損傷。,應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循環(huán)高壓的肺心病方面研究,（二） 慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型,1.方法,動(dòng)物煙熏箱(20×25×30 cm3) ： 1)煙熏箱的一側(cè)下部留有一個(gè)直徑為0.5cm的通氣管，與箱外側(cè)的不銹鋼燃煙室相通。

29、 2)燃煙室進(jìn)氣孔連接一個(gè)小電風(fēng)扇。電扇風(fēng)力助燃并推動(dòng)煙霧和O2進(jìn)入煙熏箱。,香煙：采用市售無(wú)過(guò)濾嘴的香煙(每支約含焦油25mg，煙氣煙堿量1.4mg),(2) COPD模型特點(diǎn),1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備大鼠COPD模型。是一個(gè)較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，更符合人類(lèi)COPD的臨床實(shí)際情況。2)多種炎癥細(xì)胞參與。氣道內(nèi)主要是PMN和Mφ為主，肺細(xì)胞內(nèi)以Mφ (CD68+)和T-淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主。3) 多種炎癥因子參與。如：IF

30、Nγ、MCP-1、ET-1、IL-2，4，6，10等。4)氣道高分泌，炎癥細(xì)胞增多，管壁增厚，膠原等細(xì)胞外基質(zhì)增多并過(guò)度沉積、纖維化(COPD氣道重塑的重要病理改變)。,(2) COPD模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用,優(yōu)點(diǎn)： 1)方法簡(jiǎn)便易行，不需要貴重儀器設(shè)備和藥品。 2)屬較長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，因此更符合人類(lèi)COPD的臨床實(shí)際情況。,缺點(diǎn)： 1)長(zhǎng)期的慢性實(shí)驗(yàn)，考驗(yàn)的是人的耐心、恒心和毅力。

31、 2)能否導(dǎo)致繼發(fā)性肺心病，還需要更長(zhǎng)的煙熏時(shí)間和耐心等待。,應(yīng)用：適用于COPD病理、病生及藥物療效方面的研究,例三、低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立,,,,,,,,結(jié) 論,本研究結(jié)果提示肺動(dòng)脈高壓的大鼠模型成功建立。,本研究模型的建立較好地模擬了 患者肺動(dòng)脈高壓發(fā)生的病理過(guò)程，可以應(yīng)用于 患者的臨床研究。,陳麗英等 低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志 2015，vol. 8 (5): 312-314,一、肺栓塞概

32、述,肺栓塞的定義：,肺栓塞：指以各種栓子阻塞肺動(dòng)脈系統(tǒng)為其發(fā)病原因的一組疾病或臨床綜合征的總稱(chēng)。包括：血栓、脂肪、羊水、胎糞、空氣等栓子。,肺血栓栓塞：是指來(lái)自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓栓子阻塞肺動(dòng)脈或其分支所致肺部疾病。主要表現(xiàn)為：肺循環(huán)障礙和呼吸功能障礙。,急性肺血栓栓塞導(dǎo)致較為廣泛肺動(dòng)脈阻塞時(shí)，可引起肺動(dòng)脈高壓，甚至發(fā)生急性肺源性心臟病。而缺血區(qū)可能發(fā)生肺梗死。由于肺組織多重供血、供氧機(jī)制，只有大約15%患者發(fā)生肺梗死。,第四節(jié) 肺栓

33、塞動(dòng)物模型,二、肺栓塞造模方法,（一） 血栓栓塞法,1. 方法,2.血栓栓塞法模型的特點(diǎn)：,家兔血栓栓塞法： 1)家兔體型適中，價(jià)格不高，性格溫順，插管較方便。 2)與其它動(dòng)物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類(lèi)的更接近。故，本模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。,犬血栓栓塞法： 1)犬體型大，血管粗，插管手術(shù)操作非常方便。 2)犬血量大，多次抽血樣也不易發(fā)生低血容量的情況 。,3.血栓栓塞法模型

34、的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：,優(yōu)點(diǎn)： 兔血栓栓塞法模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。因?yàn)榕c其它動(dòng)物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類(lèi)的更接近。,缺點(diǎn)： 1)本法的血栓主要是在體外形成，與臨床上肺血栓栓塞時(shí)，體內(nèi)處于高凝狀態(tài)不一樣。 2)用犬做實(shí)驗(yàn)，有被咬傷或感染狂犬病的可能。,應(yīng)用： 1)兔模型適用性廣，是最常用的肺血栓栓塞模型。 2)犬模型更適用于取樣量多、需要?jiǎng)討B(tài)觀(guān)察的肺栓塞

35、實(shí)驗(yàn)研究。,（一） 藥物注射法,1. 方法,,2.藥物注射法模型的特點(diǎn)：,1)藥物注射法致肺血栓栓塞，簡(jiǎn)單快捷，方法可靠，穩(wěn)定性好。2)利用藥物在體內(nèi)形成靜脈血栓，然后導(dǎo)致肺栓塞，比栓子栓塞法更符合臨床實(shí)際情況。,3.藥物注射法模型的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和應(yīng)用：,優(yōu)點(diǎn)： 此方法簡(jiǎn)單快捷，可靠性和穩(wěn)定性好。,缺點(diǎn)： 血小板血栓栓子較小，難以摸擬人肺內(nèi)大血管栓塞情況。,應(yīng)用： 1)小鼠肺栓塞模型，適合需要大

36、規(guī)模樣體的實(shí)驗(yàn)研究。 2)兔和犬肺栓塞模型，適合需要多次采樣、動(dòng)態(tài)觀(guān)察指標(biāo)變化的實(shí)驗(yàn)研究。,目的　 通過(guò)建立操作簡(jiǎn)便、成功率高、使用經(jīng)濟(jì)的急性肺血栓栓塞大鼠動(dòng)物模型,掌握自體肺血栓栓塞動(dòng)物模型的制備,檢測(cè)自體肺血栓栓塞的持久性。,例四、大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備,二、方法,,,本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：大鼠自血栓注入后并沒(méi)有表現(xiàn)持續(xù)的肺動(dòng)脈壓升高或氧分壓降低,因?yàn)榇笫缶哂袠O高的纖溶能力,所以自體血栓不能產(chǎn)生一個(gè)持久固定的肺栓塞

37、模型。,結(jié) 論,因此與臨床肺血栓栓塞的病理生理過(guò)程更符的、持久固定血栓模型的研究應(yīng)成為今后肺栓塞動(dòng)物模型的主要研究方向。,,馮偉等 大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備臨床肺科雜志 2015年5月 第20卷第5期：785-788,the end,謝謝！,混合煙霧制煙方法：,1. 配方：鋸末200g，煙葉15-20g，辣椒6-7g，硫黃1g。,2. 點(diǎn)燃后，在20-30分鐘燃化，混合煙霧含塵量 150-200mg/m3，顆粒大小0

38、.5-1.0μm以上。,,香煙煙霧制煙方法：,,1. 用香煙1.5支，在21L容器中燃化，豚鼠吸氣10分鐘。2. 換氣5分鐘。3. 用香煙1支，再次燃化，豚鼠再吸氣10分鐘。,流感病菌菌液制作方法：,1. 接種流感病毒后， 37 ℃培育48小時(shí)的雞胚液，病毒液血凝滴度為1：320。接種流感桿菌后， 37 ℃ 培養(yǎng)18-24小時(shí)，收集菌液備用。在滴鼻使用前，將菌液中流感桿菌的濃度稀釋為7×108個(gè)/ml 。,,混合細(xì)菌菌

39、液制作方法：,1. 流感桿菌，9 ×108個(gè)/ml 。甲型鏈球菌，6×108個(gè)/ml 。卡他性炎性菌， 9×108個(gè)/ml 。肺炎雙球菌， 6×108個(gè)/ml 。將上述4種菌液以4：3：2：1的比例混合，備用。,,1. 溶液Ⅰ：卵清蛋白1000 μg/ml2. 溶液Ⅱ：氫氧化鋁10 mg/ml3. 將溶液Ⅰ與溶液Ⅱ以1：1的比例混合。注意混合液要新鮮配制,1號(hào)卵清蛋白抗原液配制方法：

40、,,2號(hào)卵清蛋白抗原液配制方法：,1. 溶液Ⅰ：卵清蛋白300 mg/ml2. 溶液Ⅱ：滅活百日咳桿菌疫苗15×109個(gè)/ml3. 溶液Ⅲ：氫氧化鋁300 mg/ml4. 將溶液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，以1：1：1的比例混合。注意混合液要新鮮配制,TDI-BSA抗原制備：,1. 溶液A：1%TDI/1,4-二氧六環(huán)液2. 溶液B：1%BSA/碳酸氫鈉溶液3. 將溶液B置于冰水浴中，開(kāi)磁力攪拌，逐滴加入溶液A，調(diào)節(jié)該溶液的pH值至

41、8.5。4. 1小時(shí)后移至透析袋中過(guò)夜，使1,4-二氧六環(huán)揮發(fā)。5. 在pH為7.4的PBS中徹底透析6次，使溶液在紫外分光光度計(jì)245nm處有高吸收峰。,6. 將制備成的上述抗原，加卡介苗、費(fèi)氏完全佐劑混合，用乳缽研磨成油包水乳劑備用。,,PA-BSA抗原制備：,1. 溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2. 溶液B：2%BSA/碳酸氫鈉溶液(9%)。3. 將溶液B置于冰水浴(4℃)中，開(kāi)磁力攪拌器，攪拌1

42、小時(shí)。4. 將制備好的PA-BSA抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。,PA-HSA抗原制備：,1. 溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2. 溶液B：2%HSA/碳酸氫鈉溶液(9%)。3. 將溶液B置于冰水浴(4℃)中，開(kāi)磁力攪拌器，攪拌1小時(shí)。4. 將制備好的PA-HSA抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。,,膠原和腎上腺素混合液制備：,1. 膠原溶液：

43、200 μg/ml2. 腎上腺素溶液：100 μg/ml3. 將以上兩種溶液以1：1比例混合、搖勻。,,以下是附錄1-5,常用藥物的最大給藥量,人及不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物量對(duì)應(yīng)值,例如：某藥物在60kg體重的病人的劑量為21.0?g.kg-1 . d-1，一只5kg的猴為53.6 ?g.kg-1 . d-1，一只10kg重的犬為40.4 ?g.kg-1 . d-1 ，一只20g的小鼠則為260.6 ?g.kg-1 . d-1