無名高熱的理論及其解決思路

1、無名高熱的理論及其解決思路,近年來豬越來越難養(yǎng)、病越來越多！,根本原因何在？,豬群的健康狀態(tài)下降,兩大免疫抑制性疾病,豬繁殖與呼吸綜合征(藍(lán)耳病PRRS),豬圓環(huán)病毒2型感染(PCV-2),,,,豬藍(lán)耳病(PRRS),1.PRRS的危害,2.目前的流行特點(diǎn),3.關(guān)于病毒的血清型,4.如何診斷？,5.疫苗使用存在的問題？,6.PRRSV 致病機(jī)制,7.利用豬只免疫及攻毒試驗(yàn)測(cè)試 PRRS免疫營養(yǎng)劑的功效性,藍(lán)耳病(PRRSV

2、disease),,呼吸與繁殖綜合癥Porcine respiratory disease complex (PRDC),母豬流產(chǎn)及死亡癥狀Sow Abortion and Mortality Syndrome (SAMs),仔豬多系統(tǒng)綜合衰竭消耗癥Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS),藍(lán)耳病毒的感染,哺乳期,懷孕期,保育期,育肥期,癥狀：發(fā)燒、嗜睡、厭食、無乳、發(fā)情

3、不順,鏈球菌、TGE圓環(huán)病毒,圓環(huán)病毒、豬瘟沙氏桿菌、巴氏桿菌副嗜血桿菌,圓環(huán)病毒、附紅細(xì)胞體放線桿菌AP,除此而外，公豬也會(huì)感染PRRSV,已感染PRRS的精蟲,未感染PRRS的精蟲,PRRSV與豬瘟免疫,感染PRRSV后對(duì)豬瘟抗體有很大的免疫抑制性,,泰國病理學(xué)家 Kesdangsakonwuti 等人(2005),也就是說,即使您打了豬瘟疫苗,因?yàn)镻RRSV的侵襲,使豬瘟疫苗失去了保護(hù)力,用豬瘟病毒攻毒時(shí),照樣引起感染豬

4、瘟而死亡!,結(jié)論：,PRRSV潛在的危害很大豬群的生產(chǎn)性能下降豬群免疫力下降呼吸道疾病發(fā)病率上升繼發(fā)感染增多母豬發(fā)情障礙、滯后產(chǎn)現(xiàn)象增多,PRRS病毒的血清型,國際上分美洲型和歐洲型我國分離的毒株都屬美洲型我國豬群中還未發(fā)現(xiàn)歐洲型毒株,如何診斷?,明確豬場(chǎng)各階段豬群的藍(lán)耳病病毒感染率（用ELISA試劑盒進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)）監(jiān)測(cè)感染動(dòng)態(tài)情況（每季度1次），是否升高或降低出現(xiàn)繁殖障礙問題，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)（胎兒體內(nèi)、母豬血清中）病毒和

5、抗體，單純的抗體陽性并不能說明就是由藍(lán)耳病造成的繁殖障礙,當(dāng)一個(gè)豬場(chǎng)符合以下3點(diǎn)時(shí)應(yīng)診斷患PRRS,1.豬群表現(xiàn)典型的PRRS癥狀及有PRRS患病史,2.豬群出現(xiàn)PRRS病變,3.患病豬中找到PRRS病毒,如果仔豬出現(xiàn)典型的臨床癥狀、病變、血液中有PRRS抗體時(shí)，又知該豬群沒有注射PRRS疫苗的則可診斷患有PRRS。,疫苗使用存在的問題：,1.使用活疫苗造成藍(lán)耳病暴發(fā)已是不爭(zhēng)的事 實(shí)（國內(nèi)外均有實(shí)例）,2.活疫苗的返強(qiáng)、變異、重組

6、可產(chǎn)生新病毒,3.免疫接種豬造成疫苗毒的持續(xù)性感染和長(zhǎng) 期帶毒；引起免疫豬場(chǎng)和豬群處于長(zhǎng)期感 染狀態(tài),PRRSV 致病機(jī)制,豬的肺泡巨噬細(xì)胞上的Heparinlike接受器與PRRS病毒母體蛋白的接合情況(Involvement of the Matrix Protein in Attachment of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus to a Hep

7、arinlike Receptor on Porcine Alveolar Macrophages),pSn = receptor for PRRSV,PRRSV,,Sialo-adhesin protein(涎黏著蛋白),Heparinlike Receptor,,,Nucleus核,,,,,,,ORF5 ORF6,,,,,MhcII,MhcI,MhcI,MhcII,,,,,,,,,,,,,,,,CD8+cell,CD

8、4+cell,,,,,NT domain結(jié)合部位,Host cells, Antigen present cells,利用豬只免疫及攻毒試驗(yàn)測(cè)試 PRRS免疫營養(yǎng)劑的功效性,(1)豬只免疫及攻毒試驗(yàn),組別,,1st immunized 2nd 3rd challenge,,,,,,高劑量低劑量空白組,21~28 days,Half-dose,Half-do

9、se,Full-dose,Immunization and challenge in pigs model,Group coating antigen IgM-ELISA titres (S/BK) IFA titres

10、 NT titres H dose group 3~10 10~30 16~32 16~32 L dose group 3 10

11、 16 8~32 BK groupNegative CTL 1 1 < 8 < 8,,,,(2)各試驗(yàn)組免疫三次后2周(9周齡)之血清免疫力價(jià)分析,(3)攻毒后(14-DPC)臨床癥狀及健康情形：,攻毒后之DPI-14之臨

12、床癥狀(P8),疫苗組，于攻毒后一至二天內(nèi)都有一至二頭發(fā)生40.5℃以上發(fā)燒反應(yīng)，但是二周后大都回復(fù)原來之40.3℃以下，攻毒后(H)及(L)顯然大多較活潑健康、不再咳嗽、皮毛漸漸恢復(fù)亮麗，而(BK)對(duì)照組之豬只咳嗽現(xiàn)象比較頻繁。以下表為攻毒后1~14-DPC觀察之將康狀態(tài)及患病情形,健康狀況與臨床癥狀觀察指標(biāo)表,每只動(dòng)物每日需作10項(xiàng)觀察指標(biāo)，每個(gè)觀察項(xiàng)目正常為1點(diǎn)，每日總計(jì)正常為10點(diǎn)，最嚴(yán)重的臨床癥狀為30點(diǎn)，死亡40點(diǎn)。,攻毒后

13、之14-DPC依觀察項(xiàng)目計(jì)分之臨床癥狀,*：觀察10項(xiàng)之臨床癥狀，每一組6頭豬分別給分后取其平均值后分別填入表格，T為10項(xiàng)臨床癥狀之總分。,攻毒后之21-DPC依觀察項(xiàng)目計(jì)分之臨床癥狀,(4)試驗(yàn)豬只在免疫及攻毒后重量變化情形,,攻毒,,,,,*:The blood samples of tested pigs can be detected PRRSV infected by RT-PCR running,(5)豬只攻毒試驗(yàn)后病毒血

14、癥檢出情況,組別 疫苗名稱 頭數(shù) 2-DPC 7-DPC* 14-DPC 21-DPC,H 6 0 2 1 0,L 6 0 2 2 0,BK Placebo 6 1

15、 3 6 3,(6)各試驗(yàn)組攻毒后21DPC解剖后肺臟之病變嚴(yán)重性分析,豬只攻毒后，第21天起進(jìn)行試驗(yàn)豬只之屠體解剖，觀察肺部之肉眼病變結(jié)果可知，空白組之6頭豬都有明顯的間質(zhì)性肺炎，壞死病變癥狀之病變指數(shù)Lesion score約在15-40，高劑量組有一肺臟病變嚴(yán)重，可能有二次感染發(fā)生，其指數(shù)約在25左右，其他5頭的指數(shù)都在15以下。,,各組的6頭豬只其肺臟病變指數(shù),(7)各試驗(yàn)組攻毒后

16、21DPC解剖后分析肺臟組織切片病理分析間質(zhì)性肺炎之嚴(yán)重性,結(jié)論：,由豬只免疫及攻毒試驗(yàn)?zāi)Ｊ娇芍?高劑量及低劑量的PRRS免疫營養(yǎng)劑經(jīng)前二次半劑量及第三次全量免疫仔豬后，該免疫的豬只對(duì)于PRRSV（5 T-type1;TCID50 = 104)攻毒皆具有相當(dāng)強(qiáng)的保護(hù)力！,PRRSV 感染途徑與免疫營養(yǎng)增強(qiáng)劑的開發(fā)策略,多重感染路徑：Step1. 上呼吸道及下呼吸道上皮細(xì)胞感染路徑Step2. 呼吸道周邊組織的monocyte（單核

17、球）, macrophage（巨噬細(xì)胞）感染路徑Step3. Antibody dependent enhancement (ADE) of phagocytosis,可以誘發(fā)產(chǎn)生較高的中和力價(jià)。減低PRRS vaccine 抗原過敏性問題?？梢杂行дT發(fā)T細(xì)胞免疫機(jī)制。 （1）誘發(fā)中和力價(jià)之液體或粘膜免疫反應(yīng)機(jī)制 （2）誘發(fā)細(xì)胞免疫機(jī)制清除被感染的細(xì)胞,PRRSV 感染途徑與免疫營養(yǎng)

18、增強(qiáng)劑的開發(fā)策略,千呼萬喚始出來,免疫營養(yǎng)增強(qiáng)劑制作原理,Procedure of V.S.P:,Effective DNA,《免疫營養(yǎng)增強(qiáng)劑》的特點(diǎn):,1.明確、穩(wěn)定、純粹的抗原。,2.免疫反應(yīng)高度的特意性，只有針對(duì)有效抗原產(chǎn)生 抗體，對(duì)無關(guān)抗原沒有反應(yīng)。,3.免疫應(yīng)答可以精確檢測(cè)出來。,4.采用的電腦合成技術(shù)很簡(jiǎn)便。,5.有高度的精確性（高抗體并非一定是有效的抗 體，蛋白抗體才是有效的高抗體）。,6.采用生化技術(shù)(非疫苗

19、技術(shù))，不會(huì)產(chǎn)生沒必要的抗 原及抗體。,7.高度的重復(fù)性，每批產(chǎn)品成份一樣，穩(wěn)定性高。,《強(qiáng)疫肽》的使用方法（肌肉注射）：,后備母豬：進(jìn)場(chǎng)（留種）-〉2 ml（一劑）,經(jīng)產(chǎn)母豬：生產(chǎn)前6周 -〉2 ml（一劑） 生產(chǎn)前4周 -〉2 ml（一劑）,出生仔豬：1-2周齡 -〉2 ml（一劑） （對(duì)母源抗體沒有干擾）,種 公 豬：每年2-3次 -〉2 ml