微生物課件

1、BacT ALERT 3D 全自動血培養(yǎng)儀,,工作原理,Bact/ALERT 3D可同時進行血培養(yǎng)、無菌體液培養(yǎng)、快速結(jié)核桿菌培養(yǎng) 原理：通過檢測微生物代謝產(chǎn)生CO2產(chǎn)生后，含有樣本的培養(yǎng)瓶的底部感應器顏色產(chǎn)生變化，由灰變黃，系統(tǒng)隨之以圖像及聲音報警,簡易操作流程,259789 SA 標準成人需氧培養(yǎng)瓶 藍色瓶蓋 259790 SN 標準成人厭氧培養(yǎng)瓶 紫紅色瓶蓋 259791 FA 成人需氧中和抗生素培養(yǎng)瓶

2、綠色瓶蓋 259793 FN 成人厭氧中和抗生素培養(yǎng)瓶 橙色瓶蓋 259794 PF 小兒需氧培養(yǎng)瓶 黃色瓶蓋 259797 MP 非血液標本結(jié)核培養(yǎng)瓶（2-8°C保存） 紅色瓶蓋 251011 MB 血液標本結(jié)核培養(yǎng)瓶 黑色瓶蓋,裝載培養(yǎng)瓶,第一步：點擊裝瓶圖標,,第二步：掃描培養(yǎng)瓶條形碼，輸入資料第三步：含有可用單元的孵育箱抽屜的綠色指示燈會變亮，將培養(yǎng)瓶放入亮燈的孵育單元內(nèi)。輕輕關(guān)上抽屜，

3、按下確認按鈕,卸載培養(yǎng)瓶,第一步：點擊需要卸載的陽性/陰性/和匿名瓶圖標,含有要卸載培養(yǎng)瓶的抽屜指示燈變綠,,第二步：拉開指示燈亮的抽屜，可卸載培養(yǎng)瓶所在的單元指示燈會變亮。 卸下指示燈指示的培養(yǎng)瓶，指示燈緩慢閃爍表明培養(yǎng)瓶已經(jīng)卸下。輕輕關(guān)上抽屜，按下確認按鈕 。,血培養(yǎng)標本的接收處理,普通計費科室的血培養(yǎng)應一單一瓶發(fā)放。標本送達后，在化驗單上寫明接收日期時間，并將瓶身上的條碼貼在化驗單上。LIS系統(tǒng)病人，在血培養(yǎng)發(fā)放

4、登記表上登記取瓶科室、預用病人姓名、瓶子數(shù)量等信息，標本送達后，掃描LIS信息，并在標本流程單上寫明各項具體信息，將瓶身上的條碼貼于流程單上。,血培養(yǎng)陽性標本的處理,血培養(yǎng)陽性的標本出現(xiàn)時，陽性圖標會亮起，并發(fā)出報警音提示，按卸瓶步驟取出陽性培養(yǎng)瓶。抽取瓶中液體，涂片，革蘭染色后鏡檢，并向臨床科室初報。將標本接種于血平板上，放入溫箱中孵育，用于第二天進一步的鑒定。,可能遇到的問題,匿名瓶：加載時未掃描培養(yǎng)瓶，直接將培養(yǎng)瓶放入儀器中

5、無信息的標本：瓶身未寫病人信息，接收人又未將瓶身條碼貼于化驗單上，造成標本與化驗單對不上號。錯誤卸載：取出培養(yǎng)瓶時，拿錯培養(yǎng)瓶。提示陽性，涂片染色卻看不到細菌，怎么辦？,VITEK2全自動微生物分析系統(tǒng),,系統(tǒng)的功能與作用,1、快速做出細菌鑒定與藥敏報告，80%常見細菌5-6小時完成檢測。2、細菌抗生素耐藥敏表型鑒定。3、全程自動化操作步驟，自動填充、封口、上卡、卸卡。4、細菌鑒定準確率、可靠程度等同鑒定金標準API，準確率高

6、達99%。,VITEK2儀器的構(gòu)成,儀器主要有菌液接種和封口裝置、讀數(shù)器/恒溫孵箱、電腦系統(tǒng)和測試卡等組成,儀 器 外 觀,1.填充門 填充入口2.用戶前門 光學、孵育測試卡的運送入口3.用戶上門 光學系統(tǒng)和旋轉(zhuǎn)裝置所在4.裝載門 用于測試卡的裝載/卸載5廢卡收集門 取出儀器處理過的廢測試卡,工 作 原 理,細菌的鑒定： 采用傳統(tǒng)的比色法和快速熒光法 其中熒光法是在測試卡的小孔中加入酶底物，

7、使其與細菌產(chǎn)生的酶結(jié)合生成熒光物質(zhì)。儀器在短時間內(nèi)分析細菌對不同生化底物所產(chǎn)生的不同熒光物質(zhì)。,藥物敏感度的測定：,采用光電比濁原理測定各個測試孔的濁度變化，每隔一定時間讀取數(shù)據(jù)一次，獲取待檢菌在不同濃度藥液及不同藥物中的生長率。儀器的CPU自動計算濁度變化的斜率，并與陽性對照孔斜率比較，再分析計算出最低抑菌濃度值（MIC）。,操作前的準備,鹽水分配器微量可調(diào)移液器載卡架數(shù)字顯示電子比濁儀清潔試管鑒定及藥敏卡,VITEK2簡易

8、操作流程,,菌懸液配制及稀釋,懸浮液：0.45%Nacl液，PH4.5—7.2菌懸液濃度：鑒定卡 GN（陰性桿菌） 0.5—0.63 麥氏單位 GP（陽性菌） 0.5—0.63 麥氏單位 NH（苛氧菌） 2.7—3.3 麥氏單位 YST（真菌） 1.8—2.2 麥氏單位 A

9、NC（厭氧菌） 2.7—3.3 麥氏單位藥敏卡 AST－GN 3.0ml鹽水 + 145μl 0.5—0.63麥氏單位菌懸液 AST－GP 3.0ml鹽水 + 280μl 0.5—0.63麥氏單位菌懸液 AST－YST 3.0ml鹽水 + 145μl 0.5—0.63麥氏單位菌懸液,操 作 流 程,進行操作前先對濁度計進行校準，取 兩個試管，分別為鑒定管和藥敏

10、管， 使用鹽水分配器在試管中加入3.0 ml 鹽水。,1.從平板中選擇形態(tài)相同的單個菌 落，在無菌條件下使用接種針或棉棒接種至鑒定管鹽水中，使用VITEK2濁度計制備相應麥氏單位的密度均一的微生物菌懸液。從鑒定管中吸取相應量的菌懸液至于藥敏管中。（懸浮接種物接種于卡前，不能超過30分鐘）,,2.將懸浮管及卡片按順序至于載卡架 上，輸樣管插入菌懸液中

11、。藥敏卡 應放在配對鑒定卡的后面。,3. 將載卡架放入儀器填充倉，按“充入”（Start Fill），70秒左右填充完畢。填充完畢后，儀器的藍色指示燈亮 ,將載卡架取出并放入裝載倉。儀器自動掃描條碼，審核所有輸入的卡片信息是否正確，確認無誤后自動進行封口和上卡。操作完成后，儀器口的藍色箭頭閃亮 ，提示取出載卡架。,關(guān)于報告,培養(yǎng)的目的：使用體外實驗的方法檢測可能導致的病原菌并給以藥敏結(jié)果，為臨床醫(yī)生針對某一特定的臨床感

12、染提供依據(jù)。（但培養(yǎng)并不是萬能的）,藥敏實驗解讀注意事項,1、細菌分析儀的藥敏組合是固定的。2、某些細菌對某類抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏試驗。3、試驗的藥物代表一類藥，而不是一種藥。7、因為是體外藥敏試驗，有些藥體外試驗敏感，可能臨床治療無效。8、同一菌株可能出現(xiàn)亞種，導致連續(xù)藥敏結(jié)果不吻合。,細菌耐藥概念,多重耐藥（MDR）: 指細菌同時對三種以上結(jié)構(gòu)不同（作用機制不同）抗菌藥物耐藥，如頭孢菌素、喹諾酮類、氨基糖苷類；

13、泛耐藥（ PDR）:細菌對本身敏感的所有藥物耐藥；超級細菌:并非科學概念，一般指PDR與部分MDR，沒有確切定義，以下細菌屬于此列：MRSA/VRSA;VRE;MDR-PA,PDR-AB;ESBL(+)+AmpC(+) 腸桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌（產(chǎn)KPC酶、包括產(chǎn)NDM-1細菌）,,MRSA：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌VRSA： 耐萬古霉素金黃色葡萄球菌VRE： 耐萬古霉素腸球菌ESBLs： 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶KP

14、C酶： 產(chǎn)碳青霉稀酶的一種KPC型,關(guān)于細菌耐我們應該知道什么？,天然耐藥的抗菌藥物（肯定無效）可以選擇的抗菌藥物（可能有效）,檢測出耐藥菌怎么辦,如果檢測出多重耐藥菌、泛耐藥菌及超級細菌，應在報告單上注明為耐藥菌，及時告知臨床科室，讓臨床科室做好隔離工作，并報告院感辦檢出耐藥菌，做好耐藥菌株及危機值的登記。,與臨床溝通中常見問題,1、我們想用的藥物在藥敏試驗中 沒有做？可能是天然耐藥可能是藥物的敏感性被其他藥物所

15、預報,,2、為什么有的菌報告很多種藥物， 有的僅報告幾種藥物？報告的藥物種類根據(jù)細菌種類的不同而有所不同，如銅綠假單胞菌報告的藥物較多，而嗜麥芽窄食單胞菌報告的藥敏較少,,3、是否能將所用的藥都做藥敏試驗?沒有必要：通過耐藥機制和標志性藥物可以預測其他抗菌藥物的敏感性沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標準和解釋標準）,,4、在藥敏試驗報告中MIC越小的抗菌藥物效果越好嗎？如何根據(jù)MIC聯(lián)合用藥？

16、感染菌對同一種藥物的MIC越小，效果越好不同種抗菌藥物之間MIC無可比性目前很多儀器報告的是檢測折點，而不是真正的MIC,,5、選擇藥敏報告敏感的藥物，為什么臨床治療無效？ 體外藥敏試驗只能預測體內(nèi)治療效果，并不等同； 一般來說，耐藥＝治療無效； 敏感≠治療有效?？赡懿皇钦嬲闹虏【ㄎ廴净蚨ㄖ簿┘毦旧硪蛩兀ㄈ缯T導耐藥，生物被膜）感染部位與藥代動力學因素細菌的MIC，給藥劑量和用藥方式藥敏試驗藥物中有些藥物單獨

17、使用無效，但可以與其他藥物聯(lián)合用藥藥物劑型及生物利用度（純品、商品）,,6、鑒定結(jié)果明明寫著四聯(lián)球菌、革蘭氏陽性桿菌，為何沒有藥敏結(jié)果？四聯(lián)球菌為微球菌，一般不引起人體致病，為非致病菌，故考慮污染可能。藥敏結(jié)果參照CLSI標準，目前革蘭氏陽性菌沒有參照標準，故暫不能做藥敏試驗，若需治療可參照陽性球菌用藥。,,7、涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？涂片鏡檢是報告所有檢見的細菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)

18、基上才能生長。,,8、取的明顯就是膿液標本，為何鑒定報告為無菌生長？我們做的是有氧培養(yǎng)，膿液可能為厭氧菌感染?？赡芗毦淮罅康闹行粤＜毎淌伞?,9、培養(yǎng)已經(jīng)三天了，今天怎么結(jié)果還沒出來？一般培養(yǎng)如正常菌群生長或無菌生長24-48小時報告，若需分離致病菌的則時間會延長出報告。,,10、今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？取材是否規(guī)范。痰標本，有時選優(yōu)勢菌做，就可能導致兩次不一樣。,總 結(jié),細菌藥敏試驗在選擇抗菌藥物種類上為臨床