細(xì)菌代謝產(chǎn)物的檢測及鑒定

1、,細(xì)菌的分類及鑒定同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科,細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn),原理：由于細(xì)菌各自的酶系統(tǒng)不同，新陳代謝的產(chǎn)物也有所不同，而這些產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性。為此，可利用生物化學(xué)的方法來鑒別細(xì)菌的類別，這種試驗(yàn)稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn),常用檢查方法,碳水化合物代謝試驗(yàn)氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)碳源利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)抑菌試驗(yàn),碳水化合物代謝試驗(yàn),,糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn),原理 由于細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖類的酶，故分解糖的能力不同，終末產(chǎn)

2、物亦不一致。應(yīng)用 鑒定細(xì)菌最主要的試驗(yàn)，特別對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要 。,,,氧化一發(fā)酵試驗(yàn)(O／F試驗(yàn)),原理 氧化型：僅在有氧環(huán)境中分解葡萄糖 發(fā)酵型：在有氧或無氧環(huán)境中都能分解 葡萄糖 產(chǎn)堿型：在有氧或無氧環(huán)境中都不能 分解葡萄糖,,結(jié)果：兩支培養(yǎng)基均無變化為產(chǎn)堿型；兩支培養(yǎng)基均產(chǎn)酸為發(fā)酵型；若不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧

3、化型。應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌（發(fā)酵型） 非發(fā)酵菌（產(chǎn)堿型/氧化型） 葡萄球菌（發(fā)酵型） 微球菌（氧化型）,,,,,β-半乳糖苷酶試驗(yàn),原理：有的細(xì)菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。,結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，一般在20～30min內(nèi)顯色。應(yīng)用：迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰

4、性。本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。,,,七葉苷水解試驗(yàn),原理：七葉苷 七葉素 黑色化合物培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。,,,細(xì)菌,枸櫞酸鐵,結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛栃?，不變色者為陰性。?yīng)用：D群鏈球菌（+） 其它鏈球菌（-）,,甲基紅試驗(yàn),原理：葡萄糖 丙酮酸 混合酸（pH )

5、 醇酮醛（pH ) 紅色反應(yīng)（+） 橘黃色（-）,,,,細(xì)菌,,甲基紅試劑,,,,培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。應(yīng)用：大腸埃希菌（+） 產(chǎn)氣腸桿菌（-） 腸桿菌科中沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽性，而腸桿菌屬則為陰性。,,,,V-P試驗(yàn),原理：葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇

6、 二乙酰 紅色化合物（+）培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,,,,細(xì)菌,,OH-,O,胍基,結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性；如無紅色出現(xiàn)且于35 ℃ 4h后仍如故者即為陰性。應(yīng)用：常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。 產(chǎn)氣腸桿菌（+） 大腸埃希菌（-）,,,,蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn),,吲哚試驗(yàn),原理 色氨酸 吲哚

7、 玫瑰吲哚 （紅色）應(yīng)用 腸道桿菌的鑒定。 大腸埃希菌（+） 沙門菌屬（-）,,,對(duì)二甲基氨基苯甲醛,,,,硫化氫試驗(yàn),原理 含硫氨基酸 硫化氫 硫化鉛/硫化亞鐵

8、 （黑色）應(yīng)用 腸桿菌科菌屬間的鑒定。,,,細(xì)菌,醋酸鉛/硫酸亞鐵,尿素（脲）酶試驗(yàn),原理： 無色尿素 氨 紅色應(yīng)用：腸桿菌科中變形桿菌屬的鑒定。,,,,細(xì)菌,,,苯丙氨

9、酸脫氨酶試驗(yàn),原理 苯丙氨酸 苯丙酮酸 10%氯化鐵 綠色化合物應(yīng)用：腸桿菌科的鑒定 變形桿菌屬、摩根菌屬、普羅威 登斯菌屬（+）,,,,,氨基酸脫羧酶試驗(yàn),原理：氨基酸

10、 特異性脫羧酶 胺＋CO2 指示劑變色應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如肺炎克雷伯菌賴氨酸為陽性，鳥氨酸為陰性。,,,,,明膠液化試驗(yàn),原理：明膠 明膠酶 氨基酸 失去凝固力

11、應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙雷菌、普通變形桿菌、陰溝腸桿菌等。,,,碳源利用試驗(yàn),,枸櫞酸鹽利用試驗(yàn),原理 枸櫞酸鹽 碳酸鹽+氨（pH ) 溴麝香草酚藍(lán) 綠色 深藍(lán)色應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定 埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌 屬（-）,,,,,,,呼吸酶類試驗(yàn),,細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn),原理

12、鹽酸二甲基對(duì)苯二銨 醌類化合物 （深紫色）應(yīng)用 奈瑟菌屬、假單胞菌屬（+） 腸桿菌科（-）,,細(xì)菌,Cyt氧化酶,,,,過氧化氫酶（觸酶）試驗(yàn),原理 某些細(xì)菌分泌過氧化氫酶，使過氧化氫生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。應(yīng)用 金黃色葡萄球