活性粘細(xì)菌的篩選及產(chǎn)物分離鑒定.pdf

1、20世紀(jì)五十年代,人們發(fā)現(xiàn)粘細(xì)菌(myxobacteria)能夠產(chǎn)生抗生素,此后具有生物學(xué)活性的粘細(xì)菌的分離篩選就成為人們的研究熱點(diǎn)之一,尤其是從粘細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)、分離及鑒定新的抑菌、抗腫瘤化合物。
　　本論文首先對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的16株粘細(xì)菌進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,提取其粗產(chǎn)物,采用濾紙片法、生長(zhǎng)速率抑制法進(jìn)行抑菌活性篩選,采用MTT法進(jìn)行抗腫瘤活性篩選。結(jié)果顯示,菌株m03粗產(chǎn)物的抑真菌效果最好,抑菌譜較寬,對(duì)白色念珠菌、釀酒酵母、煙曲霉、根霉

2、、黑曲霉、青霉、毛霉的抑菌直徑分別為14.5mm、12.3mm、8.8mm、14.0mm、10.2mm、13.3mm、11.3mm,對(duì)紋枯病原菌和稻瘟霉的抑制率為72.4％和69.3％;菌株m01粗產(chǎn)物的抑細(xì)菌活性最好,能夠較好的抑制腸炎桿菌、大腸桿菌、巨大芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng),抑菌圈直徑分別為9.6mm、9.8mm、10.2mm、10.2mm、21.4mm,菌株m11、m01和m16對(duì)白血病癌細(xì)胞K562抑制活性較強(qiáng),其IC

3、50值分別為11μg/mL、21μg/mL和21μg/mL。
　　隨后對(duì)抑真菌活性最高的菌株m03和抗腫瘤活性最高的菌株m11進(jìn)行固體平板和液體搖瓶培養(yǎng),通過液體培養(yǎng)形態(tài)、固體菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)等形態(tài)學(xué)特征及生理生化實(shí)驗(yàn),并結(jié)合16SrDNA分子生物學(xué)序列分析,最終確定菌株m03為橙色粘球菌(Myxococcus fulvus),菌株m11為粘球菌屬(Myxococcus.sp)。分析了兩菌株的生長(zhǎng)特性,考察了兩菌株的生長(zhǎng)曲線,確

4、定兩菌株的最佳培養(yǎng)條件為:玉米淀粉、酵母浸粉、添加生長(zhǎng)因子維生素B12,無機(jī)鹽選擇硫酸鎂,最適pH值8.0,最適培養(yǎng)溫度為30℃,轉(zhuǎn)速140r/min,接種量10％,種齡56h,裝液量60mL(300mL三角瓶)。
　　進(jìn)一步對(duì)菌株m03進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵,提取粗產(chǎn)物,通過硅膠柱、凝膠柱、反相柱等多種層析分離手段,對(duì)粗產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,最終得到5個(gè)化合物M1-M5,并通過核磁共振、質(zhì)譜等波譜手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,發(fā)現(xiàn)它們均為已知化合物:M