發(fā)酵染菌原因分析

1、發(fā)酵染菌原因分析發(fā)酵染菌原因分析第一部分：基礎(chǔ)知識1）雜菌的類型空氣中的微生物大多數(shù)是細菌和芽孢還有一定數(shù)量的霉菌、酵母和病毒。細菌的大小有零點幾微米至幾個微米.根據(jù)以上特點我們應得出如下結(jié)論：A：這些微生物在空氣中極少單獨游離存在基本上是附著于灰塵、液滴等微粒的表面上。B：介質(zhì)過濾除菌就是把空氣中的各種微粒和極少量的游離微生物捕集起來予以除掉。因此我們通常所用的空氣過濾器為什么0.3u可以保證無菌發(fā)酵生產(chǎn)的原因。2）無菌檢查與染菌的處

2、理在抗生素生產(chǎn)過程中為了及早發(fā)現(xiàn)染菌并進行恰當處理保證生產(chǎn)正常進行對菌種制備、種子罐、發(fā)酵罐的接種前后和培養(yǎng)過程中須要按工藝規(guī)程要求按時取樣，進行無菌檢驗。A：無菌檢查培養(yǎng)液是否污染雜菌可從三個方面進行分析：a:無菌試驗b:培養(yǎng)液的顯微鏡拉查c:培養(yǎng)液的生化指標變化情況。其中無菌試驗是判斷染菌的主要依據(jù)。無菌試驗現(xiàn)在采用的無菌試驗方法有肉湯培養(yǎng)法、雙碟培養(yǎng)法、斜面培養(yǎng)法。其中以酚紅肉湯培養(yǎng)法和雙碟培養(yǎng)法結(jié)合起來進行無菌檢查用的較多。(1

3、)肉湯培養(yǎng)法直接用裝有酚紅肉湯的無菌試管取樣然后放入37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時觀察試管內(nèi)肉湯培養(yǎng)基的顏色變化同時進行顯微鏡觀察。（2）斜面培養(yǎng)法先用空白無菌試管取樣然后在無菌條件下接種于斜面培養(yǎng)基上置于37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時觀察有無雜菌菌落生長。。（3）雙碟培養(yǎng)法種子罐樣品先取入肉湯培養(yǎng)基中然后在無茵條件下在雙碟培養(yǎng)基上面劃線剩下的肉湯培養(yǎng)物在恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)6小時后復劃線一次發(fā)酵罐培養(yǎng)液直接取入空白無菌試管中于37℃下培

4、養(yǎng)6小時后在雙碟培養(yǎng)基上劃線。24小時內(nèi)的雙碟定時在燈光下檢查有無雜菌生長。24小時~48小時的雙碟1天檢查一次以防生長緩慢的雜菌漏檢。正常生產(chǎn)過程中種子罐和發(fā)酵罐每隔8小時取樣一次進行無菌檢查。該方法經(jīng)常用于單菌落挑選，可以從染有雜菌的培養(yǎng)液中經(jīng)多次劃線挑取單菌落進行分離培養(yǎng)，得到純種的種子。無菌試驗的結(jié)果一般需要8~12小時才能作出判斷。為了縮短判斷時間有時向培養(yǎng)基中加入赤霉素、對氨基苯甲酸等生長激素以促進雜菌的生長。B:染菌的判斷

5、培養(yǎng)基的染菌判斷是錯綜復雜的工作又是一種細微觀察、認真分析的王作。(二)污染噬菌體的處理抗生素等產(chǎn)品發(fā)酵過程中有時出現(xiàn)噬菌體污染輕者造成生產(chǎn)能力大幅度下降重者造成停產(chǎn)。一般噬菌體污染后往往出現(xiàn)發(fā)酵液突然轉(zhuǎn)稀泡沫增多早期鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體染色不均勻，在較短時間內(nèi)菌體大量自溶最后僅殘留菌絲斷片平皿培養(yǎng)出現(xiàn)典型的噬菌斑溶氧濃度回升提前營養(yǎng)成分很少消耗產(chǎn)物合成停止等現(xiàn)象。發(fā)酵過程中污染噬菌體后，一般做如下處理：1.發(fā)酵液用高壓蒸汽滅菌后放掉嚴防發(fā)酵液

6、任意流失；2.全部停產(chǎn)對環(huán)境進行全面的清洗和消毒斷絕噬菌體的寄生基礎(chǔ)；3.更換生產(chǎn)菌種不斷篩選抗噬菌體菌種防止噬菌體的重復污染。污染烈性噬菌體時出現(xiàn)上述現(xiàn)象。如果污染溫和噬菌體時其反應溫和平皿培養(yǎng)不出現(xiàn)明顯的噬菌斑只出現(xiàn)部分菌體自溶生化指標變化不顯著生產(chǎn)能力降低對生產(chǎn)的危害亦是嚴重的但不易被發(fā)現(xiàn)。防止溫和噬菌體污染的方法同上所述。第二部分：染菌原因分析染菌是發(fā)酵工業(yè)的大敵不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)中造成發(fā)酵染菌的原因

7、很多，分析染菌的原因是很困難的。但在眾多的原因分析中，從人、機、料、法、環(huán)各個環(huán)節(jié)進行細致的分析.從多方面查找原因查出雜菌的來源采取相應措施予以制服。一、染菌原因的分析。染菌的途徑多表現(xiàn)的現(xiàn)象多樣。因而追查雜菌的來源是困難的從現(xiàn)有的經(jīng)驗可從下述幾千方面進行分析。（一）從染菌的規(guī)模和時間分析在發(fā)酵過程中如果是種子罐和發(fā)酵罐同時大面積染菌雜菌的主要來源可能是空氣凈化系統(tǒng)如空氣過濾器失效或空氣管道滲漏造成的。其次考慮種子制備工序。如果只是發(fā)酵

8、罐大面積染菌除考慮空氣凈化系統(tǒng)帶菌外還要重點考查接種管道、補料系統(tǒng)。發(fā)酵培養(yǎng)基采用連續(xù)滅菌工藝時還要嚴格檢查連消系統(tǒng)是否帶入雜菌。如果是部分發(fā)酵罐在發(fā)酵早期染菌可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底或種子罐帶菌或接種管道滅菌不徹底造成的。如果是發(fā)酵的中后期染菌重點分析補料系統(tǒng)和加消沫劑系統(tǒng)，個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌就從單個罐體查找雜菌來源如罐內(nèi)是否有“死角”或冷卻系統(tǒng)有滲漏。當然還要檢查附件個別罐批的散在性染菌其原因很難追查要具體情況具體分析。（二）從雜菌類