以廬山或牯嶺命名的8種江西鄉(xiāng)土植物的DNA分子鑒定研究.pdf

1、DNA條形碼技術可以快速準確地鑒定物種，這使其成為傳統(tǒng)植物鑒定體系中的重要補充，同時也能夠作為新型工具來很好的保障植物準確地進行分類鑒定。本此實驗主要以廬山或牯嶺命名的8種植物為對象來探討DNA條形碼技術是否可用于該地區(qū)的物種鑒定。
　　目的:
　　利用DNA條形碼技術來快速、準確地對廬山地區(qū)以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物物種及其密切相關種進行鑒定研究，為后續(xù)進行有效的對以廬山或牯嶺命名的江西鄉(xiāng)土植物分類系統(tǒng)管理打好基礎。<

2、br>　　方法:
　　本研究選用廬山上采摘的以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物樣本的DNA序列來進行DNA提取，逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)擴增和測序。為了擴大研究范圍，本次實驗從GenBank中下載了多個近緣物種的DNA序列，全部序列經CodonCode Aligner V軟件拼接、Clustalw4.0軟件比對分析、MEGA7.0計算相關數據和K2P模型構建NJ和ML聚類樹等進行鑒定分析。
　　結論：
　　一

3、．在以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物中ITS與psbA-trnH序列進行PCR擴增并且測序的成功率為100％。ITS序列所獲得的5種植物序列長度均在440至724bp之間，比對長度為316~661bp，其中變異位點率為31.9%到61.3%，簡約位點率也達到了49.1%~54.5%；psbA-trnH序列所獲得的3種植物序列長度均在475~581bp之間，比對長度在351~481bp之間，其中變異位點率為35.5%~52.9%，簡約位點率

4、也達到了27.8%~51.6%。此結果表明兩類序列不但有較大的變異性，而且還存在較多的信息位點來用于重建可靠的系統(tǒng)進化關系。
　　二．以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物與近緣種其ITS+PsbA-trnH序列中平均GC含量為29.8%~62.5%。以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物種內的K2P遺傳距離均為0.000，本研究發(fā)現以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物的ITS+PsbA-trnH序列與其近緣種的差異較大、變異位點較多，8種鄉(xiāng)土植物種間

5、的K2P平均距離為0.0744~0.3117，因此該8種鄉(xiāng)土植物和相關種間的K2P遺傳距離均大于種內的；
　　三．研究時采用NJ和ML法構建系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現以廬山或牯嶺命名的8種鄉(xiāng)土植物其物種的分支組成均具有很高相似性，這一結果印證了構建的NJ和ML系統(tǒng)樹所用的拓撲結構其可信度高。
　　四．研究結果顯示，ITS+psbA-trnH序列可為物種種間系統(tǒng)的發(fā)育研究提供分子依據：
　　(1)本研究結果發(fā)現廬山木槿與木槿的近緣關

6、系最近，所以支持《中國植物志》將廬山木槿歸屬于木槿屬這一觀點；
　　(2)本研究中牯嶺山梅花與絹毛山梅花個體聚在一起，與其他近緣種明顯分開，其與《中國植物志》中說明的牯嶺山梅花是絹毛山梅花的一變種，親緣關系最近符合；
　　(3)廬山蠟瓣花(Corylopsis sinensis Hemsl var.calvescens Rend)：中國植物志及一些地方植物志已改為禿蠟瓣花(Corylopsis willottiae Rend

7、)。本研究將廬山蠟瓣花、蠟瓣花和腺蠟瓣花歸為一支，并支持《中國植物志》第三十五卷把廬山蠟瓣花歸為蠟瓣花屬中的穗花系；
　　(4)本研究發(fā)現，ITS序列在景天屬物種種間和種內變異均存在顯著的差異，其水平鑒定成功率達到100%。因此本研究可以準確地將廬山景天、土佐景天和日本景天區(qū)分開，所以ITS序列可作為景天屬植物的DNA條形碼通用序列；
　　(5)psbA-trnH序列可以準確的將石韋及其近緣屬進行區(qū)分。psbA-trnH序列

8、可以準確鑒定石韋及其親緣屬這一屬性使其可用于蕨類藥材DNA條形碼的鑒定研究；
　　(6)ITS序列在忍冬屬中具有很高的擴增效率和鑒定成功率。我們在實驗中通過雙向測序兩端拼接，有效的解決了測序過程中可能會存在polyA/T結構這一問題，從而可得到物種識別所需要的信息。該序列贊同《中國植物志》（第七十二卷）將廬山忍冬作為下江忍冬的一變種，歸為紅花亞組；
　　(7)本研究發(fā)現，ITS序列可以準確的區(qū)分廬山懸鉤子、北懸鉤子、絨毛懸鉤

9、子和石生懸鉤子，因此ITS序列作為鑒定懸鉤子及其親緣物種的研究是具有可行性的；
　　(8)本研究發(fā)現，ITS序列在東俄芹屬物種的種間和種內變異均存在顯著的差異，因此可以準確地將傘形科中東俄芹屬、茴芹屬、小芹屬和舟瓣芹屬區(qū)分開，所以ITS序列可被視為傘形科植物DNA條形碼中的通用序列。
　　本研究的創(chuàng)新性：首次嘗試在DNA分子層面上對廬山地區(qū)的鄉(xiāng)土植物進行研究。研究依據分子系統(tǒng)學理論、基于DNA條形碼在植物鑒定中的原則、利用鑒