三種鱉線粒體DNA部分基因序列的比較分析和分子鑒定標(biāo)記.pdf

1、　　本文利用線粒體DNA分子標(biāo)記技術(shù)研究了中華鱉、砂鱉和山瑞鱉線粒體DNA部分基因的序列并進(jìn)行了比較分析，在分子水平證實了砂鱉為鱉屬一新種并獲得了這三種鱉各自的分子鑒定標(biāo)記，主要結(jié)論如下：　　(1)對中華鱉、砂鱉線粒體DNA12SrRNA基因片段進(jìn)行了序列測定和PCR-RFLP分析。結(jié)果表明：中華鱉、砂鱉線粒體DNA12SrRNA基因片段的堿基序列長度相同，均為562bp，其A、T、C、G含量相似，兩序列間共有13處堿基不同，序列差異

2、率為2.31﹪，而中華鱉與砂鱉各自個體間的平均序列差異率分別為0.53﹪和0.36﹪，種間差異顯著；用內(nèi)切酶MspⅠ酶切兩種鱉的12SrRNA基因片段，在砂鱉中可得到大小為519bp和43bp兩個片斷，而中華鱉無此酶切位點，這可作為準(zhǔn)確鑒別中華鱉和砂鱉的分子鑒定標(biāo)記。(2)對三種鱉線粒體DNA兩個rRNA基因全序列核苷酸差異率的分析表明：中華鱉與砂鱉12SrRNA基因序列間的差異率為4.0﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為11.0﹪，砂

3、鱉、山瑞鱉間的序列差異率為10.8﹪；中華鱉與砂鱉16SrRNA基因全序列的差異率為4.0﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為13.2﹪，砂鱉、山瑞鱉間的序列差異率為12.8﹪?；谌N鱉mtDNA12SrRNA、16SrRNA基因全序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果均支持砂鱉為鱉屬一新種。(3)對中華鱉、砂鱉和山瑞鱉線粒體DNA細(xì)胞色素b基因進(jìn)行了序列測定、序列的比較分析、系統(tǒng)進(jìn)化分析和PCR-RFLP分析。結(jié)果表明中華鱉、砂鱉與山瑞鱉線粒體DNA

4、Cytb基因的序列全長相同，均為1140bp，其A、C、G、T含量相似。序列間的差異率分析表明：中華鱉與砂鱉此基因序列間的差異率為7.7﹪，中華鱉、山瑞鱉間的序列差異率為15.0﹪，砂鱉、山瑞鱉間的序列差異率為15.9﹪，種間差異顯著，且中華鱉與砂鱉的差異率相對較小。PCR-RFLP分析表明：用內(nèi)切酶NdeⅠ可準(zhǔn)確鑒別砂鱉，而用內(nèi)切酶BamHⅠ則可準(zhǔn)確鑒別山瑞鱉。內(nèi)切酶NdeⅠ和BamHⅠ的聯(lián)用分析，可使這三種鱉在分子水平都得到明確的鑒