2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、FISHFISH檢測檢測HER2HER2的意義的意義乳腺癌有效的治療取決于正確的選擇治療方案,腫瘤專家研究發(fā)現HER2的水平是以阿霉素為基礎藥物化療重要而獨立的預后因子。HER2水平的檢測被認為是選擇乳腺癌化療的標準依據。HER2水平的檢測對乳腺癌治療具有指導性意義。不準確的結果會造成不正確的治療方案。導致病人遭受不必要的化療或者使病人喪失有效的治療良機。HER2neu也稱作CerbB2,在調節(jié)細胞的生長中起著重要的作用,是分子量為18

2、5kd的轉膜細胞受體,屬于酪氨酸酶家族的成員。HER2被證實在乳腺癌、卵巢癌和其它腫瘤上擴增和過表達。其擴增和過表達被認為是乳腺癌最重要預后和化療標記。大約有25%30%乳腺癌有HER2基因擴增?;熓侨橄侔┬g后最重要的治療方法之一,患者腫瘤HER2擴增對以阿霉素為基礎化療的敏感性好,研究表明,HER2擴增的病人實施強化劑量的化療后其生存率明顯提高。而對無HER2擴增的病人沒有那么好的效果。所以對無HER2擴增的病人沒有必要執(zhí)行這樣的化

3、療。準確的HER2水平檢測為正確選擇治療方案提供重要依據。目前用于治療乳腺癌的單克隆抗體Herceptin理論上只對細胞膜上過多HER2蛋白表達的細胞才有作用,所以Herceptin治療需要篩選HER2陽性的患者才有可能成功。目前檢測HER2基因擴增或HER2蛋白過度表達的方法有許多種,有南方點墨法、西方點墨法、北方點墨法、免疫組織化學染色法(IHC)和熒光原位雜交法(fluescenceinsituhybridizationFISH)

4、等。目前DAKOHerceptintest,VysisPathVysionHER2DNAProbe試劑盒和OncINFMHER2neu已通過美國食品藥物管理局(FDA)的認證,目前被認為是比較可靠的方法。IHC和FISH均可以使用福爾馬林固定的組織蠟塊來檢測,和一般病理組織標本處理相同,病理存檔的組織塊也能用于HER2的檢測,因此目前實驗室多數使用IHC和FISH來檢測HER2。Herceptintest和FISH相比Herceptin

5、test操作時間比較短,大約46個小時即可完成,而FISH需要隔夜完成。使用的設備Herceptintest只需要一般光學顯微鏡,FISH則需要使用熒光顯微鏡。從分子生物學原理上講FISH檢測的是腫瘤細胞的DNA,而Herceptintest(免疫化學法)檢測的是細胞膜表面的蛋白質。實際上真正執(zhí)行基因功能的物質是蛋白質而不是DNA,這要看HER2基因是否擴增,當然以觀察細胞膜表面HER2蛋白質的量是否增加最為直接。也最為可信。因為有時即

6、使DNA有擴增其結果未必能在蛋白質曾面表現出來。因為由DAN有表現到蛋白質被制造出來必須經過很多程序,中間可能出現很多干擾因素。除此之外,免疫化學檢測法比較便宜,省時,可以較普遍的篩選。FISH的優(yōu)點在于使用傳統(tǒng)分子生物學方法檢測腫瘤組織的DNA。FISH在熒光顯微鏡下可以確認出腫瘤所在的位置,以VysisPathVysionHER2DNAProbe來說,它會把HER2基因部位橘色熒光亮點,還將第17對染色體的中心顆粒(centrome

7、re)呈現綠色亮點,我們只要對比橘色和綠色亮點的數目,若橘色點綠色點大于2,就表示有HER2擴增,正常細胞橘色點綠色點數目比值小于2。FISH同IHCHER2水平檢測方法相比,IHC檢測的準確性不如原位雜交(CISH)和原位熒光雜交法(FISH)。就各種檢測方法比較FISH為最好,FISH檢測的結果可靠,被喻為HER2水平檢測的金標準。HER2免疫組織化學2的意思是腫瘤組織在免疫組織化學染色下著色強度為2價。多數認為HER23(3價)具

8、有臨床意義,可以作為使用Herceptin治療的依據。her2IHC2則必須加作FISH檢測是否真的有HER2擴增。而HER2IHC0或1則表示沒有沒有需要的材料但Vysis公司不提供實驗室試劑HER2nue探針檢測正常對照(正常信號率)derNo.30805093福爾馬林固定,石蠟包埋,培養(yǎng)好的人細胞株(nmalLSIHER2nueCEP17ratio)應用型顯微鏡載玻片數量:5片,對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。HER

9、2nue探針界限對照片(弱擴增信號率)derNo.30805042;福爾馬林固定,石蠟包埋。培養(yǎng)好的人細胞株(低水平HER2nue擴增)應用型顯微鏡載玻片數量:5片,對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。石蠟預處理試劑盒(Vysiscat.﹟32801200)盒內包括:預處理液(NN)數量:5X50mL蛋白酶(胃蛋白酶25003000單位mg)數量:5X25mg蛋白酶緩沖液(NaClsolutionpH2)數量:5X50Ml緩沖

10、洗液(2XSSC,pH7)數量:2X250mL中性緩沖福爾馬林液(4%多聚甲醛PBS配制)HemoDe(血液德)透明劑(FisherproductNo.15182507A)蘇木精和伊紅(H&E)適當的熒光顯微鏡浸泡油。室溫貯存超純甲酰胺。從發(fā)貨計算4℃保存1個月(查看生產商推薦的詳細信息)100%乙醇。室溫貯存濃縮的(12N)鹽酸1N氫氧化鈉純凈水(蒸餾水或去離子水或MilliQ)。室溫貯存橡膠水泥膠Drierite德里拉特[干燥用無水

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