間期FISH臨床檢測(cè)BCR-ABL融合基因的研究.pdf

1、目錄中文摘要：3論文正文：間期FISH臨床檢測(cè)BCR／ABL融合基因的研究5第一部分：熒光原位雜交技術(shù)平臺(tái)的建立6材料與方法：6實(shí)驗(yàn)結(jié)果：12討論：一17第二部分：間期FISH臨床檢測(cè)BCR／ABL融合基因20材料與方法：20實(shí)驗(yàn)結(jié)果：21討論：24第三部分：臨床檢測(cè)BCR／ABL融合基因的方法比較及意義26材料與方法：26實(shí)驗(yàn)結(jié)果：34討論：39全文總結(jié)：42參考文獻(xiàn)：43英文摘要：46致謝：49縮略詞表：51獨(dú)創(chuàng)性聲明：51綜述：5

2、222195份臨床診斷為CML或疑似CML的骨髓或外周血標(biāo)本，以第1部分實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，195例樣本中129例樣本檢測(cè)為陽性，占661％，其中典型的陽性信號(hào)模式1G1R2F，樣本92例，占陽性比例7l。3％，非典型陽性信號(hào)模式37例，占287％，與有類似文獻(xiàn)報(bào)道接近，檢測(cè)出的各非典型的信號(hào)模式有1G1R1F、2G2R1F、1G2F、2G1R1F、1G2R1F、2G3R1F，1G1R3F。3對(duì)來自6名確診CML患者格列衛(wèi)或骨髓移植治療

3、前后的26份骨髓樣本用三種方法進(jìn)行了檢測(cè)結(jié)果見表6實(shí)驗(yàn)結(jié)論1FISH技術(shù)方法驗(yàn)證一般分為四個(gè)步驟，A熟悉實(shí)驗(yàn)操作；B前期驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)包括內(nèi)容有組織類型、信號(hào)模式解釋、分析的細(xì)胞數(shù)和方法的敏感度、每一個(gè)信號(hào)模式的CUTOFF值；C臨床評(píng)價(jià)其內(nèi)容包括首先是對(duì)前期驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)建立的CUTOFF值進(jìn)行評(píng)估；通過檢測(cè)異常樣本建立異常參考范圍；解釋各信號(hào)模式與金標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)性；編寫標(biāo)準(zhǔn)操作手冊(cè)；實(shí)驗(yàn)的靈敏度或特異性；D精密度評(píng)價(jià)。總之，驗(yàn)證要求遵從標(biāo)準(zhǔn)規(guī)則，因

4、此，在其使用在臨床實(shí)驗(yàn)之前，驗(yàn)證該實(shí)驗(yàn)符合性，安全生，準(zhǔn)確阻這一系列的程序是很重要的。2間期FISH技術(shù)可以明顯提高染色體異常的檢出率及準(zhǔn)確率，且其方法穩(wěn)定?？梢詸z測(cè)出所有形式的Ph染色體，對(duì)于一些次要斷裂點(diǎn)形成BcR／ABL轉(zhuǎn)錄本RTPCR無法檢測(cè)到，間期雙色雙融合FISH可以檢測(cè)出，F(xiàn)ISH可應(yīng)用于CML異基因造血干細(xì)胞移植后MRD的監(jiān)測(cè)，以及伊馬替尼治療的療效觀察。其操作簡(jiǎn)易快速，靈敏度高，且骨髓或外周血均可采用。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)能及時(shí)發(fā)

5、現(xiàn)擴(kuò)大的白血病細(xì)胞克隆。是一種很有價(jià)值確診，預(yù)后判斷以及療效觀察有效手段。3本研究中最適用在本中心開展且穩(wěn)定的是FISH技術(shù)，其余兩種方法穩(wěn)定性，靈敏度，標(biāo)本運(yùn)輸送檢的流程上均需要進(jìn)一步提高，而且本研究指出FISH檢測(cè)與RTPCR有很好的相關(guān)性，因此在本中心臨床標(biāo)本檢測(cè)中，不管患者是處在疾病的何種時(shí)期，建議均需應(yīng)用FISH技術(shù)檢測(cè)BCR／ABL融合狀態(tài)。在三種技術(shù)方法均正確穩(wěn)定可靠的情況下可采用表7m]CML患者進(jìn)行遺傳檢測(cè)的策略。長(zhǎng)鑲