常見微生物標(biāo)本的采集

1、常見微生物標(biāo)本的采集、處理與檢測(cè)常見微生物標(biāo)本的采集、處理與檢測(cè)標(biāo)本采集的基本原則：盡早采集、根據(jù)可疑的病原體，選擇不同采集時(shí)機(jī)和標(biāo)本種類、在抗生素應(yīng)用前采集、遵守?zé)o菌操作、正確保存和運(yùn)送。容器應(yīng)密封不易碎，標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。1.1.血液標(biāo)本血液標(biāo)本正常人的血液是無菌的。當(dāng)細(xì)菌侵入時(shí)可引起嚴(yán)重的菌血癥或敗血癥。一般情況下在患者發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時(shí)采集；持續(xù)性菌血癥可隨時(shí)采集；間歇性菌血癥，應(yīng)預(yù)測(cè)其體溫上升期進(jìn)行采血。一般在使用

2、抗生素前采集2~3次；多部位采集，如兩側(cè)肘靜脈或動(dòng)、靜脈同時(shí)采取；對(duì)于已使用抗生素而無法停止的患者，也應(yīng)在下次用藥前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高陽性率。采血量成人一般5~10ml，嬰幼兒1~2ml。采集的血液標(biāo)本注入培養(yǎng)瓶中先進(jìn)行增菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基和血液標(biāo)本量的比例應(yīng)10：1，將血液中的各類殺（抑）菌物質(zhì)充分稀釋。需氧菌常用培養(yǎng)基有胰酪蛋白大豆胨肉湯和葡萄糖酚紅肉湯等，常加入對(duì)氨基苯甲酸（PABA）50μgml中和磺胺類，青霉

3、素酶2單位ml破壞青霉素類，硫酸鎂中和鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸鈉（sodiumpolyaholsulfonateSPS）可抑制血清中的抗菌物質(zhì)，并對(duì)氨基糖苷類和多肽類抗生素有滅活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生長(zhǎng)因子。培養(yǎng)瓶每天觀察一次。如發(fā)現(xiàn)①培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體渾濁；②血球?qū)由厦娉霈F(xiàn)顆粒狀的生長(zhǎng)物，并且有自下而上的溶血；③有明顯的凝塊；④液體表面有菌膜，培養(yǎng)液清晰或渾濁等，表明

4、有細(xì)菌生長(zhǎng)。直接進(jìn)行涂片染色初步報(bào)告。同時(shí)分別接種血平板、巧克力（色）平板，普通培養(yǎng)和5%CO235℃培養(yǎng)。也可直接進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)。無細(xì)菌生長(zhǎng)跡象的培養(yǎng)瓶孵育至第7d，接種血平板、巧克力（色）平板，分別進(jìn)行普通培養(yǎng)和5%CO2環(huán)境35℃孵育24h。為了提高檢出的速度，在培養(yǎng)的第2~3d時(shí)應(yīng)移種一次。有厭氧菌感染時(shí)，同時(shí)注入需氧瓶和厭氧瓶，厭氧培養(yǎng)基通常用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、牛心腦浸液肉湯等；培養(yǎng)液中有刃天青，無氧時(shí)無色，有氧時(shí)呈紅色。需

5、氧瓶和厭氧瓶同時(shí)渾濁，或需氧瓶無生長(zhǎng)而厭氧瓶液體渾濁，提示厭氧菌生長(zhǎng)。分別接種血平板和厭氧血平板，置需氧和厭氧環(huán)境中，如果都只生長(zhǎng)1種細(xì)菌，則為兼性厭氧菌；如果僅在厭氧環(huán)境中生長(zhǎng)，可以直接報(bào)告“有厭氧菌檢出”。若長(zhǎng)期應(yīng)用抗細(xì)胞壁類抗生素，應(yīng)考慮細(xì)菌L型存在，將血液接種高滲培養(yǎng)基中，分別進(jìn)行需氧、厭氧和5%CO2環(huán)境培養(yǎng)。每周移種2~3次于高滲固體培養(yǎng)基上，觀察有無細(xì)菌L型菌落生長(zhǎng)。2.2.呼吸道標(biāo)本呼吸道標(biāo)本正常上呼吸道有正常菌群。下呼

6、吸道正常情況下無細(xì)菌或僅有少量細(xì)菌侵入腦脊液標(biāo)本的采集以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3~5ml，應(yīng)立即送檢或床邊接種。應(yīng)在35℃保溫運(yùn)送。直接涂片檢查由細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎一般呈現(xiàn)混濁，在抗生素治療后亦可不混濁。此外結(jié)核性腦膜炎、無菌性腦膜炎等也不混濁?？芍苯油科锾m染色檢查，不混濁的可3000rmin離心10~15min后取沉淀涂片染色檢查。如發(fā)現(xiàn)革蘭陰性、凹面相對(duì)的雙球菌，位于中性白細(xì)胞內(nèi)外，則可報(bào)告“找到革蘭陰性雙球菌，位于細(xì)

7、胞內(nèi)（外），疑似腦膜炎奈瑟菌”；有革蘭陽性矛頭狀的雙球菌，菌體周圍有明顯的莢膜，可報(bào)告“找到革蘭陽性雙球菌，疑似肺炎鏈球菌”。用肺炎鏈球菌全價(jià)抗血清進(jìn)行莢膜腫脹試驗(yàn)，陽性者可報(bào)告“莢膜腫脹試驗(yàn)檢出肺炎鏈球菌”；發(fā)現(xiàn)其他形態(tài)的細(xì)菌，可根據(jù)形態(tài)和染色性進(jìn)行報(bào)告。涂片陽性的標(biāo)本最好進(jìn)行標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)。應(yīng)立即接種在35℃預(yù)保溫的血平板和巧克力平板上置5~10%CO2環(huán)境35℃培養(yǎng)18~24h。腦脊液標(biāo)本一般經(jīng)3d培養(yǎng)仍未見細(xì)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告“

8、經(jīng)3天培養(yǎng)無細(xì)菌生長(zhǎng)”。腦脊液標(biāo)本特殊病原菌的檢驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌將腦脊液4000rmin離心30min，取沉淀抗酸染色；或?qū)⒛X脊液在室溫下靜置18~24h，待形成纖維網(wǎng)后，傾倒在潔凈玻片上抗酸染色?；蛴媒鸢贰癘”進(jìn)行熒光染色觀察。取沉淀接種羅瓊培養(yǎng)基進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)。新型隱球菌將腦脊液離心沉淀后，進(jìn)行墨汁負(fù)染，可在黑色背景中觀察到折光性很強(qiáng)的菌體和周圍似暈輪樣的透明莢膜，有時(shí)可見到生芽的新型隱球菌。5.5.糞便標(biāo)本的采集糞便標(biāo)本的采

9、集糞便標(biāo)本于急性腹瀉期及未使用抗生素之前采取自然排出的糞便，挑選粘液、膿血部分，置無菌容器、保存液或增菌培養(yǎng)基中?？捎酶亻T拭子。不能立即送檢的標(biāo)本應(yīng)放入CaryBlair運(yùn)送培養(yǎng)基中。（1）直接涂片檢查臨床懷疑是霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌感染或菌群失調(diào)需要大致估計(jì)菌群比例、二重感染（偽膜性腸炎、真菌性或葡萄球菌性腸炎）時(shí)進(jìn)行直接涂片染色檢查。霍亂弧菌的涂片檢查取“米泔水”樣糞便或肛門拭子涂片2張，干燥后用乙醇或甲醇固定，分別進(jìn)行革蘭染色和1

10、：10稀釋石炭酸復(fù)紅染色，用油鏡觀察有無革蘭陰性、魚群樣排列的弧菌。另外也可進(jìn)行懸滴法動(dòng)力試驗(yàn)和制動(dòng)試驗(yàn)。菌群失調(diào)及菌交替癥取糞便標(biāo)本直接涂片，進(jìn)行革蘭染色油鏡觀察，根據(jù)菌群的形態(tài)和染色特征可大致描述菌群的情況。疑為偽膜性腸炎的患者標(biāo)本中如發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌，則可報(bào)告“找到革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌”；如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性粗大桿菌、無莢膜，通常有位于菌體一端的卵圓形芽胞者，可報(bào)告“找到革蘭陽性芽胞桿菌，疑似艱難梭菌”。結(jié)核分枝