臨床微生物檢驗標本的采集ppt課件

1、臨床微生物檢驗標本的采集,在臨床微生物檢驗工作中，標本的正確選擇、采集和運送是保證實驗室質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，是實驗室工作準確和有效的前提。,第一節(jié) 標本的采集和處理原則,一、標本采集的一般原則,1.早期采集2.無菌采集3.根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4.采集適量標本5.安全采集,二、標本的處理,一些對環(huán)境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢厭氧性標本應(yīng)放在專門的運送瓶或試管內(nèi)運送，有時可直

2、接用抽取標本的注射器運送。,其他所有的標本采集后最好在2h之內(nèi)送到實驗室。若不能及時送檢，標本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存，如支氣管洗液、心包液、痰、尿等標本應(yīng)保存在4℃環(huán)境中，腦脊液等則要在25℃保存?；颊邩吮局锌赡芎写罅恐虏【还軜吮具\送距離遠近，都必須注意安全防護。標本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出。,,臨床常見微生物學(xué)檢驗標本通常有血液、腦脊液、尿液、傷口的膿液、胸水、腹水、糞便、痰液及泌

3、尿生殖系統(tǒng)的分泌物等，下面分別介紹各種標本的采集方法及檢測出不同病原體的臨床意義。,第二節(jié) 血液,一、 標本采集,1.皮膚消毒程序 嚴格執(zhí)行以下三步法: (1) 70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒以上。 (2) 1%～2%碘酊作用60秒或10 %碘氟60～90秒， 從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區(qū)域直徑達3cm以上。 (3) 70%酒精脫碘：對碘過敏的患者，用70%酒精消 毒60秒，待酒精

4、揮發(fā)干燥后采血。,2.采血部位 通常采血部位為肘靜脈。疑似細菌性心內(nèi)膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。對疑為細菌性骨髓炎或傷寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘處嚴格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培養(yǎng)。,3. 靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序 在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手 套固定靜脈，不可接觸穿刺點。(2) 用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養(yǎng) 瓶，或嚴格按廠商推薦的方法采血。(3) 血標

5、本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。 立即送檢，切勿冷藏。4.采血量 自動化儀器要求成人采血量是8～10 ml/瓶，兒童1～5 ml/瓶。,5.血培養(yǎng)次數(shù)和采血時間只要懷疑血液細菌感染，應(yīng)即刻采集。采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥物之前進行，在1h內(nèi)采集2～3次做血培養(yǎng)。 對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5～1h 采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后1h進行。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，

6、連續(xù)3d，每天采2 份。6.標本運送采血后應(yīng)該立即送檢,如不能立即送檢，可室溫保存，切勿冷藏。,二、血液中常見的病原體,,三、臨床意義,血液感染是一種危重的全身感染，對其進行病原菌的檢驗，提供病原學(xué)的診斷極為重要。 當少量細菌侵入血液循環(huán)，為一過性，不繁殖或很少繁殖，不引起或僅引起輕微的炎癥反應(yīng)者稱為菌血癥,若有全身性炎癥反應(yīng)的表現(xiàn)稱為膿毒癥。血液標本的細菌培養(yǎng)是診斷菌血癥的基本而重要的方法，若從患者血液中檢出細菌，一般視為病原

7、菌感染，提示有菌血癥。,常見的菌血癥或膿毒癥有：葡萄球菌菌血癥 由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶陰性葡萄球菌引起的菌血癥和膿毒癥逐年增多，占菌血癥的10%~15%，臨床表現(xiàn)明顯，發(fā)病急，中毒癥狀重。,腸球菌菌血癥 近年來明顯增多，約占菌血癥的10%。常見泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并發(fā)心內(nèi)膜炎。此菌可對多種抗生素耐藥，病情較重。,革蘭陰性桿菌菌血癥

8、 主要侵犯危及機體免疫功能低下的患者。常可引起泌尿生殖道、胃腸道、膽道及呼吸道感染。,厭氧菌菌血癥 厭氧菌常寄居于口腔、腸道和泌尿生殖道，并引起相應(yīng)部位的感染。 真菌血癥 常由條件致病性真菌引起，有假絲酵母菌、曲霉菌和毛霉菌等，以白假絲酵母菌最多見，多數(shù)伴有細菌感染。,第三節(jié) 腦脊液,一、標本采集,采集腦脊液一般用腰椎穿剌術(shù)獲得，特殊情況可采用小腦延髓池或腦室穿刺術(shù)。

9、標本采集后要立即送檢、化驗，一般不能超過1小時。腰穿法無菌取腦脊液3～5ml，置無菌管內(nèi)立即送檢。培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌時，應(yīng)將標本置于35℃條件下保溫送檢，不可置冰箱保存。但做病毒檢查的腦脊液標本應(yīng)放置冰塊，可在4℃保存72h。,二、腦脊液中常見病原體,三、臨床意義,細菌性腦膜炎：是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的常見類型，其中以流行性腦脊髓膜炎為常見，有的呈暴發(fā)型，病情嚴重，病死率較高；多發(fā)年齡在5～29歲，冬春季多發(fā)，可用青

10、霉素類、磺胺類、頭孢霉素類抗生素治療。結(jié)核性腦膜炎最常見，近幾年呈回升趨勢，為防治重點。,真菌性腦膜炎：最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假絲酵母菌、球孢子性腦膜炎日漸增多，特別是免疫功能低下和惡性疾病患者易并發(fā)，如AIDS、惡性腫瘤，嚴重糖尿病、SLE等患者易發(fā)生。,流行性乙型腦炎：是一種人獸共患的自然疫源性疾病。傳染源為患者和家禽、家畜及野生動物，蚊蟲為傳播媒介，經(jīng)蚊蟲叮咬、吸血而傳播，人群對本病普遍易感，感染后多數(shù)人無癥

11、狀而成為隱性感染。但可獲得持久免疫力，再次發(fā)病者極少見。少數(shù)患者病情嚴重，病死率高，可留有后遺癥。,腸道病毒對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性已逐漸引起人們的關(guān)注和重視。除原有脊髓灰質(zhì)炎常見外，還可見多種病毒引起腦膜炎或腦炎，還不斷發(fā)現(xiàn)新的腸道病毒（新腸道病毒68～71型）引起的腦膜炎及腦炎。,第四節(jié) 膿 液,一、標本采集,先清洗，再采集。膿性標本是用針和注射器抽吸采集，如果沒有得到抽吸物，也可以用拭子在傷口深部采集滲出物。膿腫標本以

12、無菌注射器抽取為好，也可由排液法取得。厭氧菌感染的膿液常有腐臭應(yīng)予注意。特別要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接種前盡量避免接觸空氣。,二、膿液中常見病原體,三、臨床意義,由創(chuàng)傷、手術(shù)、侵入性器械操作等外科治療引起的感染最為常見。細菌造成傷口感染一般認為需每克組織內(nèi)細菌數(shù)量在105 ～106個以上。外傷性創(chuàng)傷感染以葡萄球菌和鏈球菌多見，且易發(fā)生混合感染。燒傷創(chuàng)面最常見革蘭陰性桿菌感染，如銅綠假單胞菌等，次為革蘭陽性球菌感染，可單

13、獨也可混合細菌感染。,急性化膿性骨關(guān)節(jié)炎常由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟菌、肺炎鏈球菌感染所致。放線菌感染可發(fā)生在免疫功能下降時或由于拔牙、口腔黏膜損傷時。,第五節(jié) 痰液,一、標本采集,自然咳痰法 以晨痰為佳，盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。用力咳出呼吸道深部的痰，將痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標本量應(yīng)≥1ml。,支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集

14、法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫(yī)生按相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。,小兒取痰法　 用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳痰時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。 注意：對可疑烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗標本時必須注意生物安全防

15、護。,二、痰標本中常見病原體,三、臨床意義,下呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，主要指肺實質(zhì)性炎癥的肺炎和支氣管黏膜炎癥的支氣管炎，是我國常見病和病死率高的感染性疾病。痰標本的細菌學(xué)檢查對呼吸道感染的診斷有重要意義。,,,,,病毒性肺炎,,真菌性肺炎,支原體肺炎,細菌性肺炎,第六節(jié) 糞便,一、標本采集,用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。外觀無異常的糞便應(yīng)從糞便的表面不同部位取材。液體便取絮狀物1～2ml,置無菌容器內(nèi)

16、送檢。如排便困難或嬰幼兒患者，可用直腸拭子法采集標本。,糞便標本送檢 對住院的腹瀉成人患者，應(yīng)采集住院3日內(nèi)糞便標本送檢，標本采集后應(yīng)盡快送檢，有條件的提倡使用運送培養(yǎng)基。,消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活檢標本，置入無菌生理鹽水中立即送檢，或?qū)吮痉庞谶\送培養(yǎng)基，于4℃保存，24h內(nèi)送檢。,二、糞便中常見的病原體,三、臨床意義,細菌性痢疾 （bacillary dyse

17、ntery） 簡稱菌痢，主要是指由志賀菌引起的腸道傳染病，是腸道感染性腹瀉最常見的病種。,細菌、真菌、病毒引起的胃腸炎 此癥最為常見，由多種病原體感染所致，臨床常表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、高熱等癥狀。胃腸炎的病毒感染常見于輪狀病毒等，常引起幼兒腹瀉。,細菌性食物中毒 常可危及生命，常見于沙門菌、副溶血弧菌

18、、致病性大腸埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、臘樣芽胞桿菌食物中毒。多發(fā)生在夏秋季，以暴發(fā)和集體發(fā)病為特征，是一種嚴重的病癥。,致病性大腸埃希菌的腸道感染 可分為5類，詳見第八章。消化性潰瘍幽門螺桿菌感染主要部位是胃及十二指腸球部，大量研究及臨床證明胃炎、消化性潰瘍主要是HP所引起，因此消化性潰瘍經(jīng)抗感染治療取得很好的療效。,第七節(jié) 尿液,一、標本采集,采集方法 采集清潔中段尿。必要時導(dǎo)尿或膀胱穿刺留尿標本，但要注意導(dǎo)尿

19、容易引起逆行性感染。,采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應(yīng)> 50 ml、盒蓋易于開啟，不含防腐劑和抑菌劑。標本采集后應(yīng)及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2小時（夏季保存時間應(yīng)適當縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時間不得超過8小時。但應(yīng)注意淋病奈瑟菌培養(yǎng)時標本不能冷藏保存。,二、常見病原體,尿液中常見病原體： 80%為革蘭陰性桿菌，其中以大腸埃希菌最為常見。

20、 20%為革蘭陽性菌，其中以腸球菌為多見。,三、臨床意義,尿路感染 urinary tract infection 是指大量微生物在尿路中生長繁殖而引起的尿路炎癥。 可分為上尿路感染（主要有腎盂腎炎）和下尿路感染（主要有膀胱炎和尿道炎）。 為最常見的感染性疾病，發(fā)病率約占人口的2%。多見于成年女性。,尿路感染主要經(jīng)尿道口上行感染所致，極少數(shù)為血

21、行感染。尿路感染常見腎盂腎炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性為主）、尿道炎（細菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常見）等。尿路感染需要明確部位和急性與慢性，主要依病原菌檢測，還要緊密結(jié)合臨床綜合考慮做出診斷。,,第八節(jié) 生殖道標本,一、標本采集,采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將無菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻轉(zhuǎn)拭子采集。 陰道分泌物采集時可用無菌棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后部，宮頸2～3cm

22、處，轉(zhuǎn)動并停留10～30s取分泌物。,淋球菌培養(yǎng)需保溫及時送檢，衣原體、支原體等培養(yǎng)無法及時送檢時應(yīng)4℃保存。,二、常見的病原體,生殖道標本主要用以檢查引起性傳播疾?。╯exually transmitted disease,STD）的病原體。性傳播疾病是指以性行為為主要傳播途徑的一組傳染病。STD有二十幾種，1991年8月我國衛(wèi)生部確認8種STD為重要防治與監(jiān)測的病種,8種STD分別是：艾滋病、淋病、梅毒、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、非

23、淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、生殖器皰疹。其病原體分別為：人類免疫缺陷病毒、淋病奈瑟菌、梅毒螺旋體、杜克雷嗜血桿菌、沙眼衣原體L1、L2、L3血清型、支原體和衣原體、人類乳頭狀病毒、人類單純皰疹病毒2。,第九節(jié) 厭氧培養(yǎng)標本的采集,一、 標本采集與運送,標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養(yǎng)能否成功至關(guān)重要。 注意： 標本不能被正常菌群所污染。 應(yīng)盡量避免接觸空氣。,標本的采集方法

24、 一般情況下，應(yīng)從無正常菌群寄居的部位采取標本。,不宜做厭氧菌培養(yǎng) ①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內(nèi)容物、肛拭；⑤接近皮膚和黏膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及黏膜層表面；⑦排出的尿或?qū)?；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物。,經(jīng)皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。采取標本時應(yīng)盡量避免接觸空氣，多使用針筒抽取，減少標本與空氣接觸的機會。,二、臨床常見的厭氧菌,厭氧菌（anaer

25、obic bacteria） 是指一大群在有氧條件下不能生長，必須在無氧條件下才能生長的細菌。,厭氧菌分為兩大類：一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞的革蘭陽性及革蘭陰性的桿菌與球菌。根據(jù)革蘭染色性、形態(tài)、鞭毛、芽胞、莢膜和代謝產(chǎn)物等可將無芽胞厭氧菌分成40多個菌屬，300多個菌種和亞種；有芽胞厭氧菌只有一個菌屬，即梭菌屬，共130個種。,重要的厭氧菌種類及其在正常人體內(nèi)的分布,注. 0：無或很少； +：

26、常有； ++： 大量； ±：不規(guī)則；,,厭氧菌廣泛分布于自然界和人體中。除梭狀芽胞桿菌能以芽胞的形式在自然界中長期存活外，其他絕大多數(shù)無芽胞厭氧菌均存在于人和動物體內(nèi)。在人體正常菌群中，厭氧菌占有絕對優(yōu)勢。,三、臨床意義,正常情況下，厭氧菌同需氧菌及兼性厭氧菌之間保持著微生態(tài)的動態(tài)平衡。如長期使用廣譜抗生素、激素、免疫抑制劑等，在發(fā)生菌群失調(diào)、機體免疫力下降或細菌進入非正常寄居部位時，這些厭氧菌即可作為條件致病菌導(dǎo)致

27、內(nèi)源性感染。,厭氧菌分布十分廣泛，是體內(nèi)正常菌群的組成成員，多為條件致病菌；厭氧菌的感染遍及臨床各科，且多為混合感染；厭氧菌對常用的氨基糖甙類抗生素耐藥，而對甲硝唑普遍敏感。,（一） 厭氧菌感染的條件,在正常情況下，人體組織的氧化還原電勢（Eh）可阻止厭氧菌的繁殖。組織缺氧或氧化還原電勢降低均可造成厭氧菌生長繁殖的適宜環(huán)境，易于遭受厭氧菌感染。,機體免疫功能下降，易并發(fā)厭氧菌感染。如接受免疫抑制劑、抗代謝藥物、放射治療、化學(xué)藥物治療的

28、患者，其全身免疫功能受損，厭氧菌感染率相當高。,一旦厭氧菌進入適合其生長繁殖的感染部位，即可進行繁殖和損傷組織，由壞死組織吸收余氧，進而降低Eh，更有利其大量繁殖，產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶、酸類、氣體及其他毒性產(chǎn)物，造成組織進一步損傷、壞死和全身中毒。,（二） 厭氧菌感染的臨床特征 凡有下列情況者應(yīng)懷疑厭氧菌感染：,感染組織局部產(chǎn)生大量氣體 某些厭氧菌可產(chǎn)生大量氣體，造成組織腫脹和壞死，皮下有捻發(fā)音，通常

29、是產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的特征。,感染部位多發(fā)生在黏膜附近 口腔、腸道、鼻咽腔、陰道等黏膜，均有大量厭氧菌寄生，這些部位及其附近有破損，極易發(fā)生厭氧菌感染。,深部外傷如槍傷后，人或動物咬傷后的繼發(fā)感染，均可能是厭氧菌感染。,分泌物有惡臭，或為暗血紅色，并在紫外光下發(fā)出紅色熒光，均可能是厭氧菌感染。發(fā)紅色熒光的分泌物，可能有產(chǎn)黑色素普魯沃菌和不解糖紫單胞菌；分泌物或膿汁中有硫磺顆粒，為放線菌感染。,長期應(yīng)用氨基糖甙類抗生素治療無效的病例、

30、新近有流產(chǎn)史者，以及胃腸手術(shù)后發(fā)生的感染，均有可能是厭氧菌感染。,分泌物涂片經(jīng)革蘭染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)有細菌，而常規(guī)培養(yǎng)陰性者；或在液體及半固體培養(yǎng)基深部長的細菌，均可能為厭氧菌感染。,小結(jié),血液、腦脊液為無菌性體液，采集標本時要注意無菌采集，血液標本還要注意采集的時間和采血量，若排除污染只要有細菌生長即視為致病菌；有菌部位的標本如痰液、糞便等應(yīng)了解該部位常見的正常菌群，采集標本時盡量避免污染，對于分離的細菌應(yīng)結(jié)合臨床進行分析；尿液標本因