微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目性能驗(yàn)證ppt課件

1、微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目性能驗(yàn)證,1,Com.30550：Instrument/Equipment Performance Verification The performance of all instruments and equipment is verified upon installation and after major maintenance or service to ensure that they run accordi

2、ng to expectations.2015/07/28儀器/設(shè)備性能驗(yàn)證所有儀器和設(shè)備在安裝后以及重要維護(hù)保養(yǎng)服務(wù)后應(yīng)進(jìn)行性能驗(yàn)證，以確保其可以按照預(yù)期運(yùn)行。NOTE：Performance verification is necessary after repairs or replacement of critical components of an instrument or item of equipment.

3、維修或更換儀器，或者更換儀器關(guān)鍵部件后必須進(jìn)行性能驗(yàn)證,Why？,2,CNAS-CL042：5.5.1.2:新的鑒定系統(tǒng)使用前，應(yīng)查閱已發(fā)表的完整、科學(xué)的系統(tǒng)評估文獻(xiàn)作為性能驗(yàn)證 的初級證據(jù)，再按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株對商業(yè)鑒定 系統(tǒng)（包括自動、半自動、手工）每種板（條/卡/管）的鑒定/藥敏結(jié)果的符合性進(jìn)行 驗(yàn)證。CNAS-CL042：5.3.1.5如果設(shè)備故障影響了方法學(xué)性能，在設(shè)備修復(fù)、校準(zhǔn)后，實(shí)驗(yàn)室

4、可通過檢測質(zhì)控 菌株或已知結(jié)果的樣品的方式進(jìn)行性能驗(yàn)證。,why,3,CNAS-GL41：臨床微生物檢驗(yàn)程序驗(yàn)證指南，在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗(yàn)程序進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)者獲得相關(guān)信息，以確定檢驗(yàn)程序的性能特征。 2016/5/30,why,4,微生物檢驗(yàn)程序包括：顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)和鑒定、藥物敏感試驗(yàn)，血清學(xué)檢查，抗原檢查等各項(xiàng)檢驗(yàn)活動，,,5,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)分析類型和用途進(jìn)行驗(yàn)證程序的

5、設(shè)計(jì)、驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、建立新檢驗(yàn)程序的可接受性能標(biāo)準(zhǔn)。驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)證明該檢驗(yàn)程序可用于檢測或準(zhǔn)確分析待測物的特點(diǎn)，通常驗(yàn)證計(jì)劃和可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在驗(yàn)證開始前確定。,CNAS-GL41:4.2,6,驗(yàn)證計(jì)劃和可接受標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)與該分析物相關(guān)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)/權(quán)威出版物等保持一致。定義可接受標(biāo)準(zhǔn)的方法之一是根據(jù)醫(yī)學(xué)和臨床要求確定總允許誤差，但通常應(yīng)用于定量檢測。定性檢測的可接受標(biāo)準(zhǔn)可以用一致性（符合率）表達(dá)。,,CNAS-GL41:4.2,

6、7,檢驗(yàn)程序驗(yàn)證所使用的標(biāo)本應(yīng)為合格的臨床標(biāo)本或從回顧性/前瞻性臨床標(biāo)本中分離的菌株。標(biāo)本的采集應(yīng)符合國家、地區(qū)法規(guī)要求。已通過一種或多種方式確定性能的標(biāo)準(zhǔn)菌株或質(zhì)控品（如國家或地方臨床檢驗(yàn)中心使用過的質(zhì)控菌株）也適用。,標(biāo)本,CNAS-GL41:4.2,8,顯微鏡檢查,CNAS-GL41:4.3,9,涂片制備染色鏡檢 染色方法包括手工染片和自動化儀器染片結(jié)果報告應(yīng)在檢驗(yàn)項(xiàng)目開展前進(jìn)行性能驗(yàn)證，并由有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員操

7、作所有樣品及容器應(yīng)當(dāng)作具有傳染性的物質(zhì)，應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全要求進(jìn)行操作。,顯微鏡檢查,CNAS-GL41:4.3,10,包括能力驗(yàn)證/實(shí)驗(yàn)室間比對，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人員比對,實(shí)驗(yàn)室如果開展手工染片和自動化染片，應(yīng)該對兩種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.3,11,樣品數(shù)量1.每項(xiàng)檢查至少5份樣本2.需覆蓋全部樣本類型3.無菌樣本類型應(yīng)包含陽性和陰性結(jié)果4.應(yīng)優(yōu)先選擇使用已知結(jié)果的留樣 樣本，不可獲取時采用模

8、擬樣本,比對方案,CNAS-GL41:4.3,12,按照臨床標(biāo)本常用檢驗(yàn)方式處理，由工作人員進(jìn)行操作進(jìn)行手工染片和自動化儀器染片時涂片需同時制備兩份進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對和能力驗(yàn)證時，需由當(dāng)日在崗人員進(jìn)行涂片，染色，鏡檢，結(jié)果報告進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人員比對時，由本崗位人員負(fù)責(zé)制片，染色，所有從事顯微鏡檢查的人員 進(jìn)行鏡檢，結(jié)果報告，由專人進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)。,比對方案,CNAS-GL41:4.3,13,結(jié)果報告 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室程序文件規(guī)定進(jìn)行結(jié)果報告

9、?？顾崛旧凑找筮M(jìn)行分級報告?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)每項(xiàng)檢查結(jié)果符合率≥80%。,比對方案,CNAS-GL41:4.3,14,,15,一般培養(yǎng)（非血液標(biāo)本）,CNAS-GL41:4.4.2,16,一般培養(yǎng)包括各類標(biāo)本的細(xì)菌、真菌、支原體的培養(yǎng)。標(biāo)本類型包括痰液、尿液、糞便、分泌物、組織等細(xì)菌包括厭氧菌和分枝桿菌等培養(yǎng)程序包括標(biāo)本處理、接種、培養(yǎng)基選擇、培養(yǎng)條件選擇等,一般培養(yǎng),CNAS-GL41:4.4.2,17,每項(xiàng)檢查，每種樣本至少

10、1份標(biāo)本無論商品化培養(yǎng)基還是自配培養(yǎng)基，都需要在使用前對培養(yǎng)基性能進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證菌株可選擇質(zhì)控菌株或臨床菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株、能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評活動使用的菌株、從臨床病人標(biāo)本分離的具有穩(wěn)定表型的菌株均可用做驗(yàn)證菌株，實(shí)驗(yàn)室對其生化特征及鑒定結(jié)果應(yīng)做好相關(guān)記錄。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.4.2,18,直接接種法按照實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌分離培養(yǎng)的SOP，將待測標(biāo)本接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基上，觀察菌落生長情況。 注意：在直接接種法驗(yàn)證不合格的情況

11、下要采用標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液進(jìn)行驗(yàn)證。,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.4.2,19,標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液法1.菌懸液制備1）直接菌落法：挑取培養(yǎng)18-24h的菌落，在生理鹽水中制備成0.5Mcf的菌懸液2）生長法：從培養(yǎng)24h的培養(yǎng)物中挑取3-5個菌落至無菌肉湯中，孵育數(shù)小時使其達(dá)到0.5Mcf,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.4.2,20,標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液法2.接種1）驗(yàn)證非選擇培養(yǎng)基 用無菌肉湯或生理鹽水將配置好的菌懸液進(jìn)行

12、1:100稀釋，每個平板接種10uL，均勻涂布接種。如生長過密則進(jìn)行1:1000稀釋2）驗(yàn)證選擇性培養(yǎng)基 用無菌肉湯或生理鹽水將配置好的菌懸液進(jìn)行1:10稀釋，每個平板接種10uL，均勻涂布接種。如生長過密則進(jìn)行1:100稀釋3）驗(yàn)證培養(yǎng)管 用10uL未經(jīng)稀釋的菌懸液進(jìn)行接種。,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.4.2,21,在選擇性培養(yǎng)基上驗(yàn)證菌株長勢良好、菌落大小與預(yù)期相符、菌落形態(tài)典 型，并且能夠抑制特定

13、微生物的生長，可判定性能符合要求，驗(yàn)證合格。 在非選擇性培養(yǎng)基上驗(yàn)證菌株長勢良好、菌落大小與預(yù)期相符、菌落形態(tài)典 型，血培養(yǎng)基上的溶血類型符合，可判定非選擇性培養(yǎng)基驗(yàn)證合格。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.4.2,22,血培養(yǎng),CNAS-GL41:4.4.1,23,臨床微生物室血培養(yǎng)系統(tǒng)驗(yàn)證的目的是評估系統(tǒng)使用的培養(yǎng)基能否用于培養(yǎng)臨床常見微生物，以及儀器是否能及時檢測出血液中大部分的微生物。,CNAS-GL41:4.4.1,24

14、,血培養(yǎng)性能驗(yàn)證常用留樣驗(yàn)證和血培養(yǎng)系統(tǒng)平行比對兩種方法。本實(shí)驗(yàn)室采用的是留樣驗(yàn)證的方法，操作過程參照《XJ-SOP-006細(xì)菌室檢驗(yàn)項(xiàng)目性能驗(yàn)證》,,CNAS-GL41:4.4.1,25,驗(yàn)證應(yīng)覆蓋臨床常見微生物需氧成人/兒童血培養(yǎng)瓶驗(yàn)證菌株應(yīng)包括:需氧/兼性 厭氧革蘭陽性菌、需氧/兼性厭氧革蘭陰性菌、苛養(yǎng)菌（如：流感嗜血桿菌、肺炎鏈球 菌等）和真菌，厭氧血培養(yǎng)瓶驗(yàn)證菌株應(yīng)包括兼性厭氧革蘭陽性菌、兼性厭氧革蘭陰 性菌、專性厭氧菌

15、，其他特殊用途血培養(yǎng)瓶參照廠家要求選擇合適類型菌株進(jìn)行驗(yàn) 證。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.4.1,26,每種類型至少１株，總體不少于 15 株。應(yīng)盡可能使用真實(shí)患者的臨床分離菌株 （性能驗(yàn)證用臨床留樣菌株宜經(jīng)質(zhì)譜或 DNA 序列分析確認(rèn)）。對于特殊、苛養(yǎng)菌可使 用標(biāo)準(zhǔn)菌株或質(zhì)控菌株。某些特殊菌株需要在培養(yǎng)瓶中加入無菌、未使用抗生素的廠 家推薦血液標(biāo)本，如不加可能不生長，如流感嗜血桿菌。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.4.

16、1,27,模擬臨床血流感染患者的細(xì)菌含量。若苛養(yǎng)菌需添加適量的新鮮無菌血液（成人瓶 5-10ml，兒童瓶 1-3ml）后置于血培養(yǎng)系統(tǒng)上進(jìn)行培養(yǎng)、檢測。,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.4.1,28,挑取培養(yǎng)18-24h的新鮮培養(yǎng)物，在生理鹽水中調(diào)整為0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，然后倍比稀釋。如圖所示,驗(yàn)證方案,0.5Mcf~108CFU/ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,~106CFU/ml,~104CFU/ml,~102C

17、FU/ml,0.5ml,#4~10CFU/ml,29,從#4號試管里取3ml菌懸液注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，同時取1ml菌懸液在平板上進(jìn)行涂布接種，確認(rèn)接種數(shù)量。將接種好的血培養(yǎng)瓶放入儀器進(jìn)行監(jiān)測，待陽性報警后移種平板，涂片染色，確認(rèn)是否為接種菌,驗(yàn)證方案,30,在廠家說明書規(guī)定時間內(nèi)檢測出所有菌株則該方法通過驗(yàn)證。 3 天時間應(yīng)足以 檢測出至少 95%的臨床相關(guān)細(xì)菌，須具備苛養(yǎng)菌、真菌、厭氧菌等的檢出能力。若未能 檢出應(yīng)使用相同菌株

18、進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)來驗(yàn)證。若仍不能檢測，實(shí)驗(yàn)室和/或制造商應(yīng)在臨 床使用該系統(tǒng)前采取糾正措施。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.4.1,31,如果血培養(yǎng)儀升級，原系統(tǒng)和新系統(tǒng)的差別不大，使用的培養(yǎng)瓶也沒有改變，那么由供應(yīng)商技術(shù)代表核查儀器性能即可，無需再次驗(yàn)證。功能核 查將對孵育系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)以及軟件是否按照制造商規(guī)定運(yùn)行進(jìn)行評價。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.4.1,32,,33,,,34,微生物鑒定試驗(yàn),CNAS-GL41:4

19、.5,35,按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株，試驗(yàn)應(yīng)覆蓋實(shí)驗(yàn)室使 用的全部卡片種類和/或方法。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.5,36,菌株種類的選擇：首先參照廠商說明書，覆蓋革蘭陽性和革蘭陰性非苛養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌、 厭氧菌、念珠菌、隱球菌等。包括臨床留樣菌株和標(biāo)準(zhǔn)/質(zhì)控菌株。每種類型應(yīng)至少 1 株，總體不少于 20 株。參照實(shí)驗(yàn)室SOP規(guī)定對驗(yàn)證菌株進(jìn)行檢測，一 般要求鑒定至種水平。對于特殊類型的微生物（如棒狀桿

20、菌、厭氧菌，芽孢桿菌），可將鑒定到屬的水平作為可以接受的性能標(biāo)準(zhǔn)。,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.5,37,標(biāo)準(zhǔn)/質(zhì)控菌株符合率應(yīng)為 100%，臨床菌株的符合率應(yīng)在 90％以上。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.5,38,本實(shí)驗(yàn)室采用了連續(xù)20天檢測待測菌株的方法進(jìn)行了鑒定儀的性能驗(yàn)證試驗(yàn)。一共選取了26株細(xì)菌和真菌，參照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程《XJ-SOP-503 VITEK2 Compact標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》連續(xù)測試20天。GP、GN

21、：如果失控的生化鑒定項(xiàng)目≤3個，可認(rèn)為性能好可接受；如果質(zhì)控檢測結(jié)果和目標(biāo)反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)誤差大于3個，必須立即進(jìn)行查誤步驟，如誤差無法解決，則聯(lián)系生物梅里埃/委托代理的技術(shù)代表。,,39,,40,,41,血清學(xué)檢查,CNAS-GL41:4.5.2,42,血清學(xué)鑒定試驗(yàn)包括沙門菌/志賀菌/致病大腸桿菌/弧菌等的血清學(xué)分型。,,CNAS-GL41:4.5.2,43,沙門菌至少包括傷寒沙門菌/甲型副傷寒沙門菌/乙型副傷寒沙門菌/丙型副傷寒 沙門

22、菌；志賀菌包括福氏志賀菌、宋內(nèi)志賀菌、痢疾志賀菌和鮑氏志賀菌四種；致病大腸桿菌/弧菌等根據(jù)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政管理和實(shí)驗(yàn)室情況進(jìn)行選擇?；魜y弧菌每年由杭州市疾控中心進(jìn)行檢測驗(yàn)證。優(yōu)先選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株和 質(zhì)控菌株，也可使用實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)過的留樣臨床分離株,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.5.2,44,參照實(shí)驗(yàn)室相關(guān)SOP進(jìn)行《XJ-SOP-409沙門菌屬、志賀菌屬檢驗(yàn)》《XJ-SOP-410O1群、O139群霍亂弧菌檢驗(yàn)》,驗(yàn)證方案,45,要求準(zhǔn)

23、確率 100%。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.5.2,46,抗菌藥物敏感性試驗(yàn),CNAS-GL41:4.7,47,抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（藥敏試驗(yàn)）可分為紙片法和最低抑菌濃度法（MIC 法）。,,CNAS-GL41:4.7,48,藥敏試驗(yàn)方法的評估宜既保證藥敏試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，也要確保耐藥菌株的檢出靈敏性。藥敏卡的選擇應(yīng)遵循生產(chǎn)廠家 說明書要求，不應(yīng)超范圍使用。藥敏試驗(yàn)性能驗(yàn)證可使用藥敏質(zhì)控菌株。,驗(yàn)證要求,CNAS-GL41:4.

24、7,49,參考 CLSI 細(xì)菌、真菌相關(guān)藥敏試驗(yàn)操作及判斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇藥敏質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株和藥 物。連續(xù)檢測 20－30 天，每一組藥物/細(xì)菌的抑菌圈直徑或最低抑菌濃度（MIC）超出 參考范圍的頻率應(yīng)不超過（≤）1/20 或 3/30；也可采用替代質(zhì)控方案，即連續(xù) 5 天， 每天對每一組藥物/細(xì)菌重復(fù)測定 3 次，每次單獨(dú)制備接種物，15 個數(shù)據(jù)中超出參考范 圍（抑菌圈直徑或 MIC）的結(jié)果應(yīng)不超過（≤）1 個，若失控結(jié)果為 2-3 個，

25、則如前述， 再進(jìn)行 5 天，每天 3 次重復(fù)試驗(yàn)，30 個數(shù)據(jù)失控結(jié)果應(yīng)不超過（≤）3 個。,驗(yàn)證方案,CNAS-GL41:4.7,50,連續(xù)MIC法應(yīng)計(jì)算基本符合率（EA，essential agreement）：用于連續(xù)MIC法，AST設(shè)備得到的MIC結(jié)果與參考方法確定的MIC結(jié)果（或已知確認(rèn)結(jié)果）相差在正負(fù)一個倍比稀釋度內(nèi)的符合率。,性能指標(biāo),EA=,實(shí)驗(yàn)MIC在已知參考MIC的1個倍比稀釋度內(nèi)的試驗(yàn)數(shù),測試總數(shù),×10

26、0%,51,分類符合率（CA，category agreement）：用于非連續(xù)MIC法和紙片法，驗(yàn)證的藥敏試驗(yàn)方法與參考方法或已確認(rèn)結(jié)果間S/I/R判斷的一致性。,性能指標(biāo),CA=,藥敏分類結(jié)果一致的試驗(yàn)數(shù),測試的總數(shù),×100%,52,在新的藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)應(yīng)用于臨床前，須滿足上述質(zhì)控要求，通過后在日常檢測中 轉(zhuǎn)為室內(nèi)控制要求。應(yīng)對較大和重大偏差進(jìn)行分析，以確定特定細(xì)菌結(jié)果是否受影響 并要求限制該細(xì)菌和特定抗菌藥物在該設(shè)備的使

27、用。,可接受標(biāo)準(zhǔn),CNAS-GL41:4.7,53,,54,,,總實(shí)驗(yàn)數(shù)=1440Essential error=121SIR error=4,55,紙片法藥敏試驗(yàn) 驗(yàn)證選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株，采用替代質(zhì)控方案進(jìn)行，即連續(xù)5天，每天對每一組藥物/細(xì)菌重復(fù)測定3次，每次單獨(dú)制備接種物，15個數(shù)據(jù)超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的結(jié)果應(yīng)不超過（≤）1個，若失控結(jié)果為2-3個，則如前述，再進(jìn)行5天，每天3次重復(fù)試驗(yàn)，30個數(shù)據(jù)失控結(jié)果