血清清蛋白、γ-球蛋白的分離、提純與鑒定

1、血清清蛋白、血清清蛋白、γ球蛋白的分離、提純與鑒定球蛋白的分離、提純與鑒定一、實驗目的一、實驗目的1.掌握鹽析法、凝膠層析法、離子交換層析法分離蛋白質的原理和基本方法；2.掌握醋酸纖維素薄膜電泳法的原理和基本方法；3.了解柱層析技術。二、實驗原理二、實驗原理血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白組成，各行使其重要的功能。本實驗利用鹽析方法將血清中的清蛋白和球蛋白分離，并用電泳技術觀察蛋白質分離教果。1鹽析蛋白質分子能穩(wěn)定存在于水溶液中是因為有兩個

2、穩(wěn)定因素：表面的電荷和水化膜。當維持蛋白質的穩(wěn)定因素破壞時，蛋白質分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白質分子沉淀析出的方法很多，根據對蛋白質穩(wěn)定因素破壞的不同有中性鹽析法、有機溶溶劑法、重金屬鹽法以及生物堿試劑法等。鹽析法的原理是：中性鹽如硫酸銨((NH４)２SO4)等對蛋白質作用破壞了蛋白質表面水化膜，并且中和了部分電荷，從而使蛋白質相互聚集而析出。由于血清中各種蛋白質分子的顆粒大小、所帶電荷的多少和親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不同，

3、因此調節(jié)鹽的濃度可使不同的蛋白質沉淀從而達到分離的目的。血清球蛋白在半飽和狀態(tài)下發(fā)生沉淀，而血清清蛋白在完全飽和狀態(tài)下沉淀，利用此特性可把蛋白質分段沉淀下來，即在半飽和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀，離心后清蛋白主要在上清液中，沉淀蛋白加少量蒸餾水即可溶解，由此達到分離清蛋白和白蛋白的目的。2脫鹽鹽析得到的蛋白質含有高濃度中性鹽，需要有脫鹽過程去除蛋白質遺留的中性鹽，酸銨緩沖液、0.02moll的PH6.5醋酸銨緩沖液、1.5mo

4、ll的NaCl0.3molNH4AC溶液、20%磺基水楊酸、1%BaCl2溶液、電泳儀、電泳槽。2.實驗方法1)實驗流程2)實驗步驟1鹽析：中性鹽沉淀步驟步驟操作（1）鹽析取離心管一個，加入0.8mol人或動物血清，邊搖邊緩慢滴入飽和硫酸銨溶液0.8ml，混勻后室溫下放置10min，離心10min（4000rmin）。用滴管小心吸出上清液置于試管中，作為純化清蛋白之用（2）溶解沉淀向離心管的沉淀加入0.6mol蒸餾水，振搖使之溶解，作為