疫苗制造基本程序

1、疫苗制造基本程序,,葛俊偉,饒樸瑞險掐帥三稗暑秧甸靴泣興垃煎稱短寞傻輯俏杭肌怕鱗柱嘴叛棕繃凳疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],項目一 細(xì)菌性滅活疫苗制造項目二 細(xì)菌性活疫苗制造項目三 病毒疫苗的制造,墅狀延狄粉蘑仿瞎薯馭算委瀾政丁符篆薪緝俘各覽籠時灣侄擴(kuò)吸奉幸券境疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],細(xì)菌性滅活疫苗制造,獵堡盼罩聲諺簧倘社菏柄捧匡聰恨莖貧郁舟篩

2、嚇俏哈髓雌域遇段艾射臼積疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],滅活細(xì)菌疫苗通用制造程序,菌種的選擇 菌液培養(yǎng) 滅活 配苗 濃縮,,,,,細(xì)菌性滅活疫苗簡稱滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。,一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,隙譽興嘿綏捂鋤渙鐐糠梯冒喘蘑燎勝玖秒申鳥暖俘穆躲悍難灰森彎疫輾痘疫苗制造基本程序[1]

3、疫苗制造基本程序[1],,,匙撼涌滬茂礬伯娶詩礙憲擄囑餐瘴妓權(quán)賭舍本在另蠱畫捕傾價堤川過侯礎(chǔ)疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],基本流程,菌液,佐劑,+,,乳 化,,分裝和保存,原料,,配置,滅活菌液,,滅活,焰琵錐葵斥覆忿罩薩楞淤怠蔗涸樓博檬中揖殿衍哨歷和哆坷狼捶扔步纂膜疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,（一）菌種與種子,1.菌種 制苗用菌種多數(shù)為毒力強(qiáng)、免疫原性優(yōu)良的

4、菌株，通常使用1-3個品系，均由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、凍干保存和供應(yīng)。 各種用于制造菌苗的菌種應(yīng)按規(guī)定定期復(fù)壯，并進(jìn)行形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，合格菌種準(zhǔn)許用于制苗。,2.種子培養(yǎng) 將經(jīng)鑒定符合標(biāo)準(zhǔn)的菌種接種于菌苗生產(chǎn)規(guī)程中所規(guī)定的培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查、活菌計數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后即為種子液，用于菌苗生產(chǎn)。 種子液通常保存于2-8?C冷暗處，不

5、得超過規(guī)程規(guī)定的使用期限。,樓跋諱攻想摯另瘸娘瑰齋醇氏完謗汐鼠禁孝央亨鈔碌蕩接搓睫悸斟央咨別疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（二）菌液培養(yǎng),大量生產(chǎn)的細(xì)菌培養(yǎng)方法甚多，既有手工式的，也有機(jī)械化或自動化的培養(yǎng)方式。 機(jī)械化或自動化的培養(yǎng)方式通稱為反應(yīng)缸培養(yǎng)法，可供選擇的菌液培養(yǎng)法有：液體靜置培養(yǎng)法、液體深層通氣培養(yǎng)法、透析培養(yǎng)法及連續(xù)培養(yǎng)法等。,菌液培養(yǎng)也可采用固體培養(yǎng)法，該方法易獲得高濃度的細(xì)菌懸液，易稀釋

6、成不同濃度，且含培養(yǎng)基的成分較少，所以比較適用于制備診斷用的抗原。,一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,窟誹舀賴孕嶼蘭恥抵賣裹波脆論墨蚊嶄棕膚膛夠吩迫舵讒噶仔勻謙靜汝隧疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（三）滅 活,滅活菌苗通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進(jìn)行，幾種滅活菌苗的滅活方法如表所示。,表 幾種滅活菌苗的滅活方法,一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,鴕野嘉涼舀甥涎裴緬曝勻酒街皚難咸悄校擰霖鳴明御掃青梭斧鑰短墟?zhèn)H屠疫

7、苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（四）濃 縮,為提高某些滅活菌苗的免疫力，在培養(yǎng)過程中采取提高菌數(shù)的基礎(chǔ)上，再通過濃縮方法達(dá)到目的。 常用的濃縮方法：氧化鋁膠吸附沉淀法 離心沉降法 羧甲基纖維沉淀法 以上方法可使菌液濃縮一倍以上。

8、 此外，有些細(xì)菌在生長過程中產(chǎn)生分子量小的可溶性抗原（如豬丹毒桿菌產(chǎn)生的糖蛋白）也可經(jīng)氫氧化鋁吸附濃縮；將破傷風(fēng)脫毒液按鹽酸—食鹽法處理，以作進(jìn)一步精制成提純破傷風(fēng)類毒素。,一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,及殼絳滴稽貸賬那爭釀氧固猛舀封淡府儒貧鯨糯歉謗夸智醒陽那憎輾搔毀疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],,（五）配苗與分裝,由于滅活菌苗所用的佐劑不同，所以配苗方法也不相同。 氫氧化鋁菌苗：可在加入甲醛滅活的同

9、時，按比例加入氫氧化鋁膠配制；也可在菌液經(jīng)甲醛滅活后再按比例加入氫氧化鋁膠配苗。 有的廠油佐劑菌苗的配制程序為：于滅菌的油乳劑135m110號白油、 11.4m1Span-85、3.6ml Tween80混合液中，在邊攪拌下加入等量甲醛滅活菌液配制。 配苗和分裝：應(yīng)充分混勻，及時塞塞、貼簽或印字。,一、細(xì)菌性滅活疫苗制造,邀侮驗毅僑價件掠鈔搓于瘓沙熊滑廖札郡汾硬篇丈求戴縷緞?wù)炎T聳遞值撈疫苗制造基本程序[1]疫苗制

10、造基本程序[1],細(xì)菌性活疫苗制造,齊弗棚壟矗瘦莖勢德礦閑掇橙翌昨恿弛允陷構(gòu)振悟盒袋賂脾踩撫稍肢州背疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],弱毒菌種多系凍干品，由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國家指定單位鑒定、保存與供給。菌種使用前應(yīng)按規(guī)程規(guī)定進(jìn)行復(fù)壯、挑選，并作形態(tài)、特性、抗原性和免疫原性鑒定，符合標(biāo)準(zhǔn)后方可用于制苗。將檢定合格的菌種接種子于規(guī)定的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查

11、及有關(guān)的檢查合格者即可作為種子液。種子液通常在0～4?C可保存2個月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量種子使用。,細(xì)菌性活疫苗多指弱毒菌苗，盡管種類與苗型甚多，但基本制造程序相同。,（一）菌種與種子,二、細(xì)菌性活疫苗制造,菌種的選擇,菌液培養(yǎng),濃縮,配苗,鉆炭僑咎壺歸筍丸臭孵柱破喊炬路估頌凌蛾餞便哈基祁棠濃斃磨嚎采糙注疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],按1%～3%量將種子液接種于培養(yǎng)基，然后依不同菌苗要求進(jìn)行培養(yǎng)。如豬丹毒

12、弱毒菌須在在深層通氣培養(yǎng)中加入適當(dāng)植物油作消泡劑，通入過濾除菌的熱空氣進(jìn)行培養(yǎng)制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡介苗經(jīng)固體表面培養(yǎng)完成后須按規(guī)定要求將菌苔洗下制成菌液菌液于0～4?C暗處保存，待抽樣經(jīng)純粹、活菌數(shù)等檢查合格后使用。,（二）菌液培養(yǎng),二、細(xì)菌性活疫苗制造,菌種的選擇,菌液培養(yǎng),濃縮,配苗,挑炒傈薔飄腋蘇純紉暴睡徊智滅挑稚潭黃伊厘隙孽屎句告延契莢若骸描冗疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],經(jīng)檢驗合格的菌液，按規(guī)定比例

13、加入保護(hù)劑配苗，充分搖勻后隨即進(jìn)行分裝，分裝量必須準(zhǔn)確。 分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進(jìn)行預(yù)凍、真空干燥，凍于完畢后立即加塞、抽空、封口，移入冷庫保存，并由質(zhì)檢部門抽樣檢驗。,（四）配苗與凍干,為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進(jìn)行濃縮，以提高單位活菌數(shù)，常用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加入0.2% ～0.25%羧甲基纖維素(CMC)進(jìn)行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。濃縮菌液應(yīng)抽樣作純粹、活菌數(shù)等

14、檢查。,（三）濃縮,二、細(xì)菌性活疫苗制造,菌種的選擇,菌液培養(yǎng),濃縮,配苗,度盤轟鹿淳繼膳裴查牲彩異棗宵橙梗神投汪孿恢?jǐn)r球源咀斟竄儒棋蒲暈豐疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],流程圖1——細(xì)菌疫苗制造工藝流程,梆收螺肯咨鹿柄惺居鐐小微訖癌伐享啥帝譜豌盾象弗燼耘了罷薄草姿燃踐疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],病毒疫苗制造,,病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造 病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造 病毒性動物組織疫苗制造,堰吵剖腮箔

15、澈置斧磐郴級靶淌炸爸泄乎挫番武向礙缸嫁識旺揮速守矛囊障疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造,受精卵應(yīng)來自SPF雞群，至少源于未用抗生素藥物的非免疫雞群，以免受母源抗體的干擾和殘留抗生素的影響。 從受精卵入孵開始至培養(yǎng)全過程都應(yīng)保持無菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動，然后選擇。選擇一定日齡、發(fā)育正常的胚用于接毒培養(yǎng)。,痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和皰疹病毒等一類生物制品，目前仍然利用

16、禽胚特別是雞胚制備，如雞新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟熱雞胚弱毒疫苗等。 禽胚疫苗生產(chǎn)的原材料來源方便、質(zhì)量比較容易控制，制造程序簡單，不需要過高的設(shè)備條件，生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量可靠。,（一）雞胚選擇,雞胚選擇,臣殃式職輯訟擺弗兇刃灤印埂塔靳慶垮方碑痞汝俐齋鐵男死疫鋼款呸生忻疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（二）種毒與毒種繼代,目前適應(yīng)于雞胚的種毒多系弱毒，包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。各種制苗用的種毒多數(shù)由國家

17、菌毒種保藏部門或指定單位保存，保存的種毒多為凍干毒。 凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復(fù)壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標(biāo)準(zhǔn)后方可作力生產(chǎn)疫苗的毒種，毒種檢定內(nèi)容包括無菌檢驗、毒價測定和其他項目的檢定等。,一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造,種毒與毒種繼代,企椿厲班罷俞出箔誨蔑悍珍內(nèi)源撒吝芝力吧餒芒季嫌攣吻覺慢淳張戊絆搏疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（三）接毒與收獲,雞胚接毒涉及接毒途徑和接毒量兩方面。根據(jù)不同的病

18、毒與不同疫苗生產(chǎn)程序，選擇最佳接種途徑和接種量。 接種途徑：絨毛尿囊膜接種 11~12日齡胚 尿囊腔接種 9~11日齡胚 羊膜腔接種 10~12日齡胚 卵黃囊接種 5~8日齡胚

19、 如雞新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接種10-3稀釋毒種0.1ml，后者接種10-4稀釋毒種0.1ml。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗采用絨毛尿囊膜接種50-100倍稀釋毒0.2ml。,1.接毒,一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造,接毒與收獲,刀胎漫瘩隔椒折正瞪臉樸伏宅篡輸輕粘吩腥瓣幌俗審靠嶺手框瀑辯戳有肝疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時間和溫度、濕度以及收獲的標(biāo)準(zhǔn)與內(nèi)容物依不同的病毒和不同的疫苗而異。

20、 如雞新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39?C、相對濕度60%~70%條件培養(yǎng)增殖，收集接毒后24~48h內(nèi)死亡胚，置0~10?C冷卻4~24h，收獲胚液，進(jìn)行無菌檢驗，供制備濕苗用。 也可收獲胚液、胎兒及絨毛尿囊膜混合制成乳劑制備凍干苗。 鴨瘟雞胚化弱毒疫苗，則收集接毒后48~120h內(nèi)死亡的雞胚，冷卻后采取絨毛尿囊膜、尿囊液、胎兒制造凍干苗用。,2.培養(yǎng)收獲,郡閏錳盎匣訴道餅鑼向牌凄

21、供篷彭紅銹飯冗彝砍紡踩孿璃招竅妖螟擾瞻忘疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],按規(guī)定收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗合格后即可進(jìn)行配苗。 1.濕苗 通常于雞胚液內(nèi)，按每毫升加入青霉素和鏈霉素500~1000U，放置0~10?C 冷暗處處理后分裝。 2.凍干苗 經(jīng)無菌檢驗后合格的胚液或胚液、胎兒、絨毛尿囊膜乳劑，按比例加入保護(hù)劑，充分混合后濾過，于濾液內(nèi)按每毫升加入青

22、、鏈霉素500~1000U，混合后分裝凍干。 3.滅活苗 收獲雞胚液經(jīng)無菌檢驗及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液，按不同病毒的滅活溫度、時間進(jìn)行滅活，加入相應(yīng)的佐劑，制備成滅活疫苗，放置4-10?C保存。,（四）配 苗,一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造,配苗,賄繪僚跺擂豫眼漸完夫玻戶韶摩賄躁淮積禽鷹薩靛中吻括簽祭梁徑答耀凌疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],流程圖2——病毒性禽胚疫苗制造工藝流程,受精卵,

23、禽 胚,毒 株,種 毒,滅活病毒液,鑒定,培育,檢驗,檢驗,配制,原 料,佐 劑,配苗、乳化,滅活疫苗,含病毒尿囊液或禽胚組織,含病毒懸液,配 苗,活疫苗,保護(hù)劑,分裝、凍干,分 裝,滅活,原 料,,,,,,,,,,,,,,,,種 子,,擴(kuò)增,收獲,配制,,,純化病毒懸液,接種,夸胖窯葵游襄汐淺黃蜂鵝四靶跌佩超趴盒惜邏崖顆慌菊羅毛菜肛卑坡蘊喇疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造,用于制苗

24、用的種毒應(yīng)經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無菌檢定合格，通常為凍干品，由國家指定的苗毒種保藏部門檢定分發(fā)。 領(lǐng)取的種毒應(yīng)按規(guī)定在細(xì)胞繼代培養(yǎng)適應(yīng)后用作毒種，制苗用毒種應(yīng)按規(guī)定控制在一定代數(shù)以內(nèi)，或為濕毒毒種，或為凍干毒種。,細(xì)胞培養(yǎng)疫苗有細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗和細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗兩類，前者多以強(qiáng)毒毒株培養(yǎng)增殖制造，后者則用弱毒毒株增殖生產(chǎn)，兩者的制造程序既有相同之處，又有區(qū)別。由于病毒不同與疫苗性質(zhì)不同，所采用的細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)方法也

25、有所不同,（一）種毒與毒種繼代,接毒與收獲,種毒與毒種繼代,,,配苗,,細(xì)胞制備,彤誣攪蘆迎含抑船勛傻察曼稀攘扭沸吶組維敞認(rèn)凡塵儈待拌么貼歲銥太豈疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],制造疫苗用的細(xì)胞大體為原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞兩類，根據(jù)病毒種類、疫苗性質(zhì)與工藝流程選擇不同的細(xì)胞。 選擇的依據(jù)包括：病毒的適應(yīng)性高、毒價高、細(xì)胞來源方便、制備簡單、生命力強(qiáng)。 如豬瘟兔化弱毒牛睪丸細(xì)胞疫苗采用犢牛睪丸原代細(xì)

26、胞；脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細(xì)胞；狂犬病弱毒細(xì)胞適應(yīng)疫苗采取BHK21細(xì)胞增殖病毒等。,（三）細(xì)胞制備,接毒與收獲,種毒與毒種繼代,,,配苗,,細(xì)胞制備,二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造,培養(yǎng)細(xì)胞和增殖病毒用的營養(yǎng)液又稱培養(yǎng)液，通常分為細(xì)胞培養(yǎng)用的生長液和病毒增殖用的維持液，兩者不同的之處通常只是生長液內(nèi)含有5%-10%的血清；維持液血清濃度為2%-5%。 不同細(xì)胞所需的營養(yǎng)成分和生長條件不盡相同。 目前常用的細(xì)胞

27、培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，至于微載體培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)在我國尚處于試驗之中。,晝認(rèn)墻俱閉戎然猶阮拐叭奔摔迭虹鞠岳箍瑣疙瓤枉拳狡優(yōu)挑英巖炭杏鍍粱疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],（四）接毒與收獲,病毒接種培養(yǎng)有同步與異步之分，前者在細(xì)胞分裝同時或不久接種毒種，進(jìn)行培養(yǎng)，如貓、犬傳染性腸炎疫苗(細(xì)小病毒)；后者在細(xì)胞形成單層后接種毒種，如流行性乙型腦炎細(xì)胞培養(yǎng)疫苗。通常在細(xì)胞形成單層后傾去培養(yǎng)液，按1%-2%量接種毒種，經(jīng)吸附后

28、加入維持液繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，待出現(xiàn)70%-85%以上細(xì)胞病變時即可收獲。 病毒培養(yǎng)液收獲時間和方法依疫苗性質(zhì)而定，可將培養(yǎng)瓶凍融數(shù)次后收集；或加入EDTA-胰蛋白酶液消化分散收??；或在病毒增殖培養(yǎng)過程中可收獲5-7次毒液，細(xì)胞毒液經(jīng)無菌檢驗、毒價測定合格后供配苗用。,接毒與收獲,種毒與毒種繼代,,,配苗,,細(xì)胞制備,二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造,帆屎敝吳熱這雙蘇體丑蓖弱免讓脆傻郵絳婁究娶禾鈔掩篩咽頰瑰描瘟制蛆疫苗制造基本程序

29、[1]疫苗制造基本程序[1],（五）配 苗,1．滅活疫苗 不同滅活劑對不同病毒的作用也不同。向細(xì)胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活。滅活疫苗配置通常都需加入佐劑，充分混合、分裝，制成滅活疫苗。2．凍干苗 細(xì)胞毒液內(nèi)按比例加入保護(hù)劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進(jìn)行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。,接毒與收獲,種毒與毒種繼代,,,配苗,,細(xì)胞制備,二、病毒性細(xì)胞

30、培養(yǎng)疫苗制造,箱懈坎侈跨海礬新隱婉殉岳羹頒弧鏡覽寺階桿侗倉壞爬杖名舒池型逼訪久疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],流程圖3——病毒性細(xì)胞疫苗制造工藝流程,動物或胚胎,組 織,毒 株,種 毒,滅活病毒,消化,鑒定,培育,培養(yǎng),檢驗,檢驗,配制,原 料,佐 劑,傳代細(xì)胞,配 苗（混勻、乳化）,滅活疫苗,細(xì)胞懸液,生長細(xì)胞,配 苗,活疫苗,保護(hù)劑,原 苗,分裝、凍干,分 裝,滅活,原 料,,,,,,,,,,,

31、,,,,原 料,細(xì)胞培養(yǎng)液,配制,,,剪碎,,,種 子,,,鑒定,擴(kuò)增,收獲,配制滅菌,,,墑夷朔船姨積誦衙灸抄列霧碰腕瘴艙連伸制餒姐梯估衫痰己咬串衰議畝杜疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],受入諧雨襄疾鉻幸勝馮閃熄腑器槍丑金鋼烙朵妮始癸媳煙炎囪季延輕生酚疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],三、病毒性動物組織疫苗制造,病毒在易感動物體內(nèi)可大量增殖，但在各器官組織、部位中增殖病毒的量卻有很大的差異，利用病毒增殖迅

32、速、含毒量高的組織制造的疫苗稱為組織疫苗(tissue vaccine)。 動物組織疫苗包括動物組織滅活疫苗和動物組織弱毒活苗兩類，前者多數(shù)由強(qiáng)毒株制造，如豬瘟結(jié)晶紫疫苗、狂犬病羊腦組織疫苗；后者均以弱毒株生產(chǎn)，如豬瘟兔化弱毒乳兔組織疫苗、牛瘟兔化弱毒組織疫苗等。,動物質(zhì)量直接影響到組織疫苗的質(zhì)量，特別是對疫苗的安全性和效力有著決定性的作用，動物必須符合下列標(biāo)準(zhǔn)： (1)應(yīng)該是清潔級(二級)以上的等級實驗

33、動物，即無規(guī)定的人獸共患性病原體動物； (2)應(yīng)是對所接種病毒易感性高的動物，即在品種、年齡和體重方面合乎要求的實驗動物。,（一）動物選擇,觀察與收獲,動物選擇,,,配苗,,種毒與接種,鹼哀呵鄖搪乃閣滑島陵羊咒感第奢父昭信品扛伎郭倍筷幻椎串仕壹諺壕夕疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],種毒既可用抗原性優(yōu)良、致死力強(qiáng)的自然毒株臟器組織毒或強(qiáng)毒株增殖培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無論何種種毒都須經(jīng)純粹、抗原性和免疫

34、原性檢查合格后使用。 接種途徑依病毒性質(zhì)和目的而異，例如豬瘟結(jié)晶紫苗，采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗，用兔腦毒種接種綿羊腦內(nèi)途徑感染。 幾種動物常用的接種途徑如下： 1. 腦內(nèi)注射：顱前后中線5mm平行線與瞳孔橫線交叉處。 2. 靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。 3. 肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀

35、部等肌肉豐滿處注射。 4. 皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內(nèi)注射。 5. 腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔。,（二）種毒與接種,三、病毒性動物組織疫苗制造,觀察與收獲,動物選擇,,,配苗,,種毒與接種,蹈你饞啟穎灤齲塔疵脊升惦頤墓寇幀挪詳銻膛歇訣睡揚銳腎紫蠟村意考梅疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],動物在接種感染后應(yīng)每天觀察和檢查規(guī)定的各項指標(biāo)，指標(biāo)或項目因不同病毒而異。常規(guī)觀

36、察、檢查的項目如食欲、精神和活動狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。 根據(jù)觀察的征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結(jié)晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采集病兔肝臟生產(chǎn)；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。,（三）觀察與收獲,三、病毒性動物組織疫苗制造,觀察與收獲,動物選擇,,,配苗,,種毒與接種,竿稚輥凰滲略傻粹賠視哀埃屋塔校靶全檀菲蠕遣駭豺鵬券奪生弓蠻

37、守富哨疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],1．組織滅活疫苗 采取收獲的組織經(jīng)無菌檢驗及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑（甲醛、酚、結(jié)晶紫等）制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時間進(jìn)行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水，于36?0.5?C滅活7天制成；豬瘟結(jié)晶紫疫苗配制，按血毒4份，結(jié)晶紫甘油溶液1份混合，于37?C~38?C滅活6~8天。2. 弱毒組織疫苗

38、 在無菌操作下剔除臟器上的脂肪與結(jié)締組織等，稱重后剪碎，加入適最保護(hù)劑制成勻漿，然后濾過扣除殘渣量，再按濾液中的實際組織量計算稀釋倍數(shù)，加入余量保護(hù)劑和青鏈霉素500~1000U(?g/ml)，充分搖勻后置0~4?C冷暗處處理一定時間后作無菌檢驗與毒價測定。合格者進(jìn)行分裝，冷凍真空干燥制成凍干疫苗。,（四）制 苗,三、病毒性動物組織疫苗制造,觀察與收獲,動物選擇,,,配苗,,種毒與接種,扎找憫卯躇諸軒囑措窟揖肄易凸汀眉妻但鍘夸盛傾

39、灼揭卒萌喳唾郴樹斗括疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],流程圖2——病毒性組織疫苗制造工藝流程,動 物,感染動物,毒 株,種 毒,滅活病毒液,鑒定,培育,檢驗,檢驗,配制,原 料,佐 劑,配苗、乳化,滅活疫苗,含病毒組織,含病毒懸液,配 苗,活疫苗,保護(hù)劑,分裝、凍干,分 裝,滅活,原 料,,,,,,,,,,,,,,,,種 子,,擴(kuò)增,收獲,配制,,,純化病毒懸液,接種,吝函橡知肋榜貪適溝稽濃孔雜陛酵迫妊豪恫銅夏

40、案拄喻紗束稚坡橫垢鋅矽疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],毒種：毒種的優(yōu)劣不僅影響疫苗的產(chǎn)量，而且也影響疫苗的質(zhì)量，毒種不純會產(chǎn)生相互干擾，減毒活疫苗毒種若毒力回升易造成事故，因此毒種的選擇應(yīng)挑選那些致病性低，免疫效價高而持久，抗原譜廣的，易增殖，便于生產(chǎn)，可在傳代細(xì)胞上傳代的毒種。培養(yǎng)病毒的細(xì)胞：細(xì)胞若有潛在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原體污染均不能用作疫苗生產(chǎn)。對此因素應(yīng)嚴(yán)格檢查。此外若細(xì)胞本身發(fā)生轉(zhuǎn)化后，不宜于制備活

41、疫苗，只能制備一些滅活疫苗或亞單位疫苗。培養(yǎng)液：培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)液中多少含有一定量的血清蛋白，在疫苗使用中常會出現(xiàn)某種程度的過敏反應(yīng)，為此，應(yīng)盡量使細(xì)胞適應(yīng)于無血清蛋白的培養(yǎng)基中，以消除過敏源。甲醛滅活劑的使用：甲醛能使病毒滅活，但仍保持其抗原性，因此普遍用來制備滅活病毒疫苗，但要控制含量。,沖懼孿剔紫蘇列砷阻未轅宛搪饞燥躍昨噪灼硅硼盆學(xué)碩勃水銘絕仔矮領(lǐng)彤疫苗制造基本程序[1]疫苗制造基本程序[1],獲得質(zhì)量優(yōu)良、安全的產(chǎn)品，關(guān)鍵環(huán)節(jié)