胎肝細胞移植加alr治療急性肝衰竭

1、二、立論依據(jù)二、立論依據(jù)（包括項目的研究意義、國內外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻及出處）對基礎研究，著重結合國際科學發(fā)展趨勢，論述項目的科學意義；對應用基礎研究，著重結合學科前沿、圍繞國民經(jīng)濟和社會發(fā)展中的重要科技問題，論述其應用情景。重癥肝炎（又稱暴發(fā)性肝功能衰竭）發(fā)生多與肝炎病毒感染、化學藥物中毒等因素有關，我國又是病毒性肝炎發(fā)生大國，每年都有相當一部分病人患重癥肝炎，每年僅重醫(yī)大附二院傳染科收治的重癥肝炎病人就近幾十例。重癥肝炎

2、以起病急、病情進展快、病死率高為特點，目前對它的發(fā)生機制仍未搞清，因此它嚴重威脅著人們的生命健康。國內現(xiàn)主要以綜合療法治療重癥肝炎，此療法雖對改善疾病的某些癥狀有一定幫助，但并未從根本上改變該病的預后。國外多以肝移植來治療本病，其近期療效明確而肯定，但遠期療效因受免疫排斥反應的制約而不容樂觀。近兩年國內幾家大醫(yī)院也相繼開展了肝移植手術，但受手術復雜性、器官來源以及接受肝移植者需長期服用免疫抑制劑來避免排斥反應發(fā)生所造成的高昂藥費和長期使

3、用免疫抑制劑可能造成腎損害等因素的制約，仍限制了此療法的開展。人和哺乳動物的肝臟具有強大的再生功能，23肝切除后的動物在1015天左右殘存肝臟可恢復到術前體積，而重癥肝炎患者多表現(xiàn)為缺乏這種再生能力。究其原因除了殘存肝細胞不能為機體代謝提供足夠的肝功能支持外，激活的免疫細胞及其產(chǎn)生的炎癥因子仍不斷造成殘存肝細胞壞死，甚至殺傷新生肝細胞，從而嚴重阻礙了肝臟的再生。近年來越來越多的研究證實肝內和浸潤的單核巨噬細胞及其產(chǎn)生的炎癥因子在造成肝細

4、胞大量壞死、殺傷新生肝細胞方面起了極其重要的作用（1，2）。如果抑制或刪除肝內的單核巨噬細胞，或中和炎癥因子就能大大改善肝臟的再生能力（3，4，5）。在這些研究中人們多使用相應的單克隆抗體來刪除或中和單核巨噬細胞和它們產(chǎn)生的炎癥因子。但單克隆抗體多來自小鼠雜交瘤細胞，用于人體治療受到限制。急性肝功能衰竭時如能提供一定數(shù)量的外源性肝細胞和某種能抑制肝內單核巨噬細胞功能的物質，起到既阻止殘存肝細胞進一步壞死和殺傷新生肝細胞，又能避免外源性肝

5、細胞遭到排斥，同時還能支撐機體代謝需要，減輕殘存肝細胞的負擔，使它們有足夠時間再生，達到治愈肝功能衰竭的目的。眾多的動物實驗已證明肝細胞移植加免疫抑制劑可滿足這一目的（6，7，8），但免疫抑制劑都是非特異地抑制機體的整個免疫系統(tǒng)，在降低免疫反應的同時也降低了機體的抵抗力，常常引起嚴重的繼發(fā)感染，而且免疫抑制劑多有嚴重的毒副作用，如臨床常用的環(huán)孢霉素A就有嚴重的腎毒性，這些在重癥肝炎常是導致病人死亡的危險因素。1994年Hagiya從乳鼠

6、肝臟中分離出一種能促進肝臟再生的物質，并克隆了它的cDNA，為它取名為肝再生增強因子（augmenterofliverregeneration，ALR）（9）。我們已從人胎肝組織中克隆出人ALRcDNA，成功構建了它的真、原核重組表達質粒，并進行了高效表達（10，11）。新近的研究發(fā)現(xiàn)ALR能通過抑制肝內NK細胞的活性來促進肝細胞再生（12，13）。在胎胰島細胞移植加ALR治療糖尿病大鼠的研究中也發(fā)現(xiàn)，凡在移植細胞部位加注ALR的大鼠血

7、糖都恢復到正常水平，而單獨接受胎胰細胞移植治療的大鼠無一只血糖恢復正常，說明ALR使移植的胎胰細胞避免了排斥反應，能存活并發(fā)揮功能（14）?；谶@些最新研究成果，我們擬探討胎肝細胞移植與ALR聯(lián)合運用治療急性肝功能衰竭的可行性及其相關機制，期望為臨床治療重癥肝炎找到確實有效，又經(jīng)濟可行的治療方法；同時探索胎肝細胞的最佳凍存、復蘇條件，評價凍存細胞作為供者細胞的可行性，為今后臨床應用時出現(xiàn)供者細胞短缺提供解決辦法；并通過本研究觀察在急性肝

8、損傷時血和肝組織中ALR和TNFα、IL1等炎癥因子的變化關系，進一步闡明ALR的作用機理。2NikolaLVLenzoPAlessroAetal.ChangesofliverresidentNKcellsduringliverregenerationinrats.JImmunology1995154:632463383BlazkaMEElwellMRHolladaySDetal.Histopathologyofacetaminophe

9、ninducedliverchanges:oleofinterleukin1alphatumnecrosisfactalpha.ToxicolPathol199624:1811894TamuraFMasuharaASakaidaIetal.FK506promatesliverregenerationbysuppressingnaturalkillercellactivity.JGastroenterolHepatol199813:703

10、7085BoultonRAAlisonMRGoldingMetal.Augmentationoftheearlyphaseofliverregenerationafter70%partialhepatectomyinratsfollowingivekuffercelldepletion.JHepatol199829:2712806TakeshitaKIshibashiHSuzukiMetal.Hepatocellulartranspla

11、ntationfmetabolicsupptinexperimentalacuteischemicliverfailureinrats.CellTransplant19932:3193247DemetriouAAReisnerASanchezJetal.Transplantationofmicrocarrierattachedhepatocytesinto90%partiallyhepatectomizedrats.Hepatology

12、19888:100610098MitoMSusanoMSawaMetal.Hepatocytetransplantationfhepaticfailure.TransplantRev19937:35439MichioHagiyaAntonioFrancavillaLenzoPolimenoetal.Cloningsequenceanalysisoftherataugmenterofliverregeneration(ALR)gene:E

13、xpressionofbiologicallyactiverecombinantALRdemonstrationoftissuedistribution.Proc.Natl.Acad.Sci.USA199491:8142814610.中華肝臟病雜志。19997(3)11.中華肝臟病雜志2000；8（1）12.FrancavillaAVujanovicNLPolimenoLetal.Theinvivoeffectofhepatotroph

14、icfactsaugmenterofliverregenerationhepatocytegrowthfactinsulinlikegrowthfactIIonlivernaturalkillercellfunctions.Hepatology199725:41141513.TanigawaKSakaidaIMasuharaMetal.Augmenterofliverregeneration(ALR)maypromoteliverreg

15、enerationbyreducingnaturalkiller(NK)cellactivityinhumanliverdiseases.JGastroenterol200035:11211914.AdamsGAMaestriMSquiersECetal.Augmenterofliverregenerationenhancesthesuccessratsoffetalpancreastransplantationinrodents.Tr