肝組織端粒酶、Cyclin D1 mRNA在微囊化肝細(xì)胞移植治療急性肝衰竭大鼠模型中的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的： 本實(shí)驗(yàn)將微囊化肝細(xì)胞移植入急性肝衰竭(Acuteliverfailure，ALF)大鼠腹腔內(nèi)，檢測(cè)觀察大鼠肝功能和肝組織中端粒酶、CyclinDlmRNA的動(dòng)態(tài)變化，初步研究微囊化肝細(xì)胞腹腔移植后肝衰竭大鼠肝細(xì)胞的增殖情況及肝組織中端粒酶、CyclinDlmRNA的變化和意義。 方法： 1.用Seglen改良二步胰酶灌注法對(duì)健康大鼠肝臟進(jìn)行肝細(xì)胞分離及純化，與2.0％海藻酸鈉等材料混勻，在自制裝置下制備微

2、囊化肝細(xì)胞。 2.隨機(jī)將雄性成年SD大鼠分成正常對(duì)照組和造模組。造模組大鼠通過腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)，建立急性肝衰竭大鼠模型，將造模動(dòng)物隨機(jī)分成3組：Ⅰ組為ALF模型組；Ⅱ組為裸肝細(xì)胞移植組，于造模后18小時(shí)腹腔內(nèi)植入游離同種異體肝細(xì)胞；Ⅲ組為微囊化肝細(xì)胞移植組，于造模后18小時(shí)腹腔內(nèi)植入微囊化同種異體肝細(xì)胞。造模后24h、48h、72h、120h、168h分別從各組中隨機(jī)取8只大鼠(Ⅰ組尚需觀察6h、12h)，

3、留門靜脈血觀察肝功能變化，取肝組織用半定量RT-PCR方法檢測(cè)端粒酶、CyclinDlmRNA的動(dòng)態(tài)變化。 結(jié)果： 1.每只大鼠分離純化后所得肝細(xì)胞經(jīng)0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色判斷細(xì)胞產(chǎn)量可達(dá)5×107以上，率達(dá)90％以上。在自制裝置下制備微囊化肝細(xì)胞，經(jīng)0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色后85％以上肝細(xì)胞成活，微囊大小在400μm-800μm之間。 2.模型建立24h后，大鼠表現(xiàn)為極度虛弱、食欲明顯減退、嗜睡、抽搐、昏迷等。肝病理學(xué)表

4、現(xiàn)為肝細(xì)胞壞死廣泛而嚴(yán)重，出現(xiàn)彌漫性的大片壞死，細(xì)胞溶解，肝索解離，小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，肝竇明顯擴(kuò)張并出血，小葉內(nèi)及匯管區(qū)有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，殘存肝細(xì)胞水腫變性，這表明急性肝功能衰竭動(dòng)物模型成功建立。 3.各組大鼠肝功能檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，造模后6h，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)均已顯著升高(P＜0.05)，以48～72h之間為著。48h開始，Ⅱ、Ⅲ組ALT、AST較Ⅰ組明顯下降(P＜0.0

5、5)。Ⅲ組在48、72h時(shí)肝功能下降較Ⅱ組明顯(P＜0.05)。另外TBiL在Ⅰ組造模后逐漸升高，72h達(dá)最高峰，Ⅱ、Ⅲ組與Ⅰ組相比，48h、72h、120h均明顯下降(P＜0.05)，其中在48h、72hⅢ組較Ⅱ組下降更明顯(P＜0.05)。模型組、裸肝組和微囊組大鼠生存率分別是26.7％(4/15)、40.0％(6/15)、73.3％(11/15)，微囊組較模型組、裸肝組大鼠生存率有顯著性提高(P＜0.05)。 4.Ⅱ、Ⅲ組

6、端粒酶、CyclinDlmRNA均在72h、120h和168h較Ⅰ組有明顯升高(P＜0.05)，Ⅲ組端粒酶、CyclinDlmRNA在120h和168h均較Ⅱ組有明顯升高(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.腹腔注射D-GalN1.4g/kg一次性造模成功，大鼠狀態(tài)、死亡率、肝臟組織學(xué)及生化學(xué)改變符合ALF。 2.Seglen改良二步胰酶灌注法對(duì)健康大鼠肝臟進(jìn)行肝細(xì)胞分離及純化，所得肝細(xì)胞產(chǎn)量及活率符合HCT的要求。肝