動態(tài)觀察微囊化肝細胞移植對急性肝衰竭大鼠Toll樣受體4和CD14的影響.pdf

1、[目的]1.動態(tài)觀察微囊化肝細胞移植對急性肝衰竭大鼠預后的影響. 2.動態(tài)觀察微囊化肝細胞移植對LPS、Tol 1樣受體4和CDl4的影響及它們與預后的相關性. [方法]1.用0.15﹪胰酶分離原代肝細胞,海藻酸鈉一多聚賴氨酸一海藻酸鈉制備微囊. 2.用D-氨基半乳糖誘發(fā)急性肝衰竭動物模型,18小時后將造模動物隨機分成3組:1組為模型組,2組為裸肝細胞移植組,3組為微囊化肝細胞移植.在造模后的24h、36h、48

2、h、72h、120h、168h和240h,動態(tài)觀察3組大鼠形態(tài)學,監(jiān)測肝生化指標.用鱟試劑檢測LPS、RT-PCR檢測toll樣受體4mRNA和免疫組織化學檢測CD14蛋白表達的動態(tài)變化. [結果]1.原代肝細胞分離:大鼠肝細胞產量約為8×10<'7>/只,存活率大于90﹪;微囊化肝細胞存活率約80﹪. 2.微囊組ALT、AST和TB明顯下降,ALT在36h、48h、72h、120h、168h和240h與模型組有統(tǒng)計學意

3、義(P<0.05或P<0.01),在36h、48h和72h與裸肝組有統(tǒng)計學意義(P<0.01);AST在36h、48h、72h和120h與模型組有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),在36h、48h和72h與裸肝組有統(tǒng)計學意義(P<0.01);TB在48h、72h、120h和168h與模型組有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),在36h、48h和72h與裸肝組有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01).模型組、裸肝組和微囊組

4、大鼠生存率分別是26.7﹪(4/15)、40.0﹪(6/15)、73,3﹪(11/15),微囊組較模型組、裸肝組大鼠生存率有顯著性提高(P≤0,05). 3.微囊組LPS、Toll樣受體4mRNA和CD14蛋白明顯降低,LPS在24h、36h、48h、72h、120h和168h與模型組有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),在48h和72h與裸肝組有統(tǒng)計學意義(P<0.01);TLR4mRNA在36h、48h和240h與模型

5、組有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),在36h和48h與裸肝組有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01);CD14蛋白在36h、48h和72h與模型組有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),在36h、48h、72h和240h與裸肝組有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01). 4.模型組和微囊組Toll樣受體4mRNA、CD14蛋白與ALT、AST、LPS均具有正相關性(P<0.01);裸肝組中LPS和toll樣受體4mRNA、CD14蛋白相關性

6、無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但toll樣受體4mRNA、CD14蛋白和ALT、AST具有正相關性(P<0.01). [結論]1.胰酶分離的原代肝細胞存活率和產量均較高,且費用低廉,有廣闊的應用前景.海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉制備微囊效果理想. 2.微囊化肝細胞移植可以明顯改善急性肝衰竭大鼠的肝生化功能,較裸肝細胞移植更加顯著,有望成為肝移植的新型替代治療手段. 3.Toll樣受體4mRNA、CDl4蛋白與A