血液學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) - 教學(xué)資源

1、血液病檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)血液病檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一、活化凝血時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)一、活化凝血時(shí)間測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】同試管法CT測(cè)定。試驗(yàn)中加入白陶土腦磷脂的懸液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ，并為凝血反應(yīng)提供豐富的催化表面，故稱為活化凝血時(shí)間（ACT）；還可以避免因接觸激活階段的不同結(jié)果帶來(lái)的影響，從而提高了本試驗(yàn)的敏感性和重復(fù)性?！驹噭┰噭?腦磷脂的制備腦磷脂是將兔腦粉中的組織凝血活酶除去參與外源凝血途徑的蛋白部分后所得的磷脂，故又稱部分凝血活

2、酶。取干燥兔腦粉1.2g加25ml丙酮，放置2h后過(guò)濾，將此兔腦粉加氯仿25ml，連續(xù)震蕩2h，以濾紙過(guò)濾，濾液蒸發(fā)后為淡黃色蠟狀物，刮入玻璃研缽中，加12ml生理鹽水研磨成均勻乳劑，以每安瓶0.25ml分裝。24%白掏土懸液白陶土2g加入50ml生理鹽水中，室溫保存，用前搖動(dòng)。34%白陶土腦磷脂懸液將腦磷脂用巴比妥緩沖液作1：50稀釋后，再加等量4%白陶土懸液混合而成。4οC可保存3天，用時(shí)充分混合。4巴比妥緩沖液巴比妥鈉11.75g

3、、NaCl14.67g、0.1molL的HCl430ml，加蒸餾水至2000ml。此緩沖液pH應(yīng)為7.3，否則影響試驗(yàn)穩(wěn)定性?！静僮鞣椒ú僮鞣椒ā?在含4%白陶土腦磷脂懸液0.2ml的試管中注入受檢全血0.5，輕輕混勻。2其余操作同試管法CT測(cè)定?！緟⒖贾祬⒖贾怠?.700.76(1.14～2.05)min。【臨床意義臨床意義】1同試管法CT測(cè)定，但較其敏感，重復(fù)性也較好，可檢出因子Ⅷ：C小于45%的亞臨床型血友病。2是監(jiān)測(cè)體外循環(huán)肝素

4、用量的良好指標(biāo)之一。實(shí)驗(yàn)二、血漿游離血紅蛋白測(cè)定實(shí)驗(yàn)二、血漿游離血紅蛋白測(cè)定（鄰一甲聯(lián)苯胺法）【實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】鄰一甲聯(lián)苯胺在酸性溶液中和過(guò)氧化氫與血紅蛋白共同作用生成氧化型聯(lián)苯胺，產(chǎn)生綠色→藍(lán)色→紫色，其顏色的深淺與血漿游離血紅蛋白的含量呈正相關(guān)?！驹噭┰噭?2gL鄰一甲聯(lián)苯胺溶液稱取鄰一甲聯(lián)苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸餾水至100ml置于棕色瓶?jī)?nèi)于冰箱保存，色變暗應(yīng)重配。21%過(guò)氧化氫溶液用30%過(guò)氧化氫原液新鮮配制。

5、310%冰醋酸溶液。取10ml冰醋酸，加蒸餾水至100ml。4血紅蛋白應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液將血紅蛋白貯存液用生理鹽水稀釋成10mg100ml備用。5抗凝試管取0.2ml100Uml肝素于試管內(nèi)，在80℃以下烘干，每管可抗凝2ml1取靜脈血分離血清，避免溶血。2取受檢血清0.4ml，與等量高鐵Hb溶液混合。3取上述混合液0.2ml，加入于已預(yù)溫（25℃）的愈創(chuàng)木酚5ml溶液中，再加入0.5ml0.3%過(guò)氧化氫，于25℃水浴內(nèi)作用8min，注意避光。

6、每份標(biāo)本均應(yīng)雙份同時(shí)測(cè)定。4用蒸餾水調(diào)“0”點(diǎn)，440nm處讀取吸光度。5由校正曲線查出受檢血清中Hp含量?！举|(zhì)量控制質(zhì)量控制】1受檢血清要避免溶血。2電泳時(shí)溫度不能過(guò)高，應(yīng)把電泳槽置于冷水中電泳。否則電泳效果差，區(qū)帶不易區(qū)分。3電泳液應(yīng)經(jīng)常更換，防止因pH及離子強(qiáng)度改變對(duì)電泳效果的影響?！緟⒖紖^(qū)間參考區(qū)間】0.2～1.9gHbL?！九R床意義臨床意義】Hp可與Hb結(jié)合，以除去血循環(huán)中游離的Hb。各種溶血性貧血，無(wú)論血管內(nèi)溶血還是血管外溶

7、血，血清中Hp含量均明顯降低，甚至測(cè)不出。Hp降低的程度與溶血程度呈正相關(guān)，即溶血越嚴(yán)重，血清Hp越低。如果血管內(nèi)溶血超出Hp的結(jié)合能力，即可出現(xiàn)血紅蛋白尿。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)表明，急性溶血開(kāi)始，血循環(huán)中游離Hb即迅速增加，隨著HbHp復(fù)合物的有效清除，血清Hp也隨之恢復(fù)正常，因此血清Hp與游離Hb同時(shí)測(cè)定對(duì)溶血性貧血的診斷及療效觀察均具有重要意義。肝病、傳染性單核細(xì)胞增多癥和先天性無(wú)Hp血癥，Hp亦降低，故診斷溶貧時(shí)應(yīng)除外上述疾患。感染、創(chuàng)傷、

8、腫瘤、肝外阻塞性黃疸及類固醇激素治療時(shí)Hp可增加，這些情況下Hp正常也不能除外溶血。醋纖膜電泳有助于區(qū)別血管內(nèi)抑或血管外溶血。各種溶血性貧血患者Hp均顯著減少，甚至缺如，故電泳后無(wú)HbHp區(qū)帶，而僅有一條未結(jié)合的Hb區(qū)帶。但顯著血管內(nèi)溶血（如PNH）時(shí)，還出現(xiàn)一條高鐵血紅素白蛋白區(qū)帶，而血管外溶血（如球形紅細(xì)胞增多癥）則無(wú)此區(qū)帶。實(shí)驗(yàn)四、尿含鐵血黃素試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四、尿含鐵血黃素試驗(yàn)（Rou’stest）【實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】含鐵血黃素中的高鐵