人神經(jīng)干細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的： 脊髓損傷是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病，隨著交通和建筑事業(yè)的迅速發(fā)展，近年來(lái)脊髓損傷的發(fā)病率有上升趨勢(shì)。根據(jù)報(bào)道SCI患者在美國(guó)每年新增病例超過(guò)11000例，我國(guó)的年發(fā)生率約為60/100萬(wàn)。脊髓損傷常導(dǎo)致?lián)p傷節(jié)段平面以下感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)功能不同程度的喪失和大小便失禁，給病人自身帶來(lái)終生的生理、心理痛苦，嚴(yán)重降低了病人的生活質(zhì)量，同時(shí)也給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。 脊髓損傷的治療一直是神經(jīng)科學(xué)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)，傳統(tǒng)

2、觀點(diǎn)認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，由于神經(jīng)元自身再生能力差和外在微環(huán)境的抑制，損傷神經(jīng)是不可再生的。直至1981年Aguayo等研究發(fā)現(xiàn)損傷后的中樞神經(jīng)軸突在合適的環(huán)境中可以再生。研究者以減輕或阻止繼發(fā)性損害和支持、誘導(dǎo)神經(jīng)再生兩大指導(dǎo)思想進(jìn)行了大量脊髓損傷修復(fù)的研究，細(xì)胞移植是其中的一大研究熱點(diǎn)，自Reyonlds等于1992年在Science上首次報(bào)道從成年鼠紋狀體分離出神經(jīng)干細(xì)胞以來(lái)，神經(jīng)干細(xì)胞因具有獨(dú)特的生物學(xué)特性，使其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)

3、疾病的應(yīng)用受到極大的關(guān)注。大量的研究證明，在脊髓損傷的修復(fù)治療中NSCs有著廣闊的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)國(guó)內(nèi)外神經(jīng)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷的前沿研究，通過(guò)將流產(chǎn)胎兒海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞移植到脊髓損傷大鼠對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)的存活和分化，損傷部位髓鞘再生以及大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)進(jìn)行檢測(cè)，做了較系統(tǒng)的對(duì)照研究，為該領(lǐng)域進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法： 取2-3個(gè)月流產(chǎn)胎兒海馬區(qū)組織培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，神經(jīng)巢蛋白(nesti

4、n)抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫染色鑒定神經(jīng)干細(xì)胞。移植前使用CM-DiI熒光染料標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞。NYU打擊器致大鼠T10脊髓損傷，傷后第8天對(duì)大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分后隨機(jī)分為移植組和對(duì)照組，傷后第9天進(jìn)行細(xì)胞移植，通過(guò)組織冰凍切片免疫熒光化學(xué)檢測(cè)NSCs存活及其向神經(jīng)細(xì)胞分化情況，超微結(jié)構(gòu)觀察軸突再生情況，BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分觀察大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，分析和評(píng)價(jià)人神經(jīng)干細(xì)胞異體移植對(duì)脊髓損傷的修復(fù)作用。 結(jié)果： 1.建立人神經(jīng)干細(xì)胞

5、體外培養(yǎng)體系，分離培養(yǎng)的細(xì)胞呈神經(jīng)球樣懸浮生長(zhǎng)，經(jīng)鑒定為神經(jīng)干細(xì)胞，CM-DiI標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞，熒光強(qiáng)度合適，且不影響干細(xì)胞活性。 2.組織間接免疫熒光染色檢測(cè)到NeuN、CNPase、GFAP、MBP、Nestin陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞，激光共聚焦顯微鏡觀察提示hNSCs在成鼠損傷脊髓中可分化為神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞及星型膠質(zhì)細(xì)胞；并且術(shù)后8周仍有部分NSCs保持未分化狀態(tài)。移植組穿越瘢痕區(qū)的再生軸突多于對(duì)照組、從傷后第4周起移植組BB