基因工程總復習

1、第一章第一章1.基因工程：基因工程：利用DNA重組技術，將目的基因與載體DNA在體外進行重組，然后把這種重組DNA分子引入受體細胞，并使之增殖和表達的技術2基因克?。夯蚩寺。涸诜肿由飳W上，人們把將外源DNA插入具有復制能力的載體DNA中，轉(zhuǎn)入宿主細胞使這得以永久保存和復制的過程稱為基因克隆。（基因工程或重組DNA技術則側重于驗證上述過程所獲得遺傳物質(zhì)新組合在宿主細胞內(nèi)的表達與功能鑒定）3.3.重組重組DNADNA技術技術（Recom

2、binantDNATechnique）是人類根據(jù)需要選擇目的基因（DNA片段）在體外與基因運載體重組，轉(zhuǎn)移至另一細胞或生物體內(nèi)，以達到改良和創(chuàng)造新的物種和治療人類疾病的目的。4.4.基因操作：基因操作：對生物體的遺傳物質(zhì)進行人為的操作，使之發(fā)生修飾和改變的過程。簡答簡答說明基因工程的理論基石和技術基礎說明基因工程的理論基石和技術基礎理論基石（三大發(fā)現(xiàn)）：DNA是遺傳信息的載體；DNA的雙螺旋機構模型及其半保留復制機理；中心法則和遺傳密碼

3、及其通用性。技術基礎（三大發(fā)明）：DNA的體外切割和連接；載體和宿主的發(fā)現(xiàn)、改造和利用；DNA測序、電泳分離和分子雜交（Southern、Nthern和WestBlot）簡述基因工程研究的主要內(nèi)容簡述基因工程研究的主要內(nèi)容1）克隆載體的研發(fā)2）受體系統(tǒng)的研發(fā)3）目的基因研究4）工具酶5）新技術研究（基因槍、放射性同位素探針、PCR等）簡述基因工程的主要應用領域簡述基因工程的主要應用領域1）基因工程藥物（重組活性多肽或蛋白、疫苗和DNA疫

4、苗等）2）轉(zhuǎn)基因作物（抗病、抗蟲、抗除草劑、抗逆及生物反應器等）3）轉(zhuǎn)基因動物（乳腺生物反應器）4）工業(yè)（纖維素酶、釀造業(yè)菌株、抗菌素生產(chǎn)菌株的工程改造，等）5）環(huán)保（生物降解塑料原料基因工程和生物防治農(nóng)藥污染基因工程等）用5個詞描述基因工程的過程。個詞描述基因工程的過程。（找、剪、連、轉(zhuǎn)、選）第二章第二章天然天然DNADNA的制備的制備DNADNA變性變性：是指雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結構破壞，形成單鏈無規(guī)線團狀態(tài)的過程。DNADNA復

5、性：復性：變性的DNA的互補鏈在適當條件下重新締合成雙螺旋的過程稱為DNA的復性。TmTm值：將紫外吸收的增加量達最大量的一半時的溫度值稱為熔解溫度（Tm）簡述簡述DNADNA與基因工程有關的主要特性。與基因工程有關的主要特性。1）變性：在一定的條件下，DNA雙鏈因鏈間氫鍵破壞而解鏈的過程。如溫度變性，90℃足以使所有的DNA變性；其他如pH、離子強度、脫水劑等。2）復性：變性DNA分子因鏈間氫鍵恢復而重新形成雙鏈DNA的過程。若是溫度

6、變性，當緩慢降低溫度時，該過程得以進行。以上是PCR反應的依據(jù)。3）帶電性：一般pH下，帶負電荷，可電泳分離。4）水溶解性：DNA屬于生物大分子，且?guī)щ姾?，通常分子外形成水膜，可溶于水；但當電荷變化（如等電點）或水膜破壞時，就會沉淀，這是DNA提取和分離的依據(jù)。1，利用不同的限制性核算內(nèi)切酶切割目的基因的兩端，以形成不同的粘性末端2，在克隆載體的插入位置設置對應的兩種不同的內(nèi)切酶位點，經(jīng)對應的內(nèi)切酶切割后形成與目的基因互補的粘性末端3，

7、DNA連接酶處理目的基因和克隆載體（克隆載體插入位置上設置兩個不同的限制性內(nèi)切酶位點，在外源DNA分子兩端也放上相應的兩個限制性酶切序列，經(jīng)限制性酶消化后，所產(chǎn)生的DNA黏性末端分別互補結合，外源DNA就可定向插入載體。）說明限制性核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生說明限制性核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生StarStar活性的原因及其克服措施?；钚缘脑蚣捌淇朔胧Ｏ拗泼傅南拗泼傅腟tarStar活性：活性：在特定條件下，某些酶在非識別序列處切割DNA的現(xiàn)象稱為Star

8、活性。Star活性因限制酶種類、DNA和反應條件的不同而不同，一般是由于一下原因：高濃度酶、高濃度甘油、低離子強度、Mn2取代Mg2或高pH。克服措施：①減少酶的用量，以避免過分酶切②減少甘油濃度③保證反應體系中無有機溶劑或乙醇④提高離子強度到100~150mmolL⑤降低反應PH至PH7.0⑥保證使用Mg2作為二價陽離子等第4、5章分子克隆載體分子克隆載體1.1.載體：載體：能將所承載的外源DNA片段（基因）帶入受體細胞，并在其中得以

9、維持的DNA分子。2.2.表達載體：表達載體：含有強啟動子、外源基因可在啟動子的控制下轉(zhuǎn)錄成mRNA，并最終以蛋白質(zhì)的形式在宿主細胞中表達的載體。3.3.報告載體報告載體：一種易于用生化方法檢測表達產(chǎn)物的基因作為報告基因，通常由pBasic、pEnhancer、pPromoter、pControl組成的載體。4.4.質(zhì)粒載體：質(zhì)粒載體：以質(zhì)粒DNA分子為基礎構建而成的載體，主要用于原核生物和植物的基因轉(zhuǎn)移以及建立基因組文庫和cDNA基因

10、文庫。5.5.質(zhì)粒：質(zhì)粒：細菌細胞內(nèi)一種自我復制的環(huán)狀雙鏈DNA分子，能穩(wěn)定地獨立存在于染色體外，并傳遞到子代，一般不整合到宿主染色體上。6.cccDNA6.cccDNA：超螺旋共價閉環(huán)DNA分子7.7.遷移作用：遷移作用：由共存的結合型質(zhì)粒引發(fā)的非結合型質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象稱為遷移作用。8.8.接合質(zhì)粒：接合質(zhì)粒：含tra基因的質(zhì)粒，分子較大，拷貝數(shù)較少，宿主廣，不安全，使用時應特別注意（tra基因，指令產(chǎn)生菌毛（pilus），促使宿主與受